新疆地區局部晚期宮頸癌血清VEGF-C、D水平與淋巴結轉移及放療后復發的相關性

楊　杰　張澤高　普拉提·努爾別克

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新疆地區局部晚期宮頸癌血清VEGF-C、D水平與淋巴結轉移及放療后復發的相關性

楊杰張澤高普拉提·努爾別克

目的探討新疆地區宮頸癌血清VEGF-C、D亞型水平與淋巴結轉移及放療后復發或淋巴結轉移的相關性。方法納入擬行根治性放化療的宮頸鱗狀細胞癌患者100例，采集血液標本，行根治性放化療，并進行1年期隨訪，ELISA法檢測血清VEGF-C、D亞型水平，分析治療前VEGF-C、D與淋巴結轉移的相關性，以及治療后VEGF-C、D與復發或淋巴結轉移的相關性。結果治療前無淋巴結轉移58例，一級淋巴結轉移31例，二級淋巴結轉移11例，血清VEGF-C水平分別為(136.93±68.56)pg/ml，(147.77±76.43)pg/ml，(258.72±98.71)pg/ml，差異有統計學意義(F=12.45，P=0.001)；血清VEGF-D分別為(2237.41±472.38)pg/ml，(2163.43±498.26)pg/ml，(2282.31±509.76)pg/ml，差異無統計學意義(F=0.339，P=0.71)。治療后1年隨訪，患者全部存活，11例出現復發或淋巴結轉移，余89例未出現復發或淋巴結轉移，2組患者在治療前血清VEGF-C分別為(251.33±121.39)pg/ml，(141.62±73.31)pg/ml，差異有統計學意義(t=3.24，P=0.001)，在治療后VEGF-C分別為(327.91±73.12)pg/ml，(153.31±49.38)pg/ml，差異有統計學意義(t=10.45，P<0.001)；而VEGF-D在治療前后均無統計學差異。結論血清VEGF-C水平與宮頸癌淋巴結轉移明顯相關，測定其血清含量有助于宮頸癌治療前陽性淋巴結的輔助診斷，以及放療后復發或淋巴結轉移的判定。而VEGF-D水平與淋巴結轉移無明確關系。

宮頸癌；放射治療；血管內皮生長因子C；淋巴結轉移

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:879～882)

血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是1種促進血管發生和淋巴微管形成的蛋白，其在腫瘤的形成、生長、侵襲過程中具有非常重要的作用。人類VEGF主要有5種亞型：VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和PIGF。通常所稱的VEGF即是指VEGF-A，是表達量最高、研究最多的VEGF。VEGF-C、VEGF-D是2種與淋巴微管形成密切相關的蛋白，目前研究認為其過度表達與腫瘤早期微病灶淋巴轉移有關。本研究探討血清VEGF-C、VEGF-D水平與宮頸癌淋巴結轉移以及放療后淋巴結轉移的相關性。

1　材料與方法

1.1臨床資料

納入 2013年1月至2014年11月在我院行放射治療和隨訪的宮頸鱗狀細胞癌患者100例，其中維吾爾族52例，漢族48例；低分化鱗狀細胞癌23例，中分化鱗狀細胞癌 49例，高分化鱗狀細胞癌28例。按國際婦科聯盟(FIGO)2009年修訂的子宮頸鱗狀細胞癌臨床分期標準ⅠB2期19例，Ⅱa2～Ⅱb期45例，Ⅲa～Ⅲb期36例；患者年齡29～75歲，中位年齡64歲，KPS評分大于70分。治療前無淋巴結轉移58例，一級淋巴結轉移，即宮旁、宮頸旁、髂內、髂外、骶前、髂總、閉孔淋巴結轉移31例，二級淋巴結轉移，即腹股溝深、淺、腹主動脈旁轉移11例。

1.2基線資料的采集

所有納入對象進行常規婦科檢查，血常規、肝腎功能、腫瘤標記物SSC檢測，并行盆腔增強核磁、腹膜后增強CT、淺表淋巴結B超。按FIGO標準分期，采集全血樣本，離心后取血清-20 ℃低溫保存。記錄轉陽性區域及數目。其中陽性淋巴結診斷標準：核磁和CT測量短徑≥1.0 cm，或B超探測淋巴結皮髓質界限消失，可見血流信號。

1.3治療方法

所有入組患者均行根治性盆腔大野照射+腔內放療及同步化療，化療采用順鉑周療，40～50 mg/m2，4～6周期。盆腔大野照射采用適形調強技術，腔內放療采用高劑量率锎-252后裝機。盆腔外照射劑量為45～50 Gy，后裝劑量為A點10 Gy/次，共4次。

1.4隨訪

治療后第3、6、12個月隨訪，除常規隨訪內容外，行盆腔CT/MRI以及淺表淋巴結檢查是否有淋巴結復發。采集血液樣品，采用ELISA法檢測VEGF-C、VEGF-D的含量，ELISA試劑盒購自武漢博士德。治療后1年隨訪患者全部存活，局部復發或淋巴結轉移患者11例，其中局部復發3例，淋巴結轉移8例。

1.5統計學處理

數據采用SPSS17處理，計數資料單因素分析采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗或單因素方差分析，檢驗水準α=0.05。

2　結果

2.1治療前不同民族、不同分期患者血清VEGF-C、VEGF-D的比較

臨床分期越晚，患者血清VEGF-C水平越高，差異有統計學意義(F=19.6，P<0.001)，但不同分期患者血清VEGF-D水平無統計學差異(F=2.25，P=0.11)。漢族、維族血清VEGF-C/D差異均無統計學意義(表1)。

表1　治療前不同民族、分期患者血清VEGF-C、VEGF-D的比較

2.2治療前淋巴結轉移與血清VEGF-C、VEGF-D的關系

治療前無淋巴結轉移患者58例，血清VEGF-C含量均值為(136.93±68.56)pg/ml，一級淋巴結轉移患者為(147.77±76.43)pg/ml，二級淋巴結轉移為(258.72±98.71)pg/ml，呈明顯遞增趨勢，三者比較差異有統計學意義(F=12.45，P<0.01)。血清VEGF-D水平，在無淋巴結轉移(2237.41±472.38 pg/ml)、一級淋巴結轉移(2163.43±498.26 pg/ml)、二級淋巴結轉移(2282.31±509.76 pg/ml)患者中比較，差異無統計學意義(F=0.34，P=0.71)。

2.3治療后淋巴結轉移或復發與治療前后VEGF-C、VEGF-D的關系

放療后1年隨訪，所有患者全部存活，有11例患者出現局部復發或淋巴結轉移，其治療前血清VEGF-C水平為(251.33±121.39)pg/ml，明顯高于無復發或轉移患者(t=3.24，P=0.001)；同樣，治療后血清VEGF-C水平復發或淋巴結轉移患者組也明顯高于無復發和轉移組(t=10.45，P<0.001)。但血清VEGF-D水平，2組患者無論在治療前比較，還是治療后比較，差異均無統計學意義(表2)。

表2　放療后淋巴結轉移或復發治療前、后VEGF-C、VEGF-D對比

3　討論

宮頸癌是嚴重威脅婦女健康的最常見的婦科惡性腫瘤之一，其發病率居女性生殖系統惡性腫瘤的第2位，新疆維吾爾族宮頸癌的發病率高于全國平均水平，死亡率居全國首位，并且近年來新疆宮頸癌的發病率一直呈上升趨勢。本項研究入組患者中，維吾爾族占52.0 %。盡管近年來宮頸癌的治療方式和療效有了明顯的提高，但局部復發和轉移仍然是治療失敗的重要原因。

VEGF-C是一種促淋巴微管形成因子，宮頸癌手術和放療后的淋巴水腫是一種極難處理的臨床問題，目前并無有效的治療方法。Schindewolffs等[1]通過大鼠實驗，發現移植淋巴結碎片加上注射VEGF-C可明顯增強淋巴微管的重連和恢復，認為VEGF-C可能是治療繼發性淋巴水腫的重要方法。

張莉等[2]研究表明VEGF-C在腫瘤組織中的表達高于正常組織和癌旁組織，VEGF-C的表達與宮頸癌發展有關。Branca等[3]的研究顯示，VEGF-C的表達與宮頸鱗狀上皮癌具有明顯的相關性。王新玲等[4]對新疆維吾爾族宮頸癌患者血清VEGF-C進行檢測，VEGF-C在宮頸鱗癌和CIN患者中明顯增高，并且與臨床分期、腫瘤的大小及淋巴結轉移呈顯著相關。本項研究的結果也顯示血清VEGF-C的含量與宮頸癌的臨床分期密切相關，無論是治療與否，有淋巴結轉移患者，血清VEGF-C水平明顯高于無淋巴結轉移患者。但漢族、維族血清VEGF-C/D差異均無統計學意義，可能與樣本量少有關。

目前關注最多的研究是VEGF-C與腫瘤的淋巴結轉移的關系，并且這些研究結論一致認為VEGF-C與腫瘤淋巴結相關。Zhang等[5]對66例非小細胞肺癌及部分肺良性腫瘤進行血清VEGF-C檢測，并通過PET-CT，CT等檢測淋巴結轉移，發現采用血清VEGF-C診斷淋巴結轉移的敏感性達65.0%，特異性達72.2%，認為血清VEGF-C水平可作為非小細胞肺癌有無淋巴結轉移的重要參考。Yang等[6]的研究發現，VEGF-C和VEGF-D在食管癌組織中的表達顯著高于癌旁組織，有淋巴結轉移的食管癌患者VEGF-C和VEGF-D的表達顯著高于無淋巴結轉移患者，提示VEGF-C和VEGF-D的高表達可能與食管癌淋巴結轉移相關。DeMei等[7]研究發現，VEGF-C mRNA 與早期宮頸癌根治性手術的術后淋巴結復發以及5年生存率明顯相關，多因素分析結果顯示VEGF-C mRNA的高表達是淋巴結復發的獨立預測因子。在本項研究中，對宮頸癌患者治療前血清VEGF-C/D進行檢測，發現VEGF-C與淋巴結轉移級別存在明顯相關性，而VEGF-D并無這種相關性。并且，在治療后1年隨訪有淋巴結轉移和無淋巴結轉移患者之間比較，治療前、治療后VEGF-C均存在差異，有淋巴結轉移組顯著高于無淋巴結轉移組，而VEGF-D在2組之間，治療前后比較均無差異。

VEGF-C是如何導致淋巴結轉移的機制目前還不清楚，Wang等[8]的研究結果顯示VEGF-C在三陰乳腺癌(claudin-low亞型)中高表達導致腫瘤進展，其機制不僅通過淋巴管微管的形成，而且還通過調節腫瘤初始細胞，對活性氧的反應，認為Nrp2是VEGF-C的受體，調節Sod3的表達從而改變腫瘤細胞對氧化應激的反應。Su等[9]的研究表明，VEGF-C通過Scr介導的下調miR-326上調皮動蛋白(CTTN)的表達，從而增強食管癌細胞的轉移和侵襲能力。Omoto等[10]通過免疫組織化學檢測119例食管鱗癌患者病理切片中VEGF-C，VEGFR-3，以及淋巴微管密度(MLVD)，發現他們之間存在明顯的相關性，并且VEGF-C的表達與淋巴結轉移，淋巴侵襲具有顯著相關(P<0.0001)，聯合表達VEGF-C 和 VEGFR-3預示著高的MLVD和較差的預后，VEGF-C/VEGFR-3則可能是腫瘤淋巴轉移的機制。

無論機制如何，檢測血清VEGF-C水平，或許有助于對宮頸癌治療前淋巴結轉移的評估以及放化療后復發或淋巴結轉移的預測，血清VEGF-D水平與淋巴結轉移尚未觀測到明顯關系。

當然，由于本研究僅從血清學上觀測到這一現象，而且樣本量有限，為明確VEGF-C促進淋巴結轉移的確切機制，還需要大樣本、組織學和分子學方面更進一步的研究。

[1]Schindewolffs L，Breves G，Buettner M，et al.VEGF-C improves regeneration and lymphatic reconnection of transplanted autologous lymph node fragments：An animal model for secondary lymphedema treatment〔J〕.Immun Inflamm Dis，2014，2(3)：152-161.

[2]張莉，盛修貴，王健，等.宮頸癌組織VEGF-C表達及其臨床意義的初步探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2011，18(16)：1252-1254.

[3]Branca M，Giorgi C，Santini D，et al.Aberrant expression of VEGF-C is related to grade of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and high risk HPV，but does not predict virus clearance after treatment of CIN or prognosis of cervical cancer〔J〕.J Clin Pathol，2006，59(1)： 40-47.

[4]王新玲，葛崇華，黃艷春.血清 VEGF- C在新疆維吾爾族婦女宮頸上皮內瘤變及宮頸鱗癌中的表達及意義〔J〕.中國婦幼保健，2011，26(1)：112-114.

[5]Zhang Y，Meng X，Zeng H，et al.Serum vascular endothelial growth factor-C levels：A possible diagnostic marker for lymph node metastasis in patients with primary non-small cell lung cancer〔J〕.Oncol Lett，2013，6(2)：545-549.

[6]Yang Z，Wang YG，Su K.VEGF-C and VEGF-D expression and its correlation with lymph node metastasis in esophageal squamous cell cancer tissue〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2015，16(1)：271-274.

[7]DeMei M，XiangXin L，YongPing X，et al.Vascular endothelial growth factor C expression is closely correlated with lymph node recurrence and poor prognosis in patients with early stage cervical cancer〔J〕.J Int Med Res,2013，41(5)：1541-1549.

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[10]Omoto I，Matsumoto M，Okumura H，et al.Expression of v-

ascular endothelial growth factor-C and vascular endothelial growth factor receptor-3 in esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Oncol Lett，2014，7(4)：1027-1032.

(編輯：甘艷)

Correlation of Serum VEGF-C、D Level with Lymph Metastasis and Recurrence after Radiotherapy of Cervical Cancer in Xinjiang

YANGJie，ZHANGZegao，Pulati-nuerbieke.

People’sHospitalofXinjiangUygurAutonomousRegion，Urumqi，830001

ObjectiveTo investigate the correlation of serum VEGF-C、D level with lymph metastasis and and recurrence after radiotherapy of cervical cancer in Xinjang.Methods100 cases of cervical squamous cell carcinoma were recruited，and the blood samples were collected and well conserved.All the patients were experienced radical chemotherapy，and 1-year follow-up were conducted.Then the serum VEGF-C，D level before and after treatment were detected by ELISA assay.The correlation of serum VEGF-C、D level with lymph and and recurrence after radiotherapy were analyzed.ResultsBefore treatment，there were 58 cases without lymph node metastasis，31 cases with regional lymph node metastasis，and 11 cases with non-regional lymph node metastasis，and their serum VEGF-C were 136.93±68.56 pg/ml，147.77±76.43 pg/ml，258.72±98.71 pg/ml，the difference was statistically significant(F=12.45，P=0.001).There were 11 cases who recurred in lymph node 1 year after treatment，and their serum VEGF-C before theatment were 251.33±121.39 pg/ml，which were statistically higher than those of lymph node negative patients (89 cases，141.62±73.31 pg/ml，t=3.24，P=0.001)，and significant difference were observed between their VEGF-C level post treatment(t=10.45，P<0.001).The VEGF-D had no statistically significant difference before and after treatment.ConclusionSerum levels of VEGF-C is significantly associated with cervical lymph node metastasis，measure serum VEGF-C levels will be beneficial for the diagnosis of lymph node metastasis before treatment，and lymph node recurrence after radiotherapy.The VEGF-D levels have no clear relationship with lymph node metastasis.

Cervical cancer；Radiotherapy；VEGF-C；Lymph node metastasis

新疆維吾爾自治區自然科學基金(編號：2014211A061)；新疆自治區人民醫院院內項目(編號：20120127)

830001 新疆維吾爾自治區人民醫院

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.06.003

R737.33

A

1001-5930(2016)06-0879-04

2016-01-25

2016-04-05)