Citrin缺陷導致新生兒肝內膽汁淤積癥的尿篩查分析

周立蓉（樂山職業技術學院護理系，四川樂山614000）

Citrin缺陷導致新生兒肝內膽汁淤積癥的尿篩查分析

周立蓉
（樂山職業技術學院護理系，四川樂山614000）

目的 探析Citrin缺陷導致新生兒肝內膽汁淤積癥（NICCD）尿液成分篩查的診斷價值和臨床意義。方法 選取該院自2014年1月至2016年1月收治的27例citrin缺陷導致NICCD患兒，采用濾紙尿氣相色譜/質譜法（GC/MS）對其尿液中的半乳糖、酪氨酸及其代謝物質進行分析，判斷其在臨床診斷中的價值。結果 27例患兒中，有14例（51.9%）存在半乳糖及酪氨酸代謝異常，7例（25.9%）僅表現出半乳糖代謝異常，1例（3.7%）表現出絲蘇氨酸比例倒置，5例（18.5%）尿液成分無任何異常變化。結論 對NICCD患兒進行尿液篩查，不僅有助于解患兒機體代謝狀況，而且對患兒病癥的確診具有積極作用和意義。

膽汁淤積，肝內； 嬰兒，新生； 基因，突變； 尿分析； 色譜法

Citrin缺陷導致新生兒肝內膽汁淤積癥（NICCD）作為一種先天性遺傳性代謝疾病，在臨床上相對比較少見［1］。通常情況下，NICCD發生后，患兒不僅會存在較為明顯的代謝異常，而且還合并黃疸、肝功能異常及高瓜氨酸血癥、半乳糖血癥、低蛋白血癥等多種代謝疾病［2］，通過尿液成分篩查分析，能夠有效掌握患兒機體代謝狀況，為疾病的診斷提供有效的信息和幫助，具有積極作用和意義。本研究對本院收治的27例NICCD患兒進行了尿液成分變化的篩查分析，探討其臨床診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2014年1月至2016年1月收治的27例NICCD患兒作為研究對象，其中男15例，女12例，年齡2～7個月，平均（3.6±2.3）個月。

1.2 方法

1.2.1 診斷標準 入選患兒均符合Citrin缺陷導致的NICCD診斷標準［3］：病癥發生于新生兒或嬰兒時期，臨床表現為持續黃疸不退、肝酶變化異常，總膽紅素、直接膽紅素及甲胎蛋白（AFP）含量增高，存在低蛋白血癥，凝血功能障礙，確診為SLC25A13基因突變。排除標準：存在其他代謝異常疾病，資料不全患兒。

1.2.2 檢測試劑與儀器 新華濾紙、尿激酶及6890N/ 5973GC/MS聯用儀（日本HITACHI）、正十七烷酸等。

1.2.3 樣本制作 在5 cm×8 cm濾紙上滴加1 mL患兒原尿液，待完全浸透后放置于蔭涼處晾干，并在室溫下進行保存。然后進行濾紙尿制作，制作完成后，將濾紙進行卷曲放置在一次性使用注射器針套內，并在注射器中加入1 mL去離子水，在浸透濾紙后靜置15min，進行離心去蛋白處理，獲取洗脫尿樣本。

1.2.4 氣相色譜/質譜（GC/MS）分析 使用6890N/5973 GC/MS聯用儀進行患兒尿液代謝產物檢測與分析。首先，選取100 μL保存尿液進行解凍、混勻處理，待檢測分析。然后，取尿液樣本100 μL，加入尿激酶，在37℃水溫下放置40 min，再加入1 mL無水乙醇進行混勻后，經離心去蛋白處理，將上清液提取放置于玻璃瓶中在37℃干燥真空條件下保存，其余物質使用9∶1雙甲基硅烷三氟乙酰胺與三羥甲基氯硅烷在80℃溫度環境下持續硅烷化處理40min，對最終反應產物進行GC/MS分析。對尿液中的代謝產物通過隨機質譜儀檢索美國國家標準及技術研究所圖譜庫方式進行鑒定分析，并通過峰下面積計算對尿半乳糖結果進行分析。

GC/MS分析過程中，溫度設置為260℃，傳輸溫度設置為280℃，以高純氦氣作為樣本分析載氣，載氣以恒流狀態保持1 mL/min的流速進行分析應用。同時將離子源溫度設置為250℃，整個分析過程通過程序升溫方式，將起始溫度設置為60℃，并以每分鐘4℃方式進行逐漸提升，最高控制在280℃，每個溫度變化之間保留1 min。最后，進樣檢測以分流方式，每次進樣量為1 μL，進樣分流比控制為1∶50，以確保檢測分析結果的準確性。

1.2.5 檢測方法 對檢測結果進行定量、定性分析。其中，對檢測成分以該物質特征離子峰面積及肌酐特征離子峰面積比值進行半定量表示，半定量計算公式為lg（X+5）。該公式中，X即為檢測物質特征離子峰面積與肌酐特征離子峰面積比值［4］。

2 結 果

27例患兒中，14例存在半乳糖及酪氨酸代謝異常，約占51.9%；7例表現出半乳糖代謝異常，約占25.9%；1例表現出絲蘇氨酸比例倒置，約占3.7%；5例尿液成分未表現出任何異常變化，約占18.5%。圖1為7例半乳糖代謝異常患兒尿篩查結果變化示意圖。

圖1 半乳糖代謝異常患兒的尿篩查質譜圖

3 討 論

臨床上，NICCD作為一種遺傳性代謝疾病，主要是由人體中Citrin蛋白的SLC25A13基因發生突變而引起的一種常染色體異常疾病［5］。其中，Citrin蛋白中SLC25A13基因正常是位于7q51.3內，全長在200 kb左右，包含18個外顯子和17個內含子，并且該基因編碼中還包含675個氨基酸Citrin蛋白［6］，而SLC25A13基因突變必然導致Citrin蛋白存在相應的缺失變化，從而引起NICCD發生。臨床研究顯示，NICCD作為一種全球性疾病，在世界范圍內都有較為廣泛的疾病情況，而我國NICCD患者從地域范圍上劃分，呈現“北低南高”的特征，其中以湖南、廣東地區患者數量最為突出［7］。此外，在臨床研究統計的遺傳性代謝疾病中，NICCD屬于發病率較高的一種病癥類型，其患者發病數量僅低于甲基丙二酸血癥，近年來臨床研究數據顯示，NICCD患者數量呈現不斷增加的變化趨勢［8］，對患者產生的危害越來越突出，因此在臨床研究中也越來越受重視。

通常情況下，NICCD患兒不僅表現出較為明顯的黃疸、肝功能異常等變化，而且多合并有高乳酸血癥、半乳糖血癥和低蛋白血癥、酪氨酸血癥等多種代謝異常病癥［9］。在人體組織中，Citrin作為天門冬氨酸及谷氨酸載體，主要負責將天門冬氨酸向細胞質轉運，同時將細胞質內谷氨酸及質子向線粒體轉運，而Citrin蛋白在體內糖酵解、尿素合成及糖異生、脂類代謝等過程中具有重要作用，而且Citrin蛋白還是上述活動的重要參與者，因此，人體內一旦出現Citrin蛋白缺陷必然會導致人體代謝發生異常，進而產生相應的疾病。在人體代謝異常中，糖及氨基酸代謝異常是最為常見的2種類型，臨床中可以通過串聯質譜分析法或氣相色譜質譜分析法進行分析顯現［10］。本研究通過對本院收治的27例NICCD患兒尿液進行篩查分析顯示，半乳糖代謝異常在患兒代謝異常中所占比率最高。由此可見，NICCD患兒臨床中會發生以半乳糖代謝異常為主的標志性癥狀反應［11］，這對患者病癥診斷及臨床治療具有一定的指導作用和意義。但在實際研究中，對臨床檢查存在有半乳糖代謝異常的患兒來講，根據其氣相色譜質譜分析結果，需要與典型的病理性半乳糖血癥進行區分判斷，以避免影響患兒的診斷和治療。通常情況下，典型的病理性半乳糖血癥多在圍生期發病，并且在進食乳類后幾天內即可出現嘔吐、嗜睡、體質量不增加或拒食等癥狀，然后繼發黃疸或肝臟腫大等病癥，臨床中如果不對患兒的病癥進行及時診斷和治療，繼續進食乳類將會導致患兒病情進一步惡化，進而出現腹水或肝衰竭等終末期癥狀。通常情況下，對病理性半乳糖血癥患兒早期癥狀的診斷，可通過裂隙燈檢查發現患兒晶狀體內白內障形成。而典型性半乳糖血癥作為一種染色體隱性遺傳疾病，是由于半乳糖代謝發生異常所導致的，并且臨床根據代謝異常狀況可以進行不同病癥類型的劃分，臨床中對半乳糖血癥的早期診斷主要依賴于新生兒篩查、尿液篩查等方式進行檢測判斷。本研究NICCD患兒發生的半乳糖血癥屬于一種繼發性病癥，與病理性半乳糖血癥有著根本性區別。因此，臨床上對NICCD患兒進行尿液篩查分析時，對存在半乳糖代謝異常患兒，在病癥診斷分析中應注意與半乳糖血癥進行區別，認識到NICCD患兒的半乳糖血癥作為一種繼發性疾病，與病理性半乳糖血癥在基因突變上存在一定的區別，可以通過基因檢測方式將二者進行區分，以準確判斷患兒的疾病類型，采取有效的治療和控制措施，避免疾病發生。

本研究結果顯示，NICCD患兒尿液半乳糖代謝異常發生率最高，且患兒臨床中可能發生具有標志性的半乳糖血癥，這對患兒病癥的診斷分析具有很大的幫助。此外，結合臨床對NICCD研究情況，NICCD患兒以糖、氨基酸代謝異常最為常見，其中氨基酸代謝異常在NICCD患兒代謝異常中也具有較高的發生率，這就需要在NICCD患兒病情檢測診斷中，結合患兒代謝異常檢測結果進行綜合分析判斷，避免影響對患兒病癥的治療。但需要注意的是，在NICCD患兒氨基酸代謝異常的診斷中，對酪氨酸血癥患兒的檢測診斷應注意和酪氨酸血癥Ⅰ型進行區別。酪氨酸血癥Ⅰ型作為一種遺傳性代謝異常疾病，其尿篩查結果以代謝物質增高為主要變化。而NICCD患兒的代謝異常，能夠通過相應的檢測方法分析得出，臨床中應注意根據檢測結果，通過進一步檢測進行判斷確認。

總之，對NICCD患兒進行尿篩查，有助于了解患兒機體代謝狀況，對疾病的確診具有積極作用和意義。

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2016-05-06）