分散固相萃取-超高效液相色譜-串質(zhì)譜法測定豆芽中10 種植物生長劑和殺菌劑

程盛華,楊春亮,曾紹東,魏曉奕,王明月,李積華

(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工質(zhì)量安全風險評估實驗室,廣東湛江 524001)

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分散固相萃取-超高效液相色譜-串質(zhì)譜法測定豆芽中10 種植物生長劑和殺菌劑

程盛華,楊春亮,曾紹東,魏曉奕,王明月,李積華*

(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工質(zhì)量安全風險評估實驗室,廣東湛江 524001)

建立了一種同時分析豆芽中10種植物生長調(diào)節(jié)劑和殺菌劑的分散固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)的檢測方法。樣品經(jīng)過1%酸化乙腈提取,PSA、C18、GCB吸附劑凈化,UPLC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測模式測定,外標法定量,檢測結(jié)果顯示:多菌靈、6-芐基氨基嘌呤、吲哚乙酸、赤霉素、恩諾沙星、2,4-二氯苯氧乙酸、多效唑、咪鮮胺、涕滅威和甲基托布津10種藥物濃度在5.0～200.0 μg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,加標回收率為80.4%～99.8%,相對標準偏差(RSD%)為2.0%～7.8%,方法檢出限為0.2～2.6 μg/kg。該方法簡單、快速、可靠。串聯(lián)質(zhì)譜法在很大程度上減少了基質(zhì)干擾,減少了假陽性現(xiàn)象的產(chǎn)生。

植物生長調(diào)節(jié)劑，殺菌劑，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，分散固相萃取,豆芽

豆芽具有豐富的食用價值,深受人們的喜愛,但是不少黑心作坊為了縮短豆芽生長周期,增加品相,使豆芽看起來更肥嫩白凈,在生產(chǎn)過程中違規(guī)添加多種植物生長劑和殺菌劑。一些植物生長調(diào)節(jié)劑有蓄積毒性,導(dǎo)致各種疾病的出現(xiàn),如Erin等通過大鼠實驗,發(fā)現(xiàn)赤霉素能引起形成腫瘤的肥大細胞增多[1],而2,4-二氯苯氧乙酸可能引起非霍奇金淋巴瘤[2],濫用植物生長調(diào)節(jié)劑會給健康帶來風險,已成為目前食品安全領(lǐng)域的一個重大問題[3-5]。隨著近年“毒豆芽”事件不斷曝光,政府對食品安全也越來越重視,農(nóng)業(yè)部成立了專門研究豆芽的風險評估中心,深入研究豆芽中的非法添加藥物和對人體健康的危害。國家標準(GB2760-2014)《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》中明確規(guī)定人工合成激素,如2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)不再作為食品添加劑使用,其它植物生長調(diào)節(jié)劑包括天然植物激素如赤霉素、吲哚乙酸也不允許應(yīng)用于豆芽生產(chǎn)中。

植物生長調(diào)節(jié)劑和殺菌劑種類多,包括人工合成農(nóng)藥、植物內(nèi)生激素、抗生素和獸藥,化學性質(zhì)差別大且殘留量低,凈化和測定要求高,目前植物生長調(diào)節(jié)劑和殺菌劑的測定儀器有液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法和液質(zhì)聯(lián)用法[6-10],檢測標準有SN/T 3725-2013和GB/T23381-2009[11-12],豆芽中相關(guān)檢測方法主要集中在單一組分或者是單一類型藥物,如恩諾沙星、6-BA、赤霉素、2,4-D等藥物[13]。多菌靈、恩諾沙星、多效唑和咪鮮胺等藥物主要是具有保鮮和殺菌的作用,6-BA、吲哚乙酸、2,4-D和赤霉素等藥物主要是促進細胞分裂和加快生根的作用[14-16]。QuEChERS(Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe)技術(shù),是近年來國際上最新發(fā)展起來的一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測的快速樣品前處理技術(shù),具有以下優(yōu)勢:回收率、精確度、準確度高,可分析的農(nóng)藥范圍廣,分析速度快,溶劑使用量少,污染小,操作簡便。針對豆芽前處理過程復(fù)雜,檢測參數(shù)單一,采用QuEChERS技術(shù)減少了溶劑消耗,超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定10種植物生長調(diào)節(jié)劑和殺菌劑,縮短了分析時間,該法具有快速、靈敏和準確等優(yōu)點,可以應(yīng)用于豆芽的批量檢測。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

多菌靈(純度≥96.7%)、6-芐基氨基嘌呤(純度≥99.0%)、吲哚乙酸(純度≥96.2%)、赤霉素(純度≥93.6%)、恩諾沙星(純度≥98.5%)標準品德國Dr. Ehrenstorfer公司;2,4-二氯苯氧乙酸、多效唑、咪鮮胺、涕滅威、甲基托布津(100.0 mg/L)標準品農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心;甲醇、乙腈、甲酸、乙酸美國Fisher 公司(均為色譜純);水為Milli-Q系統(tǒng)純化水;1%酸化乙腈(乙酸∶乙腈=1∶100 v/v)、N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基鍵合硅膠(C18)、石墨化炭黑(GCB)分散固相萃取吸附劑上海安譜實驗科技股份有限公司;氯化鈉(用前經(jīng)120 ℃烘干6 h后)和無水硫酸鎂(用前在馬弗爐550 ℃灼燒4 h后)廣州試劑廠,均為分析純,于干燥器中貯存,備用。

ACQUITY TM超高效液相色譜儀和XevoTM TQD-MS質(zhì)譜儀配有電噴霧電離(Electrospray ionization,ESI)接口及Masslynx數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)美國Waters公司;Milli-Q超純水器美國Millipore公司;CR22GⅢ型高速冷凍離心機日本HITACHI公司;AUY220型電子分析天平日本Shimadzu公司;N-Evap112氮吹儀美國Organomation Associates公司;渦旋混合器MS3、分散均漿機T25德國IKA公司;移液槍20～200 μL、1～5 mL德國Eppendorf公司。

1.2樣品制備

黃豆芽、綠豆芽、黑豆芽、豌豆苗均在市場購買,基質(zhì)豆芽選用成熟無蛀蟲的優(yōu)質(zhì)黃豆、綠豆、黑豆、豌豆于實驗室放在無油、底部有小孔的玻璃器皿中浸泡一段時間,上面放一塊吸水的濕布,每天澆水數(shù)次,保持濕度,避光培養(yǎng)4～6 d。

1.3樣品前處理

1.3.1提取準確稱取10.00 g粉碎均勻試樣于50 mL聚乙烯離心管中,加入15 mL 1%酸化乙腈提取液,在均質(zhì)機上以10000 r/min均質(zhì)1 min后,靜置5 min,在4 ℃ 8000 r/min離心5 min,離心后取出上清液,再加入10 mL 1%酸化乙腈提取液,在旋渦混合器上以3000 r/min 渦旋1 min,重復(fù)上述操作,合并提取液,加入7 g 氯化鈉,渦旋1 min,靜置10 min,8000 r/min離心1 min,分離上層有機相于25 mL燒杯中,在45 ℃水浴中氮吹至近干,加2 mL乙腈溶解殘渣,渦旋30 s,待凈化。

1.3.2凈化將待凈化液倒入裝有MgSO4150 mg、PSA 50 mg、C18150 mg、GCB 25 mg的5 mL聚乙烯離心管中,渦旋振蕩1 min,10000 r/min離心6 min,吸取上清液至10 mL離心管中,于45 ℃條件下氮吹至近干,再加1 mL 0.1%甲酸水-甲醇溶液(65-35)溶解,渦旋混合1 min,過0.22 μm微孔濾膜后,UPLC-MS/MS分析。

1.4色譜和質(zhì)譜條件

色譜條件:Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);柱溫40 ℃;樣品室溫度15 ℃;進樣體積5 μL;流速0.3 mL/min;流動相為甲醇,0.1%甲酸溶液;流動相梯度洗脫程序如表1所示。

表1　流動相梯度洗脫程序

質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI);2,4-二氯苯氧乙酸、赤霉素采用負離子模式,多菌靈、6-芐基氨基嘌呤、吲哚乙酸、恩諾沙星、多效唑、咪鮮胺、涕滅威、甲基托布津采用正離子模式;多反應(yīng)監(jiān)測(Multiple Reaction Monitoring,MRM);毛細管電壓2.50 kV;離子源溫度150 ℃;脫溶劑氣溫度500 ℃;脫溶劑氣流量1000 L/h;錐孔氣流速145 L/h;霧化壓力0.6 MPa;碰撞氣流速0.15 L/min[14]。

1.5標準溶液配制及標準曲線的繪制

標準儲備溶液的配制:分別準確稱取5.0 mg多菌靈、6-芐基氨基嘌呤、吲哚乙酸、赤霉素、恩諾沙星標準品于50 mL棕色容量瓶中,用甲醇定容,配制成100.0 mg/L的儲備液,密封儲存于-20 ℃冰箱中。

混合標準中間溶液:分別吸取100.0 mg/L的標準儲備溶液和100.0 mg/L的多效唑、咪鮮胺、涕滅威、甲基托布津、2,4-二氯苯氧乙酸標準溶液1.25 mL于25 mL棕色容量瓶中,用甲醇定容,配制成5.0 mg/L的混合標準中間溶液,密封儲存于-20 ℃冰箱中。

上機混合標準溶液:用流動相或者基質(zhì)空白(陰性豆芽提取液)配制5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 μg/L系列上機濃度,現(xiàn)配現(xiàn)用,并按優(yōu)化后的條件進行分析,以10種藥物進樣濃度(x)為橫坐標,定量監(jiān)測離子對峰面積(y)為縱坐標繪制標準曲線。

2　結(jié)果與分析

2.1稱樣量的確定

采用QuEChERS[17]方法結(jié)合UPLC-MS/MS儀器對目標化合物進行檢測,稱樣量為5.00、10.00、15.00 g平行樣品檢測結(jié)果的相對標準偏差(RSD%)分別為4.37%～10.21%、2.92%～6.43%、3.01%～6.39%。取樣量5.00 g檢測結(jié)果的相對標準偏差太大,不具備代表性;10.00 g和15.00 g的RSD%相差較小,都能滿足要求,考慮到試劑的消耗,本實驗確定試樣量為10.00 g。

2.2提取溶劑的選擇

選擇合適的萃取溶劑可以提高萃取效率以及降低基質(zhì)的干擾,根據(jù)10種待測物的化學性質(zhì),比較了乙腈、酸化乙腈、丙酮、甲醇、酸化甲醇作為溶劑的提取效果,結(jié)果見圖1。相對于酸化乙腈、酸化甲醇而言,丙酮、甲醇、乙腈提取赤霉素、恩諾沙星、吲哚乙酸效率較低,為56%～86%,而且丙酮提取雜質(zhì)多。乙腈極性較強,作為提取溶劑能與水互溶,加入氯化鈉后容易與水分離,萃取過程更具選擇性,脂肪和糖溶解較少,而且能使蛋白質(zhì)變性沉淀,適合萃取極性范圍寬、多藥物殘留而廣泛應(yīng)用于QuEChERS方法中。通過不斷優(yōu)化乙腈溶劑中乙酸的體積配比,發(fā)現(xiàn)當乙酸:乙腈的體積配比為1∶100時,提取的共存物質(zhì)少,酸性化合物的回收率高,因而確定1%乙酸乙腈溶液作為萃取溶劑。

圖1　5種提取溶劑對10種化合物的提取回收率Fig.1　Extraction recoveries of the ten compounds with five extraction solvents

2.3提取方式的選擇

比較了搖床振蕩、超聲波、旋渦、均質(zhì)4種不同的提取方式,并通過陽性樣品定量和回收率實驗驗證,其中搖床振蕩方式陽性樣品定量和回收率都較低;旋渦提取時,幾種藥物的回收率和超聲波、均質(zhì)提取相差不大,但實際陽性樣品測定值偏低,為42%～83%;超聲波和均質(zhì)提取效果都令人滿意,但是超聲波提取耗時更長，因此，本實驗采取均質(zhì)方式提取。分析不同提取方式對陽性樣品和回收率測定值有偏差的原因,可能是添加藥物的方式與藥物在活體內(nèi)自身代謝不同造成的,均質(zhì)和超聲波都能使細胞破碎,使得藥物能被充分提取。提取溶劑總量為樣品質(zhì)量的2.5倍,比較了提取1、2、3次對提取回收率的影響,發(fā)現(xiàn)少量多次提取比一次提取效果更好,提取1次10種藥物回收率58%～77%,提取2次10種藥物回收率93%～112%,由于樣品中基質(zhì)和操作不完全平行的因素影響,造成回收率可能超過100%,第三次提取液中目標化合物未檢出,說明兩次提取可以完全提取目標化合物。

2.4凈化方式的優(yōu)化

比較安捷倫公司SCX、MAX、WCX等不同極性的陰陽離子固相萃取柱對上述10種非法添加物凈化效果,實驗表明很難用一種萃取柱同時使10種非法添加藥物的回收率全部達到滿意,因此改變實驗思路,結(jié)合QuEChERS方法除去脂肪酸、糖類、色素、有機酸等雜質(zhì),加入150 mg MgSO4除去水分;PSA、C18和GCB填料是QuEChERS方法中經(jīng)常使用的凈化吸附劑[18],C18能吸附脂肪,GCB能吸附大部分色素,PSA能除去樣品中的脂肪酸、糖類和一些色素[19-22],但是其對一些酸性化合物也有部分吸附。實驗考察了PSA、C18和GCB三種吸附劑的用量除雜和對10種待測藥物吸附效果,PSA、C18、GCB三種填料各自對混合標準的吸附情況見圖2。檢測結(jié)果顯示,PSA對恩諾沙星、2,4-D、赤霉素都有一定吸附,隨著PSA用量的增加吸附作用不斷增強,恩諾沙星回收率從93%降到72%,2,4-D回收率從95%降到70%,赤霉素回收率從91%降到68%;C18對待測10種藥物吸附性較小,對6-BA、2,4-D、赤霉素的回收率有輕微的影響,GCB對待測10種藥物都有一定的吸附,其中對2,4-D、恩諾沙星、吲哚乙酸3種藥物吸附影響較強,2,4-D回收率從96%降到65%,恩諾沙星回收率從95%降到63%,吲哚乙酸回收率從92%降到61%。結(jié)合藥物回收率和除雜效果,最終確定PSA 25 mg、C18100 mg和GCB 10 mg為最佳用量。由三種吸附劑最佳配比組成的復(fù)合吸附劑與單一吸附劑效果對比見圖2。

圖2　3種凈化填料凈化效果比較Fig.2　Comparison of the effectiveness of three different purification filler

2.5色譜條件的優(yōu)化

首先考察了不同流動相的組成對10種添加藥物的保留時間與峰型的影響,比較了水、0.1%甲酸水、5 mmol/L甲酸銨分別與乙腈、甲醇組成流動相。結(jié)果表明甲醇的響應(yīng)比乙腈高很多,而且保留時間偏移少,對6-芐基氨基嘌呤影響比較明顯,甲酸銨鹽溶液作為流動相時,容易引起恩諾沙星、6-芐基氨基嘌呤、多菌靈等藥物的分離度降低,且峰型拖尾,導(dǎo)致化合物的干擾嚴重,靈敏度降低;甲醇和水作為流動相時,部分藥物峰型“矮胖”,加入0.1%甲酸能使峰型尖銳對稱,分離度提高,而且在ESI+模式檢測時,能更容易誘導(dǎo)多菌靈、6-芐基氨基嘌呤、恩諾沙星等在ESI源中產(chǎn)生[M+H]+,但是加入酸后會使2,4-二氯苯氧乙酸、赤霉素等在ESI-模式下抑制響應(yīng),不斷調(diào)整甲酸在水中的濃度使得ESI+檢測的藥物和ESI-檢測的藥物響應(yīng)都能滿足要求,確定0.1%甲酸水溶液-甲醇為流動相。實驗檢測的10種藥物化學性質(zhì)差別很大,選擇通用性較強的C18超高效液相色譜柱進行色譜條件優(yōu)化,比較了安捷倫公司ZORBAX Eclipse Plus C18(30 mm×4.6 mm,3.5 μm)、沃特斯公司ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)和島津公司InertSustain C18(100 mm×2.1 mm,2.0 μm色譜柱分離效果,實驗采用靈敏度和分離度較好的ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色譜柱,10種藥物能得到理想的分離效果,圖3為10種藥物的基質(zhì)標準溶液的MRM質(zhì)譜圖。

圖3　50 μg/L混合基質(zhì)標準溶液的MRM色譜圖Fig.3　MRM chromatogram of 50 μg/L mixed matrix standard solution

2.6質(zhì)譜條件的優(yōu)化

用50 μg/L的混標進樣,對質(zhì)譜條件進行優(yōu)化,通過調(diào)節(jié)毛細管電壓、錐孔電壓、錐孔和中性氣體的流速,挑選最佳母離子,調(diào)節(jié)錐孔電壓和碰撞能量的電壓值使子離子響應(yīng)到達最高,10種藥物的質(zhì)譜檢測參數(shù)見表2。

表2　豆芽中10種目標化合物質(zhì)譜檢測參數(shù)

注:*:定量離子,#:定性離子。

2.7基質(zhì)效應(yīng)

目前在定量過程中,基質(zhì)效應(yīng)是必須要考慮的因素,Poole[23]指出色譜分析基質(zhì)效應(yīng)的產(chǎn)生歸因于樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)分子與目標分析物競爭進樣口或柱頭上的活性位點,使更多的物質(zhì)進入色譜柱,基質(zhì)物質(zhì)與目標化合物在色譜分離過程中共流出,可能影響目標化合物的離子化過程,進而影響目標化合物的定量、精密度、線性關(guān)系等。豆芽樣品經(jīng)過提取和凈化步驟后,提取液中同時含有目標化合物和豆芽內(nèi)源基質(zhì)物質(zhì),加入固相分散劑在一定程度上減少了基質(zhì)效應(yīng),但也不可能徹底解決。解決基質(zhì)效應(yīng)在實驗室最常用的方法是利用不含農(nóng)藥的空白基質(zhì)配制標準,本實驗配制5.0～200.0 μg/L范圍內(nèi)6個濃度的混合標準溶液,峰面積Y對標準濃度X(μg/L)繪制標準曲線,通過基質(zhì)標準曲線的斜率除以溶劑標準曲線的斜率,得到的值K 作為評判每種藥物是屬于基質(zhì)增強還是基質(zhì)抑制,比值大于1說明是基質(zhì)增強,比值小于1說明是基質(zhì)抑制,本實驗測定4種豆芽的10種藥物K值見表3。

表4　豆芽中10種添加物的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

從表3中可以看出,不同種類豆芽的基質(zhì)效應(yīng)大體順序為:黑豆芽>綠豆芽>黃豆芽>豌豆苗。

2.8方法評價

2.8.1方法的線性范圍、標準曲線和相關(guān)系數(shù)10種添加物得到的相應(yīng)的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)結(jié)果見表4。結(jié)果表明:10種藥物在5.0～200.0 μg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2均在0.99以上,當S/N=3時對應(yīng)的目標物濃度為最低檢出濃度,通過質(zhì)量、體積換算得到檢出限,同理S/N=10換算可得定量限。

表3　10種目標物標準曲線斜率比值K

2.8.2回收率實驗實驗得到10種藥物的回收率為80.4%～99.8%,相對標準偏差為2.0%～7.8%,具體見表5。

表5　回收率和精密度測定(n=6)

2.8.3實際樣品的分析從湛江各超市、農(nóng)貿(mào)市場和批發(fā)市場中購買共100份豆芽進行10種藥物殘留分析,其中涕滅威、甲基托布津、赤霉素、多效唑、吲哚乙酸5種藥物全部未檢出,部分樣品發(fā)現(xiàn)恩諾沙星,含量范圍為5.61～141.71 μg/kg,檢出率為37%;咪鮮胺含量范圍為17.14～275.49 μg/kg,檢出率為22%;2,4-D含量范圍為15.16～109.62 μg/kg,檢出率為13%;多菌靈含量范圍為10.32～208.46 μg/kg,檢出率為29%;6-芐基腺嘌呤含量范圍為20.89～319.06 μg/kg,檢出率為16%。

3　結(jié)論

采用QuEChERS方法結(jié)合UPLC-MS/MS在ESI正、負模式同時測定豆芽中的10種藥物。10.00 g樣品經(jīng)25.0 mL 1%乙酸乙腈均質(zhì)提取,150 mg MgSO4、25 mg PSA、100 mg C18、10 mg GCB凈化,以0.1%甲酸水溶液-甲醇為流動相梯度洗脫,ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)測定,在5.0、20.0、50.0 μg/kg三個水平添加10種藥物,回收率為80.4%～99.8%,相對標準偏差為2.0%～7.8%,方法檢出限為0.2～2.6 μg/kg。結(jié)果表明:該法具有分析時間短、靈敏度高、準確度好、回收率穩(wěn)定等優(yōu)點,可以應(yīng)用于豆芽中10種藥物殘留的日常監(jiān)測,提高食品安全突發(fā)事件的應(yīng)急水平。

[1]Erin N,Afacan B,Ersoy Y,et al.Gibberellic acid,a plant growth regulator,increases mast cell recruitment and alters Substance P levels[J]. Toxicol,2008,254(1-2):75-81.

[2]Zahm S H,Weisenburger D D,Babbitt P A,et al.A case control study of non-hodgkin’s lymphoma and the herbicide 2,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D)in Eastern Nebraska[J]. Epidemiol,1990:(5):349-356.

[3]唐莉娟.食品中多種植物生長調(diào)節(jié)劑同時分析新技術(shù)研究及應(yīng)用[D]. 南昌:南昌大學,2012.

[4]Xu F,Yang Z F,Chen X H,et al.6-Benzylaminopurine Delays Senescence and Enhances Health-Promoting Compounds of Harvested Broccoli[J]. J Agric Food Chem,2012,60:234-240.

[5]Xue J Y,Wang S L,You X W,et al.Multi-residue determination of plant growth regulators in apples and tomatoes by liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Rapid Commun Mass Spectrom,2011,25:3289-3297.

[6]吳平谷,譚瑩,張晶,等.分級凈化結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定豆芽中10種植物生長調(diào)節(jié)劑[J].分析化學,2014,42(6):866-871.

[7]陳君,安東各,許莉,等.豆芽中甲硝唑、多菌靈、赤霉素、6-芐基腺嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸的定量檢測[J].化學通報,2014,77(9):916-918.

[8]Narayan Sukesh Sinha,M Vishnu Vardhana Rao,K Vasudev,et al.A liquid chromatography mass spectrometry-based method to measure organophosphorous insecticide,herbicide and non-organophosphorous pesticide in grape and apple samples[J]. Food Control,2012,25:636-646.

[9]Soonkilchoam,Abdelaty,Kihunpark,et al. Simple multiresidue extraction method for the determination of fungicides and plant growth regulator in bean sprouts using low temperature artitioning and tandem mass spectrometry[J]. Food Chemistry,2013,136:1414-1420.

[10]Shi X M,Jin F,Huang Y T,et al.Simultaneous determination of five growth regulators in fruits by modified quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. J Agric Food Chem,2012,60:60-65.

[11]SN/T 3725-2013,出口食品中對氯苯氧乙酸殘留量的測定[S]. 北京:中國標準出版社,2013.

[12]GB/T 23381-2009,食品中6-芐基腺嘌呤的測定[S]. 北京:中國標準出版社,2009.

[13]謝寒冰,周明瑩,趙海峰等.高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜法同時檢測豆芽中的3 種外源植物激素殘留[J]. 色譜,2014,32(5):493-498.

[14]柳菡,吳斌,殷耀等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定芽苗類蔬菜及其來源豆類中4 種非法添加物的殘留量[J]. 色譜,2013,31(1):22-26.

[15]Bharat U,Kaushik B,Ramteke S D,et al.Dissipation kinetics of for chlorfenuron,6-benzyl aminopurine,gibberellic acid and ethephon residues in table grapes[J]. Food Chemistry,2013,141:4208-4214.

[16]劉春生,羅海英,冼燕萍等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定豆芽中7種藥物殘留[J]. 質(zhì)譜學報,2014,35(4):302-310.

[17]Anastassiades M,Lehotay SJ,Stajnbaher D,et al. Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and "dispersive solid-phase extraction" for the determination of pesticide residues in produce[J]. J AOAC Int,2003,86(2):412-431.

[18]Dipakshi Sharmaa,Avinash B Nagpala,Yogesh Pakadeb,et al. Analytical methods for estimation of organophosphorus pesticide residues in fruits and vegetables:A review[J]. Talanta,2010(82):1077-1089.

[19]Hou X,Han M,Dai XH,et al.A multi-residue method for the determination of 124 pesticides in rice by modified QuEChERS extraction and gas chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Chemistry,2013(138):1198-1205.

[20]Lu D S,Qiu X L,Feng C,et al.Simultaneous determination of 45 pesticides in fruit and vegetable using an improved QuEChERS method and online gel permeation chromatography gas chromatography mass spectrometer[J]. J Chromatography B,2012,895-896:17-24.

[21]Li J,Dong F S,Xua J,et al. Enantioselective determination of triazole fungicide simeconazole in vegetables,fruits and cereals using modified QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,rugged and safe)coupled to gas chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta,2011(702):127-135.

[22]Shi X M,Jin F,Huang Y T,et al.Simultaneous determination of five growth regulators in fruits by modified quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. J Agric Food Chem,2012,60:60-65.

[23]Poole C F. Matrix-induced response enhancement in pesticide residue analysis by gas chromatography[J].J Chromatography A,2007,1158(1/2):241-250.

Simultaneous determination of ten plant growth regulators and fungicides in bean sprouts using QuEChERS-UPLC-MS/MS

CHENG Sheng-hua,YANG Chun-liang,ZENG Shao-dong,WEI Xiao-yi,WANG Ming-yue,LI Ji-hua*

(Agricultural Products Processing Research Institute,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment on Agro-products Processing,Ministry of Agriculture,Zhanjiang 524001,China)

A method was established based on QuEChERS-ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry(UPLC-MS/MS)to simultaneously determine 10 kinds of plant growth regulators and fungicides residues in bean sprouts. The sample were extracted with 1% acidic acetonitrile,then dehydrated and cleaned using PSA,C18and GCB. The QqQ mass spectrometer was operated in a multiplereaction monitoring mode and qualified using external standard method. The results showed that All of residues(Carbendazim,6-Benzylaminopurine,Indole-3-acetic acid,Gibberellin,Enrofloxacin,2,4-Dichlorophenoxyacetic acid,Paclobutrazol,Prochloraz,Aldicarb,Thiophanate methyl)were in a good linear relationship between 5.0 and 200.0 μg/L and the relative coefficient were more than 0.99,the recoveries were in the range of 80.4%～99.8%,the relative standard deviations were 2.0%～7.8%,the limits of detection of the method were varied from 0.2 to 2.6 μg/kg. The method is simple,rapid and reliable. It can be suitable for detection and confirmation of these ten plant growth regulators and fungicides in bean sprouts products.

plant growth regulator;fungicide;UPLC-MS/MS;QuEChERS;bean sprouts

2015-06-10

程盛華(1980-)，男，碩士研究生，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風險評估，E-mail：chengshenghua2013@163.com。

李積華(1979-)，男，博士，研究員，研究方向：食品科學，E-mail：foodpaper@126.com。

國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風險評估項目(GJFP2015012)。

TS207.3

A

1002-0306(2016)12-0053-07

10.13386/j.issn1002-0306.2016.12.002