冠心病患者KIF6基因rs20455多態性及其與血糖、血脂水平的關系

陳娟，王婷，王書俠，施建豐，張家明，吳娟

(南京中醫藥大學附屬江蘇省中西醫結合醫院，南京 210028)

?

冠心病患者KIF6基因rs20455多態性及其與血糖、血脂水平的關系

陳娟，王婷，王書俠，施建豐，張家明，吳娟

(南京中醫藥大學附屬江蘇省中西醫結合醫院，南京 210028)

目的了解冠心病患者驅動蛋白分子6(KIF6)基因rs20455多態性，并觀察其與血糖、血脂水平的關系。方法80例冠心病(CHD)患者(觀察組)，健康體檢者147例(對照組)，采用TaqMan等位基因終點法分析各組KIF6基因rs20455多態性，比較不同KIF6基因rs20455多態性基因型血脂、血糖水平。結果觀察組KIF6基因rs20455多態性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較，P均>0.05。KIF6基因rs20455多態性TT、CC+CT基因型的TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG水平比較，P均>0.05。結論冠心病患者KIF6基因rs20455多態性與正常人相似，且與患者血脂、血糖水平無關。

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病；驅動蛋白分子6；基因多態性；血脂；空腹血糖

冠心病(CHD)是發達國家和地區人口的主要死亡原因之一，近年我國CHD的發病率與病死率均呈上升趨勢，已接近發達國家水平[1]。驅動蛋白分子6(KIF6)是近年發現的驅動蛋白家族9的一類分子馬達，研究[2]發現KIF6基因單核苷酸多態性與高加索人群的CHD患病風險有潛在相關性，而目前國內鮮有KIF6基因與中國漢族人群CHD患病風險相關性的報道。本研究觀察了CHD患者KIF6基因rs20455多態性，并觀察其與血糖、血脂水平的關系。

1　資料與方法

1.1臨床資料CHD患者80例(觀察組)，男48例，女32例；年齡(63.1±8.6)歲。CHD診斷標準：冠狀動脈造影陽性(至少1支冠狀動脈狹窄≥50%)，或者既往有明確心肌梗死病史。健康體檢者147例(對照組)，男95例，女52例；年齡(46.1±8.8)歲。兩組均排除心腦血管病變、糖尿病、腎病、腫瘤及免疫系統疾病等。

1.2KIF6基因rs20455多態性分析所有受試對象禁食12 h后，采集肘靜脈血4 mL。3 mL置于無抗凝劑管，分離血清，用于生化指標檢測；另1 mL置于EDTA-K2抗凝管，分離白細胞層，用于基因組DNA的提取。提取基因組DNA。取全血300 μL，根據試劑盒操作說明提取基因組DNA(試劑盒由美國Gentra公司提供)，并于-20 ℃保存備用。DNA標本于波長260 nm和280 nm處進行吸光度分析并計算DNA濃度。采用TaqMan等位基因終點法分析。根據美國國家生物技術信息中心(NCBI)公共數據庫Blast功能設計并初步驗證引物：正義鏈5′-GCCATTTCTCCAGACATCTGACT-3′，反義鏈5′-GTGATTCTCACCTTACCTTTTGTTAGA-3′。探針5′端標記的熒光報告基團是FAM，3′端標記熒光猝滅基團MGB。PCR反應在羅氏z480 PCR擴增儀上進行，PCR反應總體積25 μL，基因組DNA 2 μL，TaqMan通用PCR擴增預混試劑12.5 μL，KIF6 SNP分型試劑0.625 μL，無菌ddH2O 9.875 μL；空白對照管(即無模板對照，NTC)中加入11.875 μL無菌ddH2O，TaqMan通用PCR擴增預混試12.5 μL，KIF6 SNP分型試劑0.625 μL。擴增程序：95 ℃預變性10 min；92 ℃、15 s，60 ℃、1 min，進行40個循環。不同基因型的PCR產物測序由上海生工測序部完成。

1.3血脂、血糖檢測方法采用已糖激酶紫外終點比色法檢測FBG，酶法檢測血清TC、TG，直接勻相法檢測HDL-C、LDL-C。以上項目均在羅氏cobas8000生化分析儀上檢測(試劑盒均由美國Roche公司提供)，所有測定均嚴格按照儀器、項目標準操作規程進行，用高、低兩個水平質控品進行質量控制(質控品由美國BioRad公司提供)。

2　結果

兩組KIF6基因rs20455位點基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。觀察組KIF6基因rs20455多態性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較，P均>0.05。不同基因型血脂、血糖水平比較見表1，由表1可知,KIF6基因rs20455多態性TT、CC+CT基因型的TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG水平比較，P均>0.05。

表1　不同基因型血脂、血糖水平比較

3　討論

KIF6是驅動蛋白超家族中一類參與胞內轉運的特殊蛋白質。KIF6基因位于染色體6p21，跨越約390 000堿基對。KIF6在大腦、結腸、眼、咽、皮膚、睪丸及結締組織中低表達。近年研究發現，KIF6基因Trp719Arg(又稱rs20455)SNPs區域強連鎖不平衡，該變異體靠近KIF6基因尾部，由非極性殘基色氨酸取代堿性殘基精氨酸，由此改變基因尾部與“貨物”分子的親和力或調節KIF6蛋白質運動活性，影響“貨物”結合[3]。因此，KIF6基因與心血管疾病易感性有相關性，且強化他汀類藥物治療可使KIF6基因變異者顯著獲益。

本研究顯示，觀察組KIF6基因rs20455多態性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較無統計學差異。C等位基因頻率分布與我國北方地區、印度地區人群相差無幾[4～7]，與高加索人群、北美地區和非裔美洲人群等差異較大[8,9]，可見KIF6基因rs20455多態性基因人群種族分布的差異，可能造成基因頻率，等位基因頻率不同。本研究還發現，KIF6基因rs20455多態性對觀察組患者血脂、FBG水平無顯著影響，與之前研究[10～13]結果一致，這說明KIF6基因多態性可能通過非血脂代謝途徑來達到他汀藥物降低心血管風險的療效。

本研究存在一定年齡組間不完全匹配的不足，對中國不同地域、不同民族人口進行大規模調查研究KIF6基因多態性與CHD的相關性及其機制，對其防治、發生、發展提供遺傳學依據具有重要意義。

[1] 邱方,張葵,李雷,等.人載脂蛋白A5基因c.553G>T多態性與冠心病及脂質代謝的相關性研究[J].中華檢驗醫學雜志,2007,30(7):753-756.

[2] Davani S, Gozalo C, Gambert S, et al. The polymorphism Trp719Arg in the kinesin-like protein 6 is associated with the presence of late outgrowth endothelial progenitor cells in acute myocardial infarction[J]. Atherosclerosis, 2010,210(1):48-50.

[3] Piddini E, Schmid JA, de Martin R, et al. The Ras-like GTPase Gem is involveed in cell shape remodelling and interacts with the novel kinesin-like protein KIF9[J]. Embo J, 2001,20(15):4076-4087.

[4] 石生河,許文燊,鄢盛愷,等.中國北方漢族人2型糖尿病合并冠心病與KIF6基因Trp719Arg多態性的相關性[J].中國心血管雜志,2012,17(4):104-108.

[5] Bhanushali AA, Contractor A, Shah VT, et al. Investigation of KIF6 Trp719Arg in a case-control study of coronary artery disease in Western Indians[J]. Molecules, 2011,15(12):883-886.

[6] Wu G, Li GB, Dai B. Association of KIF6 variant with lipid level and angiographic coronary artery disease events risk in the Han Chinese population[J]. Molecules, 2012,17(9):11269-11280.

[7] 陳娟,李雷,張葵,等.TaqMan-MGB熒光定量PCR檢測人載脂蛋白A5基因方法的建立及評價[J].檢驗醫學,2012,27(5):386-389.

[8] Shiffman D, Chasman DI, Zee RY, et al. A kinesin family member 6 variant is associated with coronary heart disease in the Women′s Health Study[J]. J Am Coll Cardiol, 2008,51(4):444-448.

[9] Iakoubova OA, Tong CH, Rowland CM, et al. Association of the Trp719Arg polymorphism in kinesin-like protein 6 with myocardial infarction and coronary heart disease in 2 prospective trials: the CARE and WOSCOPS trials[J]. J Am Coll Cardiol, 2008,51(4):435-443.

[10] 陳娟,施建豐.驅動蛋白6基因多態性與心血管疾病相關性研究進展[J].國際檢驗醫學雜志,2014,35(19):2663-2665.

[11] Iakoubova OA, Robertson M, Tong CH, et al. KIF6 Trp719Arg polymorphism and the effect of statin therapy in elderly patients: resultsfrom the PROSPER study[J]. Eur J Cardiovasc Prev Rehabil, 2010,17(4):455-461.

[12] 許文燊,鄢盛愷,楊輝,等.KIF6基因rs20455多態性與中國北方漢族人冠心病及血脂水平的關聯研究[J].中國分子心臟病學雜志,2011,11(6):350-354.

[13] Shiffman D, Sabatine MS, Louie JZ, et al. Effect of pravastatin therapy on coronary events in carriers of the KIF6 719Arg allele from the cholesterol and recurrent events trial[J]. Am J Cardiol, 2010,105(9):1300-1305.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.15.027

R514.4

B

1002-266X(2016)15-0073-02

2015-08-04)