益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠的保護作用*

王維浩　邢之華　劉衛平　彭偉軍　聶課朝（中南大學湘雅醫院中西醫結合研究所，湖南 長沙 410008）

?

益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠的保護作用*

王維浩邢之華△劉衛平彭偉軍聶課朝
（中南大學湘雅醫院中西醫結合研究所，湖南 長沙 410008）

目的 探討益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠的保護作用。方法 SD大鼠50只隨機分為假手術組、模型組、益氣活血保心湯低劑量組、益氣活血保心湯高劑量組和復方丹參滴丸組。采用結扎冠狀動脈左前降支的方法建立急性心肌梗死大鼠模型，造模成功后于不同時間點分別比較大鼠心電圖的變化情況，采用TTC染色法記錄心肌梗死面積，并測乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C反應蛋白（CRP）的血清濃度。結果 實驗過程中大鼠先后死亡共計5只，死亡原因為惡性心律失常，其中模型組、益氣活血低劑量組各2只，益氣活血低劑量組1只，符合急性心肌梗死死亡率高的特點。與結扎前比較，在結扎即刻模型組、益氣活血保心湯高劑量組、益氣活血保心湯低劑量組以及復方丹參滴丸組J點抬高均≥0.1 mV，提示造模成功。與假手術組比較，模型組結扎24 h后ΔJ明顯抬高（P<0.01）；與模型組比較，藥物組ΔJ明顯降低（P<0.01或P<0.05），其中益氣活血保心湯高劑量組、復方丹參滴丸組最為明顯（P< 0.01）。與假手術組比較，模型組LDH、CK-MB水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，益氣活血保心湯高劑量組與復方丹參滴丸組均顯著降低LDH、CK-MB的血清濃度 （P<0.01）；益氣活血保心湯低劑量組可降低CK-MB濃度（P<0.05），但LDH濃度無明顯差異（P>0.05）。與假手術組比較，模型組TNF-α、CRP水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各治療組均顯著降低血清TNF-α、CRP的濃度（P<0.01或P<0.05）。與假手術組比較，模型組心梗面積明顯增大（P<0.01）；與模型組比較，各給藥組心梗面積明顯減小（P<0.01或P< 0.05）。益氣活血保心湯高劑量組與復方丹參滴丸組相比較，差異無統計學意義（P>0.05）。結論 急性心肌梗死大鼠心電圖J點出現異常變化，血清心肌酶學明顯升高。益氣活血保心湯能夠有效抑制急性心肌梗死對大鼠造成的損傷，其作用機制可能與其抑制炎癥反應，降低TNF-α、CRP水平有關。

急性心肌梗死益氣活血保心湯ECG心肌酶學炎癥因子

【Abstract】Objective：To discuss the effects of Yiqi huoxue baoxin Decoction on acute myocardial infarction（AMI）in rats.Methods：50 healthy SD rats were randomly divided into sham operation group，the model group，lower dosage group of Yiqi huoxue baoxin Decoction，higher dosage group of Yiqi huoxue baoxin Decoction and the Compound Danshen Pill group.Acute myocardial infarct（AMI）model was established by coronary artery ligation.After successful modeling，the electrocardiogram ECG was recorded and the Myocardial infarct area was detected by TTC stain.Blood was collected to determine the contents of lactate dehydrogenase（LDH），creatine kinase isoenzymes（CK-MB），tumor necrosis factor-α（TNF-α），and C-reactive protein（CRP）.Results：In comparison with the model group，the treatment groups can improve the abnormal changes of ECG induced by acute myocardial infarct，reduce myocardial infarction size and lower the level of myocardial enzyme，CRP and TNF-α. Conclusion：J wave of rats with acute myocardium infarct drifts evidently，and myocardial enzyme was significantly higher.In this experiment，Yiqi huoxue baoxin Decoction plays an effective role in alleviating the injuries in AMI rats.The mechanisms may be through decreasing anti-inflammation reaction and reducing contents of TNF-α and CRP.

【Key words】Acute myocardial infarction；Yiqi huoxue therapy；ECG；Myocardial enzyme；Related inflammatory molecules

急性心肌梗死（AMI）是目前全球發病率和病死率較高的疾病，其發病機制為冠狀動脈供血減少或中斷導致心肌的急劇缺血，從而使相應心肌發生缺血性壞死，其最為顯著特征是心電圖（ECG）的進行性改變和血清酶學明顯升高［1］。前期研究已證實以保心湯為代表的益氣活血法對冠心病心絞痛患者有較好的臨床療效［2］。本研究擬通過結扎大鼠冠狀動脈復制急性心肌梗死模型，觀察益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠ECG、心肌酶學、心肌梗死面積及血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C反應蛋白（CRP）的影響，探討其可能的作用機制。現報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物健康雄性SD大鼠50只，體質量（200±20）g，由中南大學實驗動物中心提供（動物合格證號：SYXK（湘）2011-0001），動物最終來源于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。實驗前置動物于室溫（22～24）℃，保持相對濕度為40%～60%，自然光線，適應性飼養1周。

1.2藥物與試劑益氣活血保心湯：黨參15 g，黃芪15 g，白術10 g，茯苓10 g，山楂15 g，葛根15 g，丹參15 g，桃仁12 g，川芎10 g，紅花5 g（由湘雅醫院中藥房提供）。原藥材經洗凈后煎煮2次，去渣留取藥液，使每毫升濃縮液中含生藥量的濃度為2.5 g/mL。復方丹參滴丸：劑量規格25 mg/丸，天津天士力股份有限公司產品。TTC1號粉劑（南京建成科技有限公司）；TTC1號溶劑（南京建成科技有限公司）；戊巴比妥（美國Sigma公司）；多聚甲醛粉劑（南京建成科技有限公司）。乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）試劑盒、TNF-α試劑盒、CRP試劑盒（南京建成生物工程有限公司）。

1.3主要儀器多道生理信號采集系統（成都泰盟公司，批號RM6240BD）；小動物呼吸機（成都儀器廠，批號DHX-500B）；手術無影燈（成都儀器廠）；普通低溫離心機 （上海中科生物醫藥公司）；-80℃超低溫冰箱（日本三洋），電子天平 （A&D公司），Image-Pro Plus version 6.0（美國IPP圖像分析軟件有限公司）。

1.4分組與給藥將50只心電圖正常的健康雄性SD大鼠按照隨機數字表法分為5組，每組10只。分別為假手術組、空白模型組、益氣活血保心湯低劑量組、益氣活血保心湯高劑量組、復方丹參滴丸組。其用藥劑量以成人用藥劑量為標準，按人與大鼠體表面積換算。益氣活血保心湯低、高劑量組分別為12、36 g/kg。復方丹參滴丸組為80 mg/kg，假手術組和模型組均予以1 mL/100 g蒸餾水灌胃。連續灌胃給藥7 d，各組每日給藥2次。

1.5模型制備術前禁食12 h，末次給藥30 min后，予1%戊巴比妥按36 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位固定于手術臺上。常規消毒，行經口行氣管插管，接呼吸機（潮氣量2～3 mL/100 g，頻率60次/min，吸呼比為1∶2），將針狀電極連接于四肢皮下，記錄肢體Ⅱ導聯ECG。在胸骨左緣第4、5肋間打開胸腔，分離心包，在左心耳和肺動脈圓錐間找到與左冠狀動脈伴行的冠狀靜脈，在左心耳下方2～3 mm處用4-0線結扎左冠脈左室支。記錄ECG，T波高聳者、J點抬高≥0.1 mV者為模型復制成功標志。假手術組操作只穿線不結扎，其余同以上步驟。

1.6觀察指標1）大鼠心電圖J點變化：大鼠仰面固定于手術臺上，穩定后接心電圖機觀察結扎前、結扎即刻、結扎后24 h大鼠ECG（10 mm/mV，25 mm/s）。分別測量記錄肢體Ⅱ導聯（右上肢及左下肢）心電圖J點位移（反應ST段變化）。J點位移以P-R段為基線，每時間點測5個連續波形，取其平均值。記錄并計算J點位移的變化值 （ΔJ=結扎冠脈后各時間點J點值-結扎前J點值）。2）血清指標檢測：于術后24 h，行腹主動脈采血5 mL，以3000 r/min離心10 min后分離血清，分別測定血清LDH、CK-MB、TNF-α、CRP水平。3）計算心肌梗死面積 造模后的24 h收集大鼠心臟，予0.9%氯化鈉注射液沖洗，放入-40℃冰箱中冰凍。取左心室沿縱軸方向切成厚度約0.2 cm薄片，放入1%TTC染色液中于37.0℃恒溫水浴箱溫浴30 min，梗死心肌因脫氫酶的缺失而無法染色，顏色呈灰白色，而有活性的心肌組織呈暗紅色。用Image ProPlus 6.0軟件計算心肌梗死面積。

1.7統計學處理應用SPSS17.0統計軟件分析。計量資料以（±s）表示，定量資料多組間兩兩比較采用方差分析（方差齊采用LSD檢驗，方差不齊者采用Dunnett t檢驗）。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1大鼠一般情況實驗過程中大鼠先后死亡共計5只，死亡原因為惡性心律失常，其中模型組、益氣活血低劑量組各2只，益氣活血低劑量組1只，符合急性心肌梗死死亡率高的特點。

2.2各組心電圖J點、心梗大鼠血清LDH、CK-MB水平比較見表1。與結扎前比較，在結扎即刻模型組、益氣活血保心湯高劑量組、益氣活血保心湯低劑量組以及復方丹參滴丸組J點抬高均≥0.1 mV，提示造模成功。與假手術組比較，模型組結扎24 h后ΔJ明顯抬高（P<0.01）；與模型組比較，藥物組ΔJ明顯降低（P<0.01或P<0.05），其中益氣活血保心湯高劑量組、復方丹參滴丸組最為明顯（P<0.01）。與假手術組比較，模型組LDH、CK-MB水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，益氣活血保心湯高劑量組與復方丹參滴丸組均顯著降低LDH、CK-MB的血清濃度（P<0.01）；益氣活血保心湯低劑量組可降低CK-MB濃度 （P<0.05），但LDH濃度無明顯差異（P>0.05）。

表1　各組大鼠ΔJ及血清LDH、CK-MB水平比較（±s）

表1　各組大鼠ΔJ及血清LDH、CK-MB水平比較（±s）

與假手術組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別　n　CK-MB（U/L）假手術組　10　289.3161±58.6465模型組　8　785.1060±64.3445**益氣活血保心湯低劑量組　8　343.8577±96.2191△ΔJ（mV）　LDH（U/L）0.0230±0.0059　324.2813±40.1632 0.2735±0.0064**　608.5046±57.1194**0.1947±0.0624△　583.7018±80.1457益氣活血保心湯高劑量組　9　336.7626±62.4741△△0.1313±0.0315△△384.3627±63.7202△△復方丹參滴丸組　10 0.1161±0.0237△△383.1196±51.6820△△321.1685±71.8867△△

2.3各組大鼠血清TNF-α、CRP水平比較見表2。與假手術組比較，模型組TNF-α、CRP水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各治療組均顯著降低血清TNF-α、CRP的濃度（P<0.01或P<0.05）。

表2　各組大鼠血清TNF-α、CRP水平比較（ng/mL，±s）

表2　各組大鼠血清TNF-α、CRP水平比較（ng/mL，±s）

組別　n假手術組　10模型組　8益氣活血保心湯低劑量組　8 TNF-α　CRP 1.4369±0.9817　0.0389±0.0084 26.0463±6.5239**　0.0713±0.0169**21.9864±7.8242△　0.0592±0.0261△益氣活血保心湯高劑量組　9　18.6896±6.3781△△　0.0516±0.0313△復方丹參滴丸組　10　18.2679±5.1489△△　0.0497±0.0286△

2.4各組急性心肌缺血大鼠心梗面積比較見表3。與假手術組比較，模型組心梗面積明顯增大 （P< 0.01）；與模型組比較，各給藥組心梗面積明顯減小（P< 0.01或P<0.05）。益氣活血保心湯高劑量組與復方丹參滴丸組相比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

表3　各組大鼠心梗面積比較（%，±s）

表3　各組大鼠心梗面積比較（%，±s）

組別　n假手術組　10模型組　8益氣活血保心湯低劑量組　8梗死區面積/心臟全面積3.5213±0.9817 39.8901±7.0237**36.5159±10.5364△益氣活血保心湯高劑量組　9　32.1046±9.6029△△復方丹參滴丸組　10　31.9350±11.1724△△

3　討　論

冠心病心肌梗死可歸屬于中醫學“胸痹”“真心痛”范疇，其基本病機是本虛標實，本虛主要為氣虛，標實重點在血瘀。因此在治療中常采用“行氣活血、活血化痰、補氣養血”等方法。本研究中以益氣活血法為治療原則的保心湯是在傳統中醫理論指導下，由黨參、黃芪、白術、茯苓、山楂、葛根、丹參、桃仁、川芎、紅花等組成，諸藥配伍有益氣活血之效。臨床研究亦證實益氣活血保心湯具有促進缺血區側支循環的建立，保護受損心肌，抑制炎癥反應，保護內皮功能，促進心功能的恢復作用［3-5］。

目前誘導大鼠急性心肌梗死最常用方法為結扎動物的冠狀動脈前降支，由于該模型和人類臨床心肌梗死病理生理過程最為接近，因此本實驗同樣采用該模型來評估益氣活血保心湯的抗心肌梗死作用［6］。在急性心肌缺血及心肌梗死的臨床診斷中，ECG特異性強、敏感性高，且操作方便快捷，能多次重復，但由于大鼠S-T段不明顯，所以本實驗選用ECG的J點位移（ΔJ）來評估益氣活血保心湯對于AMI的療效［7］。心肌缺血過程中心肌細胞膜破裂，導致LDH和CK-MB釋放入血，其活性反應了心肌細胞損傷程度。TNF-α和CRP是臨床常用評價機體炎癥的敏感指標，在心肌嚴重缺血時，其水平顯著上升［8-9］。結果示益氣活血保心湯能夠有效抑制冠脈結扎所導致心肌缺血，降低J點的位移值，減少心梗面積，減輕冠脈缺血所引起的大鼠心肌細胞損傷時LDH和CK-MB溢出，使血清中LDH 和CK-MB表達水平明顯降低，同時降低血清中THF-α與CRP的水平。

本研究表明，益氣活血保心湯對大鼠冠狀動脈前降支結扎所致心肌梗死具有明顯的改善作用，能保護心肌、減輕心肌梗死范圍以及心肌酶譜變化，其中以高劑量組效果最為顯著，其作用的機制可能與其抑制炎癥反應，降低THF-α、CRP的水平有關。

［1］沈衛峰，張奇，張瑞巖.2015年急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南解析［J］.國際心血管病雜志，2015，55（4）：217-219.

［2］邢之華，林展增.保心湯對氣虛血瘀型冠心病心絞痛患者生活質量的影響［J］.安徽中醫學院學報，2003，22（3）：19-21.

［3］張雙旗，陳良細，方顯明.中醫藥治療急性心肌梗死的臨床研究進展［J］.中西醫結合心腦血管病雜志，2012，10（10）：1239-1241.

［4］王永剛，齊婧，鐘偉，等.冠心病中醫病因病機的認識與探索［J］.中醫雜志，2015，65（17）：1449-1452.

［5］邢之華，林展增.保心湯對冠心病心絞痛氣虛血瘀證血漿內皮素的影響［J］.湖南中醫學院學報，2003，27（3）：38-39.

［6］邢之華，易亮，劉衛平，等.保心湯對冠心病穩定型心絞痛的臨床療效及對血漿bFGF的影響［J］.湖南中醫學院學報，2005，27（6）：43-44.

［7］彭偉軍，邢之華，廖翔，等.益氣活血法對冠心病穩定型心絞痛氣虛血瘀證患者血清IL-6、TNF-α及ICAM-1的影響［J］.湖南中醫藥大學學報，2011，33（7）：49-51.

［8］ 卓莉莎，高云華，徐亞麗，等.大鼠心肌梗死模型的建立與評價［J］.臨床超聲醫學雜志，2009，22（9）：577-580.

［9］Naruse Y，Nogami A，Harimura Y，et al.Difference in the clinical characteristics of ventricular fibrillation occurrence in the early phase of an acute myocardial infarction between patients with and without J waves［J］.J Cardiovasc Electrophysiol，2015，26（8）：872-878.

［10］Li GL，Yang L，Cui CC，et al.J wave syndromes：a decade of progress［J］.Chin Med J（Engl），2015，128（7）：969-975.

［11］Bruins SM，van der Heijden GJ，Stelpstra SD，et al.Point-ofcare tests in suspected acute myocardial infarction：a systematic review［J］.Int J Cardiol，2013，168（6）：5355-5362.

［12］張新超.心血管生物標記物與即時檢驗［J］.中國心血管雜志，2015，30（2）：81-84.

［13］劉虹.常見心肌標志物診斷急性冠狀動脈綜合征的應用探討［J］.實用醫技雜志，2014，（12）：1306-1307.

［14］Wang J，Tang B，Liu X，et al.Increased monomeric CRP levels in acute myocardial infarction：a possible new and specific biomarker for diagnosis and severity assessment of disease［J］. Atherosclerosis，2015，239（2）：343-349.

［15］Wang J，Li C，Cao Y，et al.Mechanism of QSYQ on antiapoptosis mediated by different subtypes of cyclooxygenase in AMI induced heart failure rats［J］.BMC Complement Altern Med，2015，15：352.

［16］Cho E，Kim M，Ko YS，et al.Role of inflammation in the pathogenesis of cardiorenal syndrome in a rat myocardial infarction model［J］.Nephrol Dial Transplant，2013，28（11）：2766-2778.

Effect of Yiqi Huoxue Baoxin Decoction on Rats with Acute Myocardial Infarct

WANG Weihao，XING Zhihua，LIU Weiping，et al. Institute of Intergrated Chinese and Western Medicine，Xiangya Hospital，Central Souh University，Hunan，Changsha 410008，China.

R285.5文獻標志碼：A

1004-745X（2016）06-997-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.06.015

湖南省長沙市科技計劃項目（No.K1205018-31）

△（電子郵箱：xzh_56@163.com）

（2016-01-06）