CS5100全自動凝血分析儀性能驗證

張敏，呂潔，吳乾波

（1、浙江省立同德醫院檢驗科，浙江 杭州310012；2、中國人民解放軍第一一七醫院檢驗科，浙江 杭州310004；3、浙江省血液中心獻服二科，浙江 杭州310005）

CS5100全自動凝血分析儀性能驗證

張敏1，呂潔2，吳乾波3

（1、浙江省立同德醫院檢驗科，浙江 杭州310012；2、中國人民解放軍第一一七醫院檢驗科，浙江 杭州310004；3、浙江省血液中心獻服二科，浙江 杭州310005）

目的 驗證Sysmex CS5100全自動凝血儀的系統性能，確定該檢測系統是否穩定、準確、可靠。方法 從變異系數（CV）、準確度、檢測限、線性范圍、攜帶污染率、干擾試驗等方面對Sysmex CS5100系統性能進行驗證。結果 驗證精密度最大CV為8.6%；驗證準確度最大偏倚為7.12%；Fg線性驗證實驗結果顯示Fg線性范圍為1.032～5.878，相關系數為r為0.9999；攜帶污染率最大值為-2.49%；血紅蛋白小于或等于4.83g/L；甘油三酯小于或等于5.64mmol/L；總膽紅素小于或等于322μmol/L時，偏離值小于或等于10%，驗證全部通過。結論 Sysmex CS5100凝血分析儀檢測精密度好，準確度高，檢測范圍寬，攜帶污染率低，抗干擾能力強，能夠較好的滿足實驗室對于凝血功能檢測的需求。

性能驗證；Sysmex CS5100；檢測系統

凝血功能測試通常包括PT、APTT、TT、Fg和D-二聚體等項目，根據這些檢測項目，醫生可以判斷病人凝血、出血狀況，繼而再根據病人病情進展來決定下一步診治方案，例如對于創傷性大出血病人進行大量輸血時，醫生需要及時監測患者凝血功能，來科學配比血漿與濃縮紅細胞［1］，所以凝血檢查對于醫生的診治有著重要指導意義。隨著科技水平的不斷提高，醫院檢驗科越來越多的檢測項目都可以通過自動化的設備來完成，自動化設備有著檢測快速、結果穩定、標本用量少等許多優點，但是，由于檢測設備屬于一個檢測系統，可能存在著一定的系統誤差，所以ISO15189《醫學實驗室質量和能力的認可準則》對于臨床實驗室儀器性能評估做出了明確要求：儀器安裝后或每次維修后，必須對儀器的技術性能進行評估。Sysmex CS5100凝血分析儀是一部集凝固法、發色底物法和免疫法于一體，采用透射光加百分比測定原理的全自動凝血儀。為保證檢驗質量，我們對該儀器進行了系統評價，包括變異系數（CV）、準確度、線性范圍、攜帶污染率、干擾試驗等指標。現報告如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑Sysmex CS5100全自動凝血儀。CS5100全自動凝血儀使用廠家配套試劑及質控品：包括PT試劑（批號546833），APTT試劑（批號557161A），TT試劑 （批號44695），Fg試劑 （批號547225），質控品（批號528155，548248E）；高濃度樣本及低濃度樣本均來自解放軍第一一七醫院，按需由健康體檢標本與患者標本制備而成；干擾物：用血常規管采集靜脈血3ml，1500r/min離心5min，棄去上層血漿，留下紅細胞層，加入蒸餾水后充分混勻，待紅細胞完全破壞后上機測血紅蛋白濃度，待用；收集臨床上乳糜血清3ml，上機測量甘油三酯，放干凈容器內，充分混勻密封后放置于-80℃冰箱保存待用；收集臨床上黃疸血清3ml，上機測量總膽紅素，放干凈容器內，充分混勻密封后放置于-80℃冰箱保存待用［2］。

1.2方法

1.2.1精密度驗證⑴批內精密度：根據CLSI EP15-A文件［3］，取2個水平的標本，同一批次盡可能短時間內連續重復測定20次，記錄每次PT、APTT、TT和Fg測定結果，計算CV和SD（要求CV值低于廠商規定）。⑵批間精密度：參照CLSI EP5-A文件［4，5］，選取正常（Control-1）、異常（Control-2）質控品。每日每批次測2遍，早晚各1遍，連續5d，記錄每次PT、APTT、TT和Fg測定結果，計算CV 和SD（要求CV值低于廠商規定）。

1.2.2準確度驗證取2個水平質控品進行測定，記錄PT、APTT、TT和Fg結果，每個標本測3次，與參考值進行比較，計算偏倚。

1.2.3FIB可報告范圍驗證選取一份Fg濃度接近預期上限的高濃度血漿（H），用儀器自帶的緩沖液按照如下比例進行稀釋：1：0（0倍）、1：1（2倍）、1：3（4倍）、1：7（8倍）、1：15（16倍）、1：31（32倍），每個濃度測3次，將均值與理論值進行比較得出R，R在0.8到1.2之間的最大稀釋度為Fg可報告范圍。

1.2.4Fg線性驗證選取一份接近預期上限的高濃度血漿樣本（H），分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例稀釋，每個濃度測3次，計算均值，求得回歸方程Y=aX+b，驗證線性范圍。

1.2.5攜帶污染驗證使用制備的PT、APTT、TT、Fg高值和低值血漿，按以下方法驗證：⑴高值樣本污染：將低值樣本（N）置1和3位置，高值樣本（A）置于2位置，每個樣本測3次，記錄結果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。計算：k1=［N4-均值（N1，N2，N3）］/均值（N1，N2，N3）；⑵低值樣本污染：將高值樣本（A）置1和3位置，低值樣本（N）置于2位置，每個樣本測3次，記錄結果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。計算：k2=［A4-均值（A1，A2，A3）］/均值（A1，A2，A3），測定結果應符合廠家要求（≤10%）［6］。

1.2.6干擾試驗驗證在正常混合血漿中加入干擾物（血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯），分別測定PT、APTT、Fg、TT，每個樣本測2次計算均值，以原混合血漿為對照，并計算偏離值，得出偏離值控制在10%以內的最大干擾物濃度。

1.3統計學處理采用Office 2010及SPSS 19.0統計軟件。

2　結果

2.1精密度驗證批內、批間驗證結果見表1，CV值均低于10%，驗證通過。

2.2準確度驗證結果在質控品標識可控范圍內，見表2。

表1　精密度驗證結果

表2　準確度驗證結果

2.3可報告范圍將標本按2、4、6、8、16倍稀釋，每個濃度測定3次得均值，再用均值除以理論值得R值，求R在0.8～1.2之間的最大稀釋倍數，再用最大稀釋倍數乘以高濃度樣品值得到的最高值即為最大可報告范圍［7］。

2.4線性驗證各濃度的Fg測定值和標準值之間具有良好的線性關系，r值為0.9999，＞0.975，a值為0.9989，在所要求的1±0.05范圍內，線性范圍1.032～5.878g/L，見圖1。

2.5攜帶污染驗證高值樣本對低值樣本的污染和低值樣本對高值樣本的污染的攜帶污染率均在±10%范圍內，驗證通過，結果見表4。

圖1　線性驗證

2.6干擾試驗驗證當干擾物在以下濃度：血紅蛋白小于或等于4.83g/L；甘油三酯小于或等于5.64 mmol/L；總膽紅素小于或等于322μmol/L時，偏離值小于或等于10%，驗證通過。

3　討論

隨著檢驗醫學的發展和對質量要求的提高，人們開始認識和關注檢測系統的重要性，并且市場上充斥著各種各樣品牌的設備，使得用戶對于不同種類設備性能無法完全了解，所以，國內出現越來越多關于凝血儀性能評價的報道［8-11］。SysmexCS5100全自動凝血儀無疑有著優秀的檢測能力，相比其前幾代產品，其檢測速度、多項目綜合處理能力不斷提高，可監測樣本溶血、黃疸及乳糜情況，自動調整波長，具備自動再檢、自動連鎖篩選及凝血因子抑制物分析等功能。然而，在投入使用前，由于是新使用的檢測系統，盡管儀器廠商在裝機時已經提供了儀器性能的初步參數，但因為各實驗室之間存在各種差異，在使用前必須對儀器重新進行性能評價。這是保證檢驗質量的一個重要措施，也是進行實驗室認可的要求。

表3　不同稀釋度樣品Fg結果

表4　攜帶污染驗證結果（%）

在我們的驗證實驗中，Sysmex CS5100檢測系統在檢測PT、APTT、TT和Fg時，批內不精密度≤5%，批間不精密度≤10%，均小于廠家參數，可以認為該系統具有較好穩定性，檢測重復性良好；使用兩個固定值質控檢測準確度，將3次檢測求得的平均結果與靶值相比，Fg在兩個水平質控物測定中，偏倚均在±5%以內，PT、APTT、TT偏倚均在± 10%內，可以認為系統準確性高；Fg可報告范圍驗證中，將標本稀釋16倍時為Fg檢測限，我們得出其檢測限為0.3g/L；Fg濃度在1.032～5.878g/L范圍內時，期望值與測定值差異極小，線性關系良好，能夠滿足大部分標本的檢測范圍；另外，干擾實驗反映了該系統對于血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯的抗干擾能力較強，反映出儀器確實能夠自動監測異常樣本，通過自動調整波長的方式降低了樣本要求，這不僅較好的保證了實驗結果準確性，也減少了我們工作人員重新采樣的次數。

所以，通過我們的性能驗證，可以認為Sysmex CS5100全自動凝血儀不僅達到了臨床檢驗需求，也符合標準化實驗室的質量管理要求。當然，另一方面來說，操作人員的因素對于儀器運行狀態也有著較大影響，我們在平時的檢測過程中應注意：樣本是否達到要求，嚴重溶血、黃疸、脂血對于結果會產生較大影響；采集是否足量，抗凝劑的稀釋作用會造成PT、APTT結果異常；必須保證所有標本盡快離心、檢測，使結果更可信；與臨床醫生保持溝通，提醒其知曉部分藥物對結果造成的干擾；嚴格按照操作規程進行操作，每日進行室內質控，定期參加室間質評，定期進行校正、保養及維護［12］，這樣才可以保證檢測結果準確可靠。

［1］熊勤.創傷性大失血患者輸注不同比例血漿與濃縮紅細胞后的凝血功能檢測評價［J］.實驗與檢驗醫學，2013，31（3）：285-286.

［2］張鴻偉，劉斌.美創AMAX-200血凝分析儀性能的初步評價［J］.檢驗醫學與臨床，2013，10（8）：1018-1020.

［3］Clinical and Laboratory Standards Institute.EP15-A2 User verification of performance for precision and trueness；approved guideline-second edition［S］.Wayne，PA：CLSI，2005.

［4］Clinical and Laboratory Standards Institute.EP5-A2 Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods；approved guideline-second edition［S］.Wayne，PA：CLSI，2004.

［5］楊志釗，繆麗韶，楊山虹，等.利用CLSI EP15-A指南驗證精密度與準確度［J］.國際檢驗醫學雜志，2010，31（3）：231-232，237.

［6］王芳，張軍，徐唯傑，等.SYSMEX CS5100全自動血凝分析儀的性能評價［J］.檢驗醫學，2015，30（2）：177-180.

［7］簡正偉，胡意，張世錕，等.CA-7000全自動血凝儀性能評價的探討［J］.實驗與檢驗醫學，2012，30（6）：548-554.

［8］黃彬，陳茶，鐘武平.Sysmex CA6000全自動血凝儀實驗性能評價［J］.臨床檢驗雜志，2003，21（4）：82-83.

［9］唐寧，曹文靜，夏汛生，等.ACL TOP全自動血凝分析系統的性能評價［J］.醫療設備信息，2007，22（2）：48-51.

［10］陸紅兵，孫文旦，王妍，等.STA-compact型全自動血凝儀的性能評價［J］.血栓與止血學，2005，11（4）：174-175.

［11］彭明婷，谷小林.Sysmex CA-50型血凝儀的性能評價［J］.中華檢驗醫學雜志，2000，23（5）：315-317.

［12］李秀蘭，於蘭婭.凝血實驗檢測結果的影響及分析［J］.實驗與檢驗醫學，2010，28（4）：404-405.

R446.11+1

A

1674-1129（2016）04-0482-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.022

吳乾波，E-mail：dick2349@sina.com

（2016-02-24；

2016-04-28）