細(xì)胞核DNA含量在慢性萎縮性胃炎伴異型增生中醫(yī)證型中的比較及其意義

張冬英　吳耀南　張玉鳳（福建省廈門市中醫(yī)院　廈門351009）

●臨床研究●

細(xì)胞核DNA含量在慢性萎縮性胃炎伴異型增生中醫(yī)證型中的比較及其意義

張冬英吳耀南張玉鳳
（福建省廈門市中醫(yī)院廈門351009）

目的：觀察細(xì)胞核DNA含量在慢性萎縮性胃炎伴異型增生的中醫(yī)各證型中的變化，探索中醫(yī)辨證分型的客觀指標(biāo)，以更好地協(xié)助指導(dǎo)中醫(yī)藥防治慢性萎縮性胃炎伴異型增生。方法：選取146例慢性萎縮性胃炎伴異型增生患者進(jìn)行中醫(yī)辨證分型；采用Feulgen染色、病理圖像定量分析細(xì)胞核DNA含量。結(jié)果：（1）DNA含量隨異型增生程度的加重逐漸增加，且輕、中、重度異型增生之間存在非常顯著性差異（P＜0.01）。（2）DNA含量在各證型間存在非常顯著性差異（P＜0.01），且胃絡(luò)瘀血型＞胃陰不足型＞脾胃虛弱型＞脾胃濕熱型＞肝胃不和型。結(jié)論：（1）慢性萎縮性胃炎伴異型增生的中醫(yī)辨證分型有其一定的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。（2）輕、中、重度異型增生均有癌變的可能，且隨著異型增生程度的加重癌變的可能性逐漸增大。（3）慢性萎縮性胃炎伴異型增生的中醫(yī)證型在病情上存在一定的輕重遞進(jìn)關(guān)系，具體表現(xiàn)為胃絡(luò)瘀血型＞胃陰不足型＞脾胃虛弱型＞脾胃濕熱型＞肝胃不和型。（4）檢測DNA含量可作為活檢慢性萎縮性胃炎伴異型增生的診斷、分級和中醫(yī)辨證分型的參考指標(biāo)，并能協(xié)助指導(dǎo)臨床診治。

慢性萎縮性胃炎；異型增生；中醫(yī)證型；DNA含量

胃黏膜上皮異型增生是國內(nèi)外公認(rèn)的癌前病變，代表腫瘤性生長的起始階段，屬于浸潤前階段，若不及時(shí)治療可能發(fā)展為浸潤性癌［1］。胃癌的發(fā)生發(fā)展與癌基因激活、抑癌基因失活、抗凋亡基因過度表達(dá)、抑制細(xì)胞凋亡、刺激細(xì)胞分化和增殖密切有關(guān)［2］。特別是DNA含量的異常與胃黏膜癌前期病變的關(guān)系引起了高度重視。多種癌基因被激活而抑癌基因被抑制，使增殖加快，胃黏膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡之間的動態(tài)平衡被破壞，并由此增加DNA損傷卻得不到及時(shí)修復(fù)，產(chǎn)生非整倍體，而又啟動不了凋亡機(jī)制使之自行死亡，則可能逐漸進(jìn)展為癌［3］。本研究旨在觀察細(xì)胞核DNA含量在慢性萎縮性胃炎伴異型增生的中醫(yī)各證型中的變化情況，探討各證型之間在分子生物學(xué)水平上有無一定的差異，探索中醫(yī)辨證分型的客觀指標(biāo)，更好地協(xié)助指導(dǎo)中醫(yī)藥防治慢性萎縮性胃炎及胃癌前期病變。

1　資料與方法

1.1一般資料所有入選病例均來自于廈門市中醫(yī)院2011年1月～2014年2月門診及住院病人，均經(jīng)電子胃鏡檢查及胃黏膜病理組織活檢證實(shí)為慢性萎縮性胃炎伴異型增生，并經(jīng)我院消化內(nèi)科專家根據(jù)2002年中國醫(yī)藥科技出版社出版的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》第一版中的中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行辨證分型。觀察對象共146例，其中男78例，女68例；年齡24～85歲，平均年齡（54.86±14.02）歲；病程2～40年，平均（8.58±4.27）年；中醫(yī)辨證為肝胃不和型22例，脾胃虛弱型26例，脾胃濕熱型32例，胃陰不足型39例，胃絡(luò)瘀血型27例；屬輕度萎縮性胃炎者55例，中度48例，重度43例；異型增生屬輕度95例，中度30例，重度21例。上述各證型間性別、年齡經(jīng)檢驗(yàn)無顯著性差異（P＞0.05）。

1.2治療方法對146例患者進(jìn)行常規(guī)胃鏡檢查，取胃竇、胃體部或病灶處胃黏膜組織進(jìn)行病理組織活檢，新鮮標(biāo)本用10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚度切片，HE染色。病理檢查依照上述標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)為慢性萎縮性胃炎伴異型增生者，進(jìn)一步檢測細(xì)胞核DNA倍體含量。

1.3DNA含量的測定取備用的石蠟塊作厚度為4 μm的切片，行常規(guī)Feulgen染色。在MDIAS-500型彩色病理圖像分析系統(tǒng)下對Feulgen染色切片作細(xì)胞核DNA原位定位測量，切片放大400倍（40× 10），每例隨機(jī)檢測100～200個(gè)細(xì)胞及50個(gè)以上淋巴細(xì)胞，取其均值作為2 C對照值。由主計(jì)算機(jī)對細(xì)胞核積分光密度值進(jìn)行運(yùn)算，得出細(xì)胞核DNA的相對含量，用DI表示［4］。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及四格表χ2檢驗(yàn)進(jìn)行兩樣本率的比較。計(jì)量資料采用F檢驗(yàn)，兩兩之間比較采用q檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1各級異型增生與DNA含量 （DI值）的關(guān)系見表1。經(jīng)F檢驗(yàn)，P=0.00＜0.01，說明三組間DNA倍體含量存在非常顯著性差異。進(jìn)一步以q檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，得出兩兩之間均存在非常顯著性差異（P均＜0.01），而且DNA含量重度異型增生＞中度異型增生＞輕度異型增生。

表1　各級異型增生中DNA含量（DI值）情況

2.2證型類別與異型增生的關(guān)系見表2。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，P=0.002＜0.01，可認(rèn)為各證型在輕、中、重度異型增生分布上具有非常顯著性差異，且肝胃不和型、脾胃濕熱型、脾胃虛弱型、胃陰不足型、胃絡(luò)瘀血型的輕度異型增生百分率依次逐漸下降，而中、重度異型增生的百分率依次上升。

表2　證型類別與異型增生的關(guān)系［例（%）］

2.3慢性萎縮性胃炎伴異型增生中醫(yī)各證型與DNA含量 （DI值）的關(guān)系見表3。經(jīng)檢驗(yàn)，P= 0.010，表明不同證型間DNA倍體含量具有非常顯著性差異，進(jìn)一步以q檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，可得出脾胃濕熱與胃陰不足、胃絡(luò)瘀血之間，肝胃不和與胃陰不足、胃絡(luò)瘀血之間，脾胃虛弱與胃絡(luò)瘀血之間DNA含量均有顯著性差異（P均＜0.05），其余各證型之間無顯著性差異（P均＞0.05），而且DNA非整倍體含量胃絡(luò)瘀血型＞胃陰不足型＞脾胃虛弱型＞脾胃濕熱型＞肝胃不和型。

表3　各證型中DNA倍體含量（DI值）情況

3　討論

正常體細(xì)胞是DNA含量比較恒定的二倍體細(xì)胞，不隨性別、種族和年齡而改變。少數(shù)組織如肝、腎、心肌等可有少量多倍體細(xì)胞，其DNA含量直方圖呈整倍多倍體分布，如2 c、4 c、8 c等。受到致癌因素刺激時(shí)，DNA受到損傷，細(xì)胞基因突變與染色體畸形或斷裂，細(xì)胞在分裂增殖過程中出現(xiàn)DNA量的丟失、擴(kuò)增或染色體移位、不分離等，導(dǎo)致細(xì)胞DNA的質(zhì)和量異常，基因排列順序發(fā)生改變，使原有的細(xì)胞生物學(xué)特征發(fā)生改變，成為DNA含量異常（增多或減少）的腫瘤細(xì)胞，即DNA非整倍體細(xì)胞，亦稱異倍體細(xì)胞［5］。張軍等［6］研究顯示從正常胃粘膜、慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎伴腸化、伴不典型增生，直至發(fā)生胃癌，隨著胃黏膜病變的逐漸加重，DNA異倍體的出現(xiàn)率逐漸升高。這可能是細(xì)胞染色體組發(fā)生某些不穩(wěn)定性改變的結(jié)果，一旦這些不穩(wěn)定性的改變積累到一定程度，出現(xiàn)優(yōu)勢細(xì)胞克隆時(shí)，必然發(fā)生細(xì)胞癌變。說明DNA異倍體的出現(xiàn)可能是胃癌前病變發(fā)生癌變的一個(gè)重要標(biāo)志物。國內(nèi)外研究均表明，腫瘤細(xì)胞DNA非整倍體是惡性腫瘤的特征性標(biāo)志之一，隨著DNA含量上升，異倍體或非整倍體的發(fā)生率也隨之升高。因此，測定細(xì)胞核DNA含量與倍體可以了解細(xì)胞增殖狀態(tài)，從而判斷細(xì)胞有無惡變傾向或惡性程度，其對惡性腫瘤的早期診斷具有重要價(jià)值［7］。

本研究發(fā)現(xiàn)所選病例標(biāo)本的細(xì)胞核DNA相對含量均為非整倍體，且隨異型增生的程度加重，DNA含量逐漸增加，經(jīng)檢驗(yàn)各組間存在非常顯著性差異（P均＜0.01），見表1。由此可知隨著胃黏膜異型增生程度的加重，其DNA含量越接近于胃癌。因此DNA含量檢測對胃癌前病變的臨床監(jiān)測具有實(shí)用價(jià)值，可作為檢測胃黏膜癌變潛能的一個(gè)重要參考指標(biāo)。

中醫(yī)學(xué)中并沒有“慢性萎縮性胃炎伴異型增生”這一病名，但根據(jù)其臨床癥狀特征，可將其歸于中醫(yī)“胃痛、痞證、嘈雜、反胃”等范疇。病因主要與飲食不節(jié)、喜進(jìn)熱燙粗糙或刺激性食物、嗜好煙酒、情志不節(jié)、郁思惱怒、素體虛弱、勞倦內(nèi)傷或用藥不當(dāng)、久病體虛等有關(guān)。對于其病機(jī)目前國內(nèi)已較一致地認(rèn)為是以脾胃氣陰兩虛為本，兼有氣滯、胃熱、血瘀的本虛標(biāo)實(shí)之證；因虛挾邪，因?qū)嵵绿撌瞧渲饕牟C(jī)轉(zhuǎn)化規(guī)律［8］。本研究在所觀察的病例中發(fā)現(xiàn)輕度異型增生期以肝胃不和型、脾胃濕熱型為多見，中度異型增生期以脾胃虛弱型和胃陰不足型多見，至重度異型增生則以胃絡(luò)瘀血型多見（見表2）。可見胃絡(luò)瘀血是癌前病變的晚階段事情，整個(gè)過程與因邪致虛，因虛生邪及久病入絡(luò)、久病必瘀的觀點(diǎn)是相一致的。

通過檢索可知中醫(yī)對本病的認(rèn)識主要集中于對病因病機(jī)方面的闡述及中醫(yī)藥治療的經(jīng)驗(yàn)，而就中醫(yī)證型與DNA含量的關(guān)系探討為之甚少。涂福音等［9］研究發(fā)現(xiàn)中醫(yī)分型與病理類型存在相關(guān)性，病理診斷為淺表性胃炎者，中醫(yī)辨證多為肝胃不和型或脾胃濕熱型；病理診斷為萎縮性胃炎者，中醫(yī)辨證多為胃陰不足型或脾胃虛弱型。林一凡等［10］研究表明胃絡(luò)瘀滯型與胃絡(luò)灼傷型胃黏膜DNA含量、超2倍體、超4倍體細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及核平均面積、周長、體積均較胃熱型與胃寒型明顯增高，DNA含量直方圖非整倍體型組中胃絡(luò)瘀滯型黏膜明顯高于整倍體型組。對其中63例進(jìn)行了6～72個(gè)月的隨訪，癌變組中胃絡(luò)瘀滯型黏膜明顯高于未癌變組，差異均有顯著意義。表明胃絡(luò)瘀滯型胃黏膜異型增生與癌變關(guān)系密切。本研究結(jié)果顯示：慢性萎縮性胃炎伴異型增生中醫(yī)各證型間DNA含量胃絡(luò)瘀血型＞胃陰不足型＞脾胃虛弱型＞脾胃濕熱型＞肝胃不和型，經(jīng)檢驗(yàn)各證型間存在非常顯著性差異（P=0.010），見表3。此與中醫(yī)學(xué)的觀點(diǎn)是相一致的，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病發(fā)病初期以實(shí)證為主，故臨床以肝胃不和型、脾胃濕熱型多見；病久則因邪致虛，出現(xiàn)氣虛、陰虛等證候，以脾胃虛弱型、胃陰不足型多見；后期則因虛生邪，虛實(shí)夾雜，以胃絡(luò)瘀血型多見。

以上這些結(jié)果從分子生物學(xué)角度證實(shí)了慢性萎縮性胃炎伴異型增生從中醫(yī)證型的肝胃不和型→脾胃濕熱型→脾胃虛弱型→胃陰不足型→胃絡(luò)瘀血型是一個(gè)病情由輕到重的漸進(jìn)過程，說明中醫(yī)的辨證分型不是籠統(tǒng)的、主觀的概念，而是由量化的、客觀的病理組織學(xué)及分子生物學(xué)的改變延生到外的投射。通過對本病中醫(yī)各證型中細(xì)胞核DNA含量的變化分析比較，不僅為揭示本病的中醫(yī)證型的客觀化提供了幫助，也為深入研究其病理實(shí)質(zhì)、及對臨床上的合理組方、提高臨床療效提供了必要的條件，對于指導(dǎo)中醫(yī)藥診治胃黏膜癌前病變具有一定的意義。

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Study the Nuclear DNA Content in the Syndromes of Traditional Chinese Medicine for Chronic Atrophic Gastritis with Dysplasia

ZHANG Dong-ying，WU Yao-nan，ZHANG Yu-feng
（Xiamen Hospital of TCM，F(xiàn)ujian，Xiamen351009）

Objective:Observing the nuclear DNA content in the syndromes of traditional chinese medicine（TCM）of chronic atrophic gastritis with dysplasia，studying the difference of the syndromes of TCM in the molecule biology level.Exploring objective indicators of syndromes of TCM as a guidance for preventing and treating the chronic atrophic gastritis with dysplasia in TCM.Methods: 146 Cases with chronic atrophic gastritis with dysplasia were divided into five types according to the Syndrome differentiation of TCM. The nuclear DNA content was quantitatively determined by Feulgen dying method and pathological image analysis.Results:（1）The nuclear DNA content increased with the increment of the severity of dysplasia in gastric mucosa，and there was very significant difference among Mild，moderate and severe types of dysplasia（P＜0.01）.（2）Significant difference of the nuclear DNA content was found in all types of the syndromes of TCM，and the regular sequence was Disharmony between the Liver and Stomach，Damp Heat in the Spleen and Stomach，Deficiency of the Spleen and Stomach，Deficiency of Stomach Yin，Blood Stagnation of the Stomach.Conclusions:（1）The syndromes of TCM of chronic atrophic gastritis with dysplasia were on the basis of molecule biology reliably，and it might play partly a good guidance in treating this disease.（2）Mild，moderate and severe dysplasia had the possibility of carcinogenesis，and this kind of possibility increased with the increment of the severity of dysplasia in gastric mucosa.（3）The worse of the syndromes of TCM of chronic atrophic gastritis with dysplasia increased by degrees，and the regular sequence was Disharmony between the Liver and Stomach，Damp Heat in the Spleen and Stomach，Deficiency of the Spleen and Stomach，Deficiency of Stomach Yin，Blood Stagnation of the Stomach.（4）It had been approved that the nuclear DNA content could be used as some important indexes for diagnosis and classification of chronic atrophic gastritis with dysplasia，and the guidance of treatment，too.

Chronic atrophic gastritis；Gastric epithelial dysplasia；Syndrome of TCM；The nuclear DNA content

R573.3

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.01.003

2015-09-02）