GC法測定維A酸殘留溶劑

李佳陽，魯利彥

(東北制藥集團股份有限公司，遼寧　沈陽　110027)

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GC法測定維A酸殘留溶劑

李佳陽，魯利彥

(東北制藥集團股份有限公司，遼寧沈陽110027)

建立了GC法對維A酸殘留溶劑甲醇進行檢測。色譜柱DM-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm)；分流比：1:1；檢測器溫度：200 ℃；進樣器溫度：250 ℃；載氣：N2；柱溫程序：60 ℃保持5 min，40 ℃/min升溫至220 ℃保持3 min；柱流速：10.0 mL/min，恒流模式；進樣量：1.0 mL；檢測器：FID；頂空進樣。結果表明：方法線性R≥0.99，甲醇檢測限≤0.0050%。方法準確靈敏，可用于維A酸殘留溶劑進行檢測。

GC法；維A酸；殘留溶劑

維A酸是體內維生素A的代謝中間產物，主要影響骨的生長和促進上皮細胞增生、分化、角質溶解等代謝作用。用于治療尋常痤瘡、銀屑病、魚鱗病、扁平苔癬、毛發紅糠疹、毛囊角化病、鱗狀細胞癌及黑色素瘤等疾病。本文運用GC方法，建立了能夠將維A酸中殘留的甲醇定量檢測的方法。

1　實　驗

1.1儀器與試藥

氣相色譜儀：Agilent 6890N；頂空進樣器：Agilent G1888；色譜柱：DM-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm)及DB-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm)。

甲醇：色譜純；二甲亞砜：色譜純。

1.2測試條件

分流比：1:1；

檢測器溫度：200 ℃；

進樣器溫度： 250 ℃；

載氣： N2；

柱溫程序：60 ℃保持5 min，40 ℃/min升溫至220 ℃保持3 min；

柱流速：10.0 mL/min，恒流模式；

進樣量：1.0 mL；

檢測器：FID；

頂空條件：頂空溫度：95 ℃，傳輸線溫度：110 ℃,平衡時間：30 min；

GC循環時間：23 min。

1.3溶液制備

1.3.1標準貯備液配制

準確稱取甲醇1.2005 g，置于100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻 (相對濃度：甲醇30.0125%)。

1.3.2標準溶液配制

準確吸取標準貯備液1.00 mL，用二甲亞砜稀釋至100 mL，搖勻(相對濃度甲醇：0.3001%)。

1.3.3空白

二甲亞砜。

1.3.4樣品溶液的制備

稱取供試品0.2 g，精密稱定，置于20 mL頂空瓶，加二甲亞砜5.00 mL溶解，密封。

1.4驗證所使用的試劑與標準品

甲醇：批號：20120115211,色譜純；二甲亞砜：批號：77965,色譜純。

2　結果與討論

2.1系統適用性

待儀器穩定后，精密吸取標準溶液5 mL六份于六個頂空瓶中，立即密封。注入色譜儀。

甲醇RSD=3.73%(≤10.0%)。

2.2方法專屬性

單獨進樣稀釋用的溶劑，證明該溶劑對被測殘留溶媒無干擾；單獨進樣每一個須測定的溶劑標準品，確定其保留時間；進樣標準溶液，計算分離度以確定所有待檢溶劑間無干擾。

溶劑名稱：甲醇；保留時間：1.06 min；柱效N甲醇=4981。

2.3樣品測定

分別檢測三批供試品，得到測定結果(見表1)。

表1　樣品測定結果Table 1　Sample test result

2.4檢測限與定量限

利用信噪比法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地定量的被測物質的最低濃度。

將標準溶液分別用空白稀釋，計算S/N。一般以信噪比S/N在3:1或2:1時相應濃度確定檢測限濃度；一般以信噪比S/N 在10:1時相應濃度確定定量限濃度。檢測限=0.003%，定量限=0.015%。

2.5線性關系

2.5.1溶液配制

(1)50%標準溶液：準確吸取標準貯備液0.5 mL，用二甲亞砜稀釋至100.0 mL，搖勻(甲醇濃度：60.025 μg/mL)。

(2)80%標準溶液：準確吸取標準貯備液0.8 mL，用二甲亞砜稀釋至100.0 mL，搖勻(甲醇濃度：96.04 μg/mL)。

(3)120%標準溶液：準確吸取標準貯備液1.2 mL，用二甲亞砜稀釋至100.0 mL，搖勻(甲醇濃度：144.06 μg/mL)。

2.5.2計算

用已知溶劑定量稱樣并配制成相對濃度為定量限濃度、50%、80%、100%、120%五種測試溶液。每種溶液平行進樣2次，計算平均峰面積。以樣品平均濃度對相應平均峰面積做回歸曲線，計算回歸方程及相應的線性回歸系數。

回歸方程:Y=1.48850X-2.81059

相關系數:R=0.99863

2.6甲醇準確度

制備含已知溶劑為定量限(配制方法見2.4)、50%、100%、120%四種濃度的溶液(配制方法見2.5.1)。選擇樣品(0311203001)定量稱樣15份，其中3份作為空白，其余12份分別加入上述四種濃度的溶液，每種濃度的溶液平行加入三份樣品中，進樣。

甲醇回收率：96.81%～109.7%。

2.7耐用性

耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為所建立的方法用于日常檢驗提供依據。

此次選擇考察的變動因素有：色譜柱、柱溫、柱流速等。

表2　不同條件下殘留溶劑檢測結果Table 2　The reducing solvent analysis results at different conditions

經試驗，測定條件小的變動能夠滿足系統適用性試驗要求，可確保檢驗方法的可靠性。

2.8中間精密度

考察隨機變動因素。此次驗證選擇的是不同日期、不同分析人員、不同儀器對精密度的影響。

表3　不同條件下殘留溶劑檢測結果Table 3　The reducing solvent analysis results at different conditions

經試驗，測定條件小的變動能夠滿足系統適用性試驗要求，檢測結果均無顯著差異，可確保檢驗方法的可靠性。

3　結　論

根據色譜條件，對本方法的專屬性、檢測限、定量限、系統適應性、系統精密度、線性關系、準確度、耐用性等進行驗證。其柱效N甲醇=4981，檢測限=0.003%，定量限=0.015%，并測得回收率96.81%～109.7%；線性范圍預期從最小定量限到標準限度的120%范圍內成線性關系，R≥0.99，結果符合規定。

根據實驗結果，與方案中的標準進行比較，通過配制供試品溶液進行色譜分析，調整色譜條件，建立適用性要求。分析方法驗證指導原則中的指標，本次采用的方法適合于相應檢測要求，可保證專屬、靈敏。此次維A酸殘留溶劑檢測分析方法驗證成功。故此方法可用于維A酸殘留溶劑檢測，并可有效保證產品質量。

[1]中人民共和國藥典2010年版2部[S].

[2]叢凡賀,李佳陽,辛瀟.氣相色譜法測定注射用頭孢他啶中的殘留溶媒[J].實用藥物與臨床,2009,12(S1):121-123.

[3]朱曉瓊,馮文宇,刁恩德.GC法測定乙酰左旋肉堿鹽酸鹽殘留溶劑[J].實用藥物與臨床,2013,16(S1):17-18.

Reducing Solvent in Tretinoin Analysis by GC

LI Jia-yang， LU Li-yan

(Northeast Pharmaceutical Group Co., Ltd., Liaoning Shenyang 110027, China)

Reducing methanol in tretinoin analysis method by GC was established. Using method chromatographic column DM-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm), split ratio was 1:1, detector temperature was 200 ℃, injector temperature was 250 ℃, N2was used as carrier gas, column temperature procedure, hold temperature was at 60 ℃ for 5 min, and then increased the temperature to 220 ℃ at 40 ℃/min and holded 3 min. column rate was 10 mL/min, under CC mode, injection volume was 1 mL, FID was used as detector, headspace sampling. Result showed linear R≥0.99, methanol detector limitation ≤0.0050%. The method is accuracy and sensitive which is suit for reducing solvent in tretinoin analysis.

GC method; tretinoin; reducing solvent

O657.7+1

B

1001-9677(2016)09-0124-03