宮頸癌組織中KGF、KGFR及MMP-9的表達變化

李爭，陳瑜，王振國

(1河北北方學院，河北張家口075000；2中國人民解放軍第三○九醫院)

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宮頸癌組織中KGF、KGFR及MMP-9的表達變化

李爭1，陳瑜1，王振國2

(1河北北方學院，河北張家口075000；2中國人民解放軍第三○九醫院)

目的觀察宮頸癌組織中角化生長因子(KGF)、KGF受體(KGFR)與基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法檢測56例宮頸癌組織(宮頸癌組)及21例正常宮頸組織(對照組)中的KGF、KGFR、MMP-9，分析三者與宮頸癌臨床病理參數的關系及三者表達的相關性。結果宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9表達陽性分別為40、26、44例，對照組分別為4、2、4例，宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9陽性表達例數與對照組相比，P均<0.05。有脈管轉移的宮頸癌組織中KGF、KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達例數高于無脈管轉移者(P均<0.05)；有淋巴結轉移者KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達例數高于無淋巴結轉移者(P均<0.05)；低分化者MMP-9陽性表達例數高于中、高分化者(P<0.05)。宮頸癌組織中KGF表達與KGFR、MMP-9表達均呈正相關關系(r分別為0.272、0.440，P均<0.05)。結論宮頸癌組織中KGF、KGFR、MMP-9表達增高，三者的異常表達與宮頸癌的發生發展有關，三者之間可能存在協同作用。

宮頸癌；角化生長因子；角化生長因子受體；基質金屬蛋白酶9

我國宮頸癌發病率為5.54%，在所有女性腫瘤中發病率居第四[1]。目前認為宮頸癌是一種感染性疾病，主要由高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染所致，但并非所有感染HPV的患者都會發生宮頸癌。所以宮頸癌發病可能是多因素共同作用的結果。角化生長因子(KGF)、KGF受體(KGFR)在上皮性腫瘤的發生發展中起重要作用，目前已發現二者在多種腫瘤組織中異常表達[2]。KGFR在宮頸癌細胞系Hela、CaSki及宮頸癌組織中亦呈高表達[3,4]，推測其表達可能與宮頸癌的發生發展有關。KGF主要作用于上皮細胞，具有促進上皮細胞有絲分裂、生長、分化、遷移等生物活性[5]，KGF可通過激活NF-κB從而誘導血管內皮生長因子A、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)和尿激酶型纖維酶原激活物表達[6]。MMP-9被證實與腫瘤侵襲及轉移有關。我們觀察了宮頸癌組織中KGF、KGFR與MMP-9的表達變化，并探討三者與宮頸癌發生發展的關系。

1　材料與方法

1.1組織標本2011年8月～2015年12月中國人民解放軍第309醫院手術切除的宮頸癌組織標本56例份(均為宮頸鱗癌，宮頸癌組)、正常宮頸組織標本21例份(對照組)。所有標本均來源于行宮頸癌根治術的宮頸癌患者。患者年齡25～65歲，FIGO分期ⅠA期7例、ⅠB期29例、ⅡA期15例、ⅡB期4例、Ⅲ期1例，組織病理學分級為高分化6例、中分化20例、低分化30例，術前未接受過放化療及靶向治療。

1.2主要試劑兔抗人KGF及KGFR多克隆抗體購自武漢博士德生物有限公司，鼠抗人MMP-9單克隆抗體、山羊血清封閉液和免疫組化試劑盒PV6000(一步法聚合物檢測系統)購自北京中杉生物技術公司。

1.3KGF、KGFR、MMP-9檢測方法采用免疫組化染色(即用型一步法)：石蠟包埋組織切片，常規脫蠟水化，高壓修復抗原(KGF、KGFR選用檸檬酸緩沖液，MMP-9選用EDTA)，經內源性過氧化酶(3% H2O2)阻斷劑孵育10 min，PBS緩沖液沖洗。5%山羊血清37 ℃封閉15 min，濾紙吸凈液體后加KGF/KGFR兔抗人多克隆抗體、MMP-9鼠抗人單克隆抗體(稀釋度1∶50)，4 ℃冰箱過夜。PBS緩沖液沖洗后加入即用型二抗，37 ℃孵育30 min，PBS緩沖液沖洗，常規DAB顯色，蘇木素復染、脫水、透明，封片鏡檢。相同石蠟切片以PBS替代一抗作為陰性對照，用已知陽性片作陽性對照。采用雙盲法由兩位病理科主任醫師分別閱片。蛋白表達定位于細胞質和(或)細胞膜。參照文獻[7]方法，以染色強度和陽性細胞百分比判定結果，染色強度為無色計0分、淡黃色計1分、棕黃色計2分、棕褐色計3分，陽性細胞百分比為0%計0分、≤10%計1分、>10%～50%計2分、>50%～75%計3分、>75%計4分，兩項得分相乘，>3判定為目的蛋白表達陽性。

1.4統計學方法采用SPSS20.0軟件進行統計分析。計數資料采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析法。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1宮頸癌組與對照組KGF、KGFR、MMP-9表達比較宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9表達陽性分別為40、26、44例，對照組分別為4、2、4例，宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9陽性表達例數與對照組相比，P均<0.05。見圖1～3。

注：A為宮頸癌組，B為對照組。

圖1兩組KGF表達情況

注：A為宮頸癌組，B為對照組。

圖2兩組KGFR表達情況

注：A為宮頸癌組，B為對照組。

圖3兩組MMP-9表達情況

2.2KGF、KGFR、MMP-9表達與宮頸癌臨床病理參數的關系有脈管轉移的宮頸癌組織中KGF、KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達例數高于無脈管轉移者(P均<0.05)；有淋巴結轉移者KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達例數高于無淋巴結轉移者(P均<0.05)；低分化者MMP-9陽性表達例數高于中、高分化者(P<0.05)。詳見表1。

表1　KGF、KGFR、MMP-9表達與宮頸癌臨床病理參數的關系(例)

注：與有淋巴結轉移者相比，#P<0.05；與有脈管轉移者相比，*P均<0.05；與低分化者相比，ΔP均<0.05。

2.3宮頸癌組織中KGF、KGFR、MMP-9表達的相關性KGF表達陽性的40例宮頸癌組織中，KGFR陽性22例、MMP-9陽性36例，Spearman等級相關分析結果顯示，KGF表達與KGFR、MMP-9表達均呈正相關關系(r分別為0.272、0.440，P均<0.05)。

3　討論

KGF是成纖維細胞生長因子家族成員之一，由Robin等[8]從胚胎肺成纖維細胞培養液上清中分離純化得到。KGF主要由各種來源的間質細胞及T淋巴細胞產生，作用于上皮細胞，具有促進上皮細胞增殖、分化、遷移等活性[9]。KGFR主要表達于上皮細胞，可被KGF特異性識別[10]，同時也可識別FGF-1、3、10，但KGF與KGFR之間的連接更具高效性，二者共同調節細胞的生理活動。早期研究[3,4,11,12]發現KGF、KGFR在宮頸癌細胞系Hela、CaSki及宮頸癌組織中有異常高表達，推測其表達可能與宮頸癌的發生發展有關。本研究中，宮頸癌組KGF、KGFR陽性表達例數高于對照組，且在有脈管轉移者和淋巴結轉移的宮頸癌組織中陽性表達例數更多，提示KGF、KGFR參與宮頸癌的發病，二者高表達與宮頸癌侵襲、轉移有關，與相關研究結果一致。

MMP-9為MMP家族成員之一，主要參與基底膜及細胞外基質Ⅳ膠原的水解，從而使腫瘤細胞突破組織屏障，對周圍正常組織進行侵襲并發生遠處轉移[13,14]。早期研究[15]表明，MMP-9表達隨宮頸病變嚴重程度增高而增高，可能是宮頸損傷的一種標志物。本研究中，宮頸癌組MMP-9陽性表達例數高于對照組，且在有淋巴結轉移、脈管轉移者的宮頸癌組織中表達更高，推測MMP-9高表達參與了宮頸癌的發病和進展，可能成為宮頸癌侵襲轉移能力的參考指標。

KGF僅能與KGFR相連接而發揮作用，因此抑制KGFR即可使KGF的生理活性受到抑制，二者在腫瘤發生發展中起協同作用。本研究結果顯示，宮頸癌組織中KGF與KGFR表達呈正相關關系，二者聯合表達在有脈管轉移的腫瘤組織中更為常見，證實了上述觀點。同時，宮頸癌組織中KGF表達與MMP-9表達也呈正相關關系，提示KGF、MMP-9協同參與宮頸癌的發病和侵襲，但二者協同致病的具體機制尚不明確，推測二者間可能存在一定的信號轉導通路，KGF可誘導MMP-9表達，促進腫瘤侵襲轉移[16～18]。

總之，宮頸癌的發生發展是多階段、多步驟的，KGF、KGFR、MMP-9異常表達參與了宮頸癌的發病和侵襲過程，三者之間存在一定相互作用。KGF、KGFR及MMP-9有望成為宮頸癌診斷及預后評估的標志物，甚至可能成為宮頸癌靶向治療的新的靶點。

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王振國(E-mail: guozheng1963@163.com)

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B

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2016-02-22)