子宮內膜腺癌組織中RAD51、BRCA1蛋白的表達變化及其意義

張曉敏，張英姿，胡雪穎，胡寧寧，孫聰聰

(1濱州醫學院，山東濱州256600；2濱州醫學院附屬醫院)

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子宮內膜腺癌組織中RAD51、BRCA1蛋白的表達變化及其意義

張曉敏1，張英姿2，胡雪穎1，胡寧寧1，孫聰聰2

(1濱州醫學院，山東濱州256600；2濱州醫學院附屬醫院)

目的觀察子宮內膜腺癌組織中DNA雙鏈修復蛋白(RAD51)、乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白的表達變化，分析二者與子宮內膜腺癌發生發展的關系。方法 收集子宮內膜腺癌組織52例、正常增生期子宮內膜組織45例，采用免疫組化法檢測RAD51、BRCA1蛋白，分析RAD51、BRCA1蛋白表達與子宮內膜腺癌臨床病理參數的關系。結果子宮內膜腺癌組織、增生期子宮內膜組織中BRCA1蛋白陽性分別為21(40.4%)、42(93.3%)例，RAD51蛋白陽性分別為42(80.8%)、7(15.6%)例，子宮內膜腺癌組織與增生期子宮內膜組織中BRCA1、RAD51蛋白陽性表達率相比，P均<0.05。子宮內膜腺癌組織BRCA1陽性的21例中，RAD51陽性9例；RAD51陽性的33例中，BRCA1陽性9例；BRCA1、RAD51蛋白表達呈負相關關系(r=-0.325，P<0.05)。BRCA1、RAD51蛋白表達與子宮內膜腺癌患者年齡、分化程度、FIGO分期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移情況無關(P均>0.05)。結論 子宮內膜腺癌組織中BRCA1蛋白陽性表達率降低，而RAD51陽性表達率升高；RAD51、BRCA1蛋白表達異?？赡芘c子宮內膜腺癌的發病有關。

子宮內膜腺癌；DNA雙鏈修復蛋白；乳腺癌易感基因1

子宮內膜癌是發生于子宮內膜的惡性上皮性腫瘤，以腺癌最多見，占生殖道惡性腫瘤的20%～30%[1]。已知子宮內膜腺癌與高雌激素水平、肥胖、高血壓、糖尿病、不孕癥及絕經延遲、遺傳因素有關，但其具體發病機制仍未明確。目前尚無特異性腫瘤標志物用以預測子宮內膜腺癌[2]。DNA雙鏈修復蛋白(RAD51)和乳腺癌易感基因1(BRCA1)在DNA損傷修復的同源重組中起關鍵作用，其表達異常與多種腫瘤的發生發展有關[3]。本研究觀察了子宮內膜腺癌組織中RAD51、BRCA1蛋白的表達變化，分析二者與子宮內膜腺癌臨床病理參數的關系，現報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料濱州醫學院附屬醫院病理科2013～2015年留存的子宮內膜腺癌組織蠟塊52例份，正常增生期子宮內膜組織蠟塊45例份。納入標準：患者有不規則陰道流血，排除妊娠、節育器移位或下移或崁頓、宮頸息肉或宮頸贅生物或宮頸癌造成的出血；患者出現癥狀前一年未曾口服雌激素類藥物或他莫西芬類藥物；患者未合并乳腺疾病、外陰疾病、卵巢良惡性腫瘤、胃腸道良惡性腫瘤等疾病；所有受試對象民族、生活地域、基礎疾病等一般情況均無明顯差異。其中子宮內膜腺癌患者年齡36～70(55±8)歲，術前均未接受放化療或其他治療；腫瘤高分化32例，中低分化20例；FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期40例，Ⅲ、Ⅳ期12例；浸潤深度<1/2肌層39例，≥1/2肌層13例；發生淋巴結轉移4例，無淋巴結轉移48例。

1.2RAD51、BRCA1蛋白檢測①免疫組化染色：將蠟塊以3 μm厚切片，經二甲苯、無水乙醇、95%乙醇脫蠟至水，pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液高壓抗原熱修復，3%H2O2封閉內源性過氧化物酶，PBS緩沖液浸泡后加入一抗，4 ℃過夜，加入二抗，37 ℃孵育，DAB顯色，蘇木素復染，脫水封片；將RAD51、BRCA1抗體以1∶100稀釋，染色步驟按說明書進行，以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知RAD51陽性乳腺癌組織切片及BRCA1陽性正常乳腺組織切片作為陽性對照。②結果判定：以細胞核和(或)細胞質出現棕黃色顆粒為RAD51陽性表達，以細胞質或細胞核出現棕黃色顆粒為BRCA1陽性表達；每張切片選取10個視野，在高倍鏡(400×)下觀察，分別根據陽性細胞百分比和染色強度計分，陽性細胞百分比≤25%計1分、>25%～50%計2分、>50%～75%計3分、>75%計4分，染色程度為無著色計0分、淡黃色計1分、棕黃色計2分、棕褐色計3分，兩項得分相乘，>3為陽性、≤3為陰性。

1.3統計學方法采用SPSS19.0軟件進行統計處理。計數資料采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman相關分析法。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1子宮內膜腺癌組織與增生期子宮內膜組織中BRCA1、RAD51蛋白表達比較子宮內膜腺癌組織、增生期子宮內膜組織中BRCA1蛋白陽性分別為21(40.4%)、42(93.3%)例，RAD51蛋白陽性分別為42(80.8%)、7(15.6%)例，子宮內膜腺癌組織與增生期子宮內膜組織中BRCA1、RAD51蛋白陽性表達率相比，P均<0.05。

2.2子宮內膜腺癌組織中BRCA1、RAD51蛋白表達相關性子宮內膜腺癌組織BRCA1陽性的21例中，RAD51陽性9例；RAD51陽性的33例中，BRCA1陽性9例；BRCA1、RAD51蛋白表達呈負相關關系(r=-0.325，P<0.05)。

2.3BRCA1、RAD51蛋白表達與子宮內膜腺癌臨床病理參數的關系BRCA1、RAD51蛋白表達與子宮內膜腺癌患者年齡、分化程度、FIGO分期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移情況無關(P均>0.05)。詳見表1。

表1　BRCA1、RAD51蛋白表達與子宮內膜腺癌臨床病理參數的關系(例)

3　討論

近年來，子宮內膜癌發病率升高，且發病呈年輕化趨勢[3]。子宮內膜癌的首選治療方式是手術治療，但對于希望保留子宮的年輕患者來說難以接受，所以早期篩查尤為必要。CA125作為常用的腫瘤標志物，能夠反映腫瘤患者術后預后及復發情況，但用于早期子宮內膜癌篩查特異性及敏感性不高。Jiang等[4]報道只有25%的子宮內膜癌患者術前血清CA125表達陽性。因此，有必要尋找準確性更高的指標。

BRCA1是細胞核內重要的磷酸化蛋白，可抑制細胞生長，參與DNA損傷修復，其轉錄并編碼出的磷酸化蛋白上有DNA損傷修復相關功能區，如重組酶RAD51因子結合區、抑癌基因p53結合區。RAD51是大腸桿菌RecA蛋白同系物，具有DNA依賴性ATP激酶活性，其蛋白有多個致密區，靠氨基末端磷酸化來調控。以上BRCA1蛋白上的DNA損傷修復相關功能區、RAD51蛋白的致密區內位點基因突變或磷酸化功能改變已被證實對DNA損傷修復產生明顯影響，從而導致乳腺癌、卵巢癌發病[5]。

大量體內外因素如紫外線、放射線、烷化劑、化學致突變劑、DNA交聯劑、DNA修復抑制劑、DNA復制過程破壞及細胞生成過程中蛋白重組等均可致細胞DNA損傷，其中DNA雙鏈斷裂(DSB)被認為是細胞凋亡的直接誘因。同源重組(HR)是指發生在同源DNA序列間的重組，其修復過程是DSB損傷修復的主要方式，對保持基因組完整性至關重要[6]。DSB修復過程中，BRCA1可引導識別DNA損傷，之后由RAD51作為HR的中心分子，合成新鏈進而完成損傷修復，維持細胞穩定性[7]。RAD51、BRCA1適當表達對修復自發性DNA損傷是必須的，但異常表達可導致基因組不穩定，受損細胞向腫瘤細胞發展，并使腫瘤細胞產生耐藥性[8]。

臨床放化療的機制是刺激細胞核內DNA，使DNA鏈間或鏈內交聯，導致雙鏈斷裂和損傷，從而抑制腫瘤細胞分裂、增殖，促進其凋亡。RAD51、BRCA1是DNA損傷修復途徑中的重要基因，二者表達與腫瘤化放療敏感性有關。Tassone等[9]研究發現，在對順鉑耐藥的乳腺癌和卵巢癌細胞系中，BRCA1表達水平明顯升高，而抑制BRCA1表達則可減弱DNA重組修復功能，促進細胞凋亡，增強腫瘤細胞對順鉑的敏感性。Wang等[10]的體外細胞研究發現，BRCA1表達水平與腫瘤細胞對順鉑的敏感性呈負相關關系，但與腫瘤細胞對多西紫杉醇的敏感性呈正相關關系。張慧文等[11]也發現非小細胞肺癌的放療敏感性與BRCA1表達水平呈負相關關系。易俊林、Kong等[12，13]也得出了類似的結論。

我們觀察了子宮內膜腺癌組織與正常子宮內膜組織中BRCA1、RAD51蛋白的表達情況，發現子宮內膜腺癌組織中BRCA1蛋白陽性表達率較低，而RAD51陽性表達率較高，提示BRCA1、RAD51蛋白表達異?？赡軈⑴c了子宮內膜腺癌的發病，可能是通過影響DNA損傷修復過程實現的。BRCA1、RAD51蛋白在子宮內膜腺癌組織中的表達呈負相關關系，而BRCA1是一種抑癌基因，我們可以推測RAD51是作為一種癌基因在組織中表達，兩者的聯合檢測更有助于提高診斷子宮內膜腺癌的準確性。我們進一步分析了兩種蛋白與子宮內膜腺癌臨床病理參數的關系，但可能由于樣本量較小，尚未發現BRCA1、RAD51蛋白表達與子宮內膜腺癌患者年齡、分化程度、FIGO分期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移情況等存在關聯，下一步將擴大樣本深入研究。

總之，RAD51、BRCA1蛋白的表達異常可能與子宮內膜腺癌有關，但目前對RAD51、BRCA1的研究尚不全面，對于二者在DNA重組修復中的具體位置及相互作用、在不同腫瘤中的表達趨勢是否存在差異、對放化療敏感性的影響等方面仍有待于深入探討。

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