無償獻血者ELISA灰區標本的追蹤檢測結果分析

張國平焦作市中心血站，河南焦作　454000

無償獻血者ELISA灰區標本的追蹤檢測結果分析

張國平
焦作市中心血站，河南焦作454000

目的對無償獻血者ELISA灰區標本進行追蹤檢測，探討灰區的設置原則。方法使用ELISA對39 318名無償獻血者進行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP四項傳染性指標檢測；對既往獻過血的175名灰區結果獻血者進行追蹤檢測。結果39 318名無償獻血者中，酶免4項合計反應性標本105例，占獻血者總數的0.27%；灰區標本233例，占獻血者總數的0.59%。175名灰區獻血者追蹤檢測結果仍為灰區的68例，占38.9%；結果為非反應性的107例，占61.1%；未發現轉為反應性的標本。結論4項傳染性指標以初檢復檢兩次ELISA進行檢測的模式下，為了提高血液安全水平，應設置灰區；核酸檢測技術（NAT）應用于獻血者傳染性指標檢測后，可以對ELISA灰區標本進行NAT追蹤檢測，取得一定的研究數據后，進一步探討ELISA實驗的灰區設置問題。

無償獻血者；ELISA；灰區；追蹤檢測

［Abstract］Objective To track and test the ELISA grey-area specimens in blood donors without payment and study the setup principles of grey-area.Methods 39318 blood donors without payment were detected by four infectious indicators including HBsAg，anti-HCV，anti-HIV and anti-TP by ELISA，and 175 blood donors with grey-area results were tracked and detected.Results In 39318 blood donors without payment，there were 105 reactive specimens（four items in total by enzyme immunoassay），accounting for 0.27%and 233 grey-area specimens，accounting for 0.59%；tracking test results showed that in the 751 grey-area blood donors，there were still 68 grey-area donors，accounting for 38.9%and 107 non-reactive donors，accounting for 61.1%，and none was converted to reactive specimen.Conclusion In the pattern of four infectious indicators with initial examine and duplicate examine，the gray-area should be set in order to improve the blood safety level；NAT should be applied after the test of infectious indicators of blood donors，the ELISA grey-area specimen can be tracked and tested by NAT，and the grey-area setup problems of ELISA experiment should be further discussed after obtaining a certain research data.

［Key words］Blood donors without payment；ELISA；Grey-area；Tracing test

按照《獻血者健康檢查要求》［1］，血站應對無償獻血者，進行乙肝表面抗原 （HBsAg）、丙型肝炎抗體 （抗HCV）、艾滋病病毒抗體（抗HIV）和梅毒抗體（抗TP）初檢復檢二次檢測。為進一步提高臨床用血安全水平，保證用血者身體健康，很多血站檢驗科在使用酶聯免疫吸附試驗（ELISA），對上述4項傳染性指標進行結果判讀時，除了“反應性”和“非反應性”外，還會設置“灰區”［2-4］。為了對灰區的設置原則進行探討，該站對檢測結果為灰區的獻血者，進行了追蹤檢測，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

2015年1—12月，該市無償獻血者39 318名，年齡18～55歲。使用ELISA對所有無償獻血者血液標本進行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP四項傳染性指標檢測；對既往獻過血的175名灰區獻血者 （其獻血時間為2014 年1月—2015年6月），使用ELISA對HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP4項傳染性指標進行追蹤檢測。

表1　39 318名無償獻血者四項傳染性指標檢測結果［n（%）］

1.2試劑

HBsAg ELISA試劑盒，抗HCV ELISA試劑盒，抗HIV ELISA試劑盒，抗TP ELISA試劑盒HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP質控品。所有試劑均由合格供方提供，進貨檢驗合格，有效期內使用。

1.3主要儀器

STAR全自動樣本處理系統；FAME全自動酶免分析系統；UranusAE全自動酶免分析儀；SUNRISE掃描酶標儀；Columbus洗板機。

1.4方法

1.4.1ELISA檢測流程 每位無償獻血者均留取初檢、復檢2份標本，應用ELISA法，按照HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP試劑的說明書要求，進行初檢、復檢2次檢測。

1.4.2結果判讀規則反應性，S/C.O≥1；灰區，1＞S/C. O≥0.7；非反應性，S/C.O＜0.7。

1.4.3灰區標本追蹤檢測流程 檢測結果為灰區的獻血者，6個月后，只采集1份標本，對灰區項目追蹤檢測，使用原檢測廠家的試劑雙孔復試。2孔檢測結果均S/C. O值＜0.7為非反應性，解除該獻血者屏蔽狀態，可以繼續獻血；2孔檢測結果有1孔或2孔S/C.O值≥0.7，報告為“灰區”，該獻血者長期屏蔽，暫不能獻血；2孔檢測結果均S/C.O值≥1.0為反應性，該獻血者永久屏蔽，不宜繼續獻血。

1.5質量控制

檢驗科使用ELISA法檢測時，每板均按照試劑使用說明書要求，設置相應的空白、陰性對照、陽性對照及室內質控，做好室內質控工作；同時每年參加國家衛生計生委臨檢中心、河南省臨檢中心組織的室間質量評價活動。

2　結果

2.1無償獻血者4項傳染性指標檢測結果

使用ELISA法對39 318名無償獻血者進行4項傳染性指標檢測，HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP非反應性結果共38980名，占99.14%；反應性結果共105名，占0.27%；灰區結果共233名，占0.59%。39 318名無償獻血者4項傳染性指標檢測結果見表1。

灰區標本數是反應性標本數的2.22倍，表明灰區占總不合格的比例較高。

2.2灰區結果獻血者追蹤檢測結果

使用ELISA法對175名灰區結果獻血者進行追蹤檢測，HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP非反應性結果共107名，占61.1%；反應性結果共0名，占0%；灰區結果共68名，占38.9%。175名灰區結果獻血者追蹤檢測情況見表2。

表2　175名灰區結果獻血者追蹤檢測情況［n（%）］

追蹤檢測結果仍為灰區的標本數是非反應性標本數的0.64倍，未發現轉為反應性的標本。

2.3質控結果

室內質控使用Levey-Jennings質控圖，采用13 s、22 s和10x質控規則，對每板的質控值進行分析，符合選定的質控規則，則實驗結果在控，可以發布檢測結果；如果質控值違背質控規則，則應分析原因，必要時重新檢測［5-6］。參加國家衛生計生委臨檢中心和省衛生計生委臨檢中心室間質評結果均100%符合。

3　討論

ELISA實驗靈敏度高、特異性好、試劑穩定、操作簡便快速、無放射性污染，可利用全自動酶免分析儀進行自動化檢測，檢測通量大，特別適用于大批量無償獻血者血液標本的傳染性指標檢測，在采供血機構得到了廣泛應用［7-8］。但是，多種因素包括獻血者體內原因、標本質量、檢測試劑、儀器設備、實驗環境、人員因素等，可影響ELISA實驗結果［9］。在ELISA實驗的結果判讀過程中，除了反應性和非反應性兩種實驗結果外，還有部分標本OD值非常接近陽性判定值（cut-off），即“灰區”結果［10］。

使用ELISA對隨機選取的大批量已知某項目反應性和非反應性標本進行檢測，以OD值為橫坐標，以標本數量為縱坐標，可得到一個分布圖。其中，非反應性標本中OD值較高的部分，與反應性標本中OD值較低的部分，將會出現重疊現象，即是灰區結果產生的原因［11］。因此，合理科學地設置灰區，能使ELISA實驗最大限度地檢出陽性標本，防止弱陽性標本的漏檢，可有效地保證檢測結果的準確性，對ELISA實驗有重要的現實意義［12］。

該研究表1數據顯示，39 318名無償獻血者中，酶免4項合計反應性標本105例，占獻血者總數的0.27%；而灰區標本233例，占獻血者總數的0.59%；灰區標本數是反應性標本數的2.22倍，表明灰區占總不合格的比例較高。表2顯示，既往獻過血的175名灰區獻血者，追蹤檢測結果仍為灰區的68例，占38.9%；結果為非反應性的107例，占61.1%；未發現轉為反應性的標本，與謝云崢、張艷梅的報道基本一致［13-14］，與張秀慧等的報道有所不同［15］，這可能與所選取的研究對象不同、所使用的試劑不同等因素有關。

灰區結果具有不確定性，既可能是真陽性，也可能是真陰性。采供血機構為了保證臨床用血安全，任何一項傳染性指標檢測結果為灰區或反應性的血液，均不會發往臨床使用［16］。如果該灰區標本為真陽性，則把住了血液安全關，降低了輸血風險；如果該灰區標本為真陰性，其結果也就是假陽性，則浪費了血液資源，造成不必要的血液報廢。

4　結語

4項傳染性指標以初檢復檢兩次ELISA進行檢測的模式下，為了提高血液安全水平，應設置灰區，因其真陽性的概率較大；隨著檢測技術的快速發展，近年來核酸檢測技術（NAT）逐漸應用于獻血者傳染性指標的檢測［17-19］，可以對ELISA弱陽性及灰區標本進行NAT檢測，取得一定的研究數據后，再探討ELISA實驗的灰區設置問題，這有待于進一步深入研究。

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Analysis of Tracking Test Results of ELISA Grey-area Specimen in Blood Donors without Payment

ZHANG Guo-ping
The Blood Center of Jiaozuo City，Jiaozuo，Henan Province，454000 China

R446.6

A

1672-5654（2016）04（c）-0096-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.12.096

2016-01-22