ZD制劑對(duì)小鼠急性軟組織損傷的毛細(xì)血管通透性及血液流變影響的研究

柏　合，，王　未，李云章，林德貴

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157013；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193）

ZD制劑對(duì)小鼠急性軟組織損傷的毛細(xì)血管通透性及血液流變影響的研究

柏合1，2，王未1，李云章1，林德貴3

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157013；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193）

為了觀察自制外用ZD制劑對(duì)小鼠急性軟組織損傷的療效，初步探討其作用機(jī)理，分別對(duì)小鼠采用腹腔注射醋酸溶液，觀察自制外用ZD制劑對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響；對(duì)小鼠造急性軟組織損傷模型，測(cè)定應(yīng)用自制外用ZD制劑后小鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，確定其對(duì)血液流變學(xué)的影響。結(jié)果ZD制劑抑制毛細(xì)血管通透性增加（P<0.01）；降低血液流變學(xué)指標(biāo)（P<0.05或P<0.01）。表明ZD制劑通過(guò)抑制毛細(xì)血管通透性和降低血液流變學(xué)的指標(biāo)，對(duì)急性軟組織損傷修復(fù)具有良好的促進(jìn)作用。

ZD制劑；軟組織損傷；毛細(xì)血管通透性；血液流變學(xué)

軟組織損傷屬于中醫(yī)“筋傷”范疇，是指外力作用致皮膚、皮下組織、筋膜、肌肉、肌腱、韌帶、滑膜、關(guān)節(jié)囊等軟組織及一部分軟骨和周圍神經(jīng)、血管的損傷。賽馬的運(yùn)動(dòng)損傷是影響其經(jīng)濟(jì)價(jià)值的重要疾病，其肢蹄軟組織損傷疾病是較為常見(jiàn)的。據(jù)統(tǒng)計(jì)，馬屬動(dòng)物肢蹄病占外科病例總數(shù)的70%以上[1]。目前國(guó)內(nèi)外常采用非甾體抗炎藥來(lái)治療，但臨床研究表明，長(zhǎng)期服用這類藥物往往會(huì)產(chǎn)生多種不良反應(yīng)，如胃腸道損害、腎衰竭、心血管疾病等[2]。因此開(kāi)發(fā)一種藥效好、毒副作用小、攜帶方便的外用中藥制劑就顯得尤為必要。中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論，對(duì)急性軟組織損傷治療積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，在實(shí)際應(yīng)用中取得了良好的效果[1，3-4]。

ZD制劑是由臨床治療軟組織損傷有良好效果的外用驗(yàn)方研制而成的，由乳香、沒(méi)藥、當(dāng)歸、紅花等12味中藥組成，加入現(xiàn)代賦形劑和透皮劑制成的一種新型中藥軟膏劑型，具有活血祛瘀、

舒筋活絡(luò)、消腫止痛等功效。為探討其活血祛瘀的作用機(jī)理，我們從毛細(xì)血管通透性和血液流變學(xué)角度對(duì)其進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)進(jìn)一步精制及合理應(yīng)用ZD制劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明系小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（蒙）2002-0001號(hào)。

1.2藥物及試劑ZD制劑（由川椒、茵陳、乳香、沒(méi)藥、紅花、伸筋草、海桐皮、地骨皮、白芨、桂枝、當(dāng)歸、透骨草12味藥材組成，比例為：2∶3∶4∶4∶4∶4∶4∶4∶4∶7∶8∶8），由本院制備；陽(yáng)性組藥物為按摩乳（濟(jì)南全力制藥有限公司，批號(hào)：Z37020377）；二甲苯；硫化鈉；冰醋酸；伊文思藍(lán)。

1.3儀器電子分析天平；恒溫水浴鍋；分光光度計(jì)；血液流變檢測(cè)儀。

1.4ZD制劑的制備先對(duì)原料藥材經(jīng)粉碎、浸泡、煎煮、過(guò)濾、濃縮等處理，后分成油相和水相分別處理，再將水相處理液加入油相處理液中，混勻，加入冰片和氮酮，即形成均勻細(xì)膩的半固體的ZD制劑。

1.5藥物分組和給藥劑量ZD制劑分為高、中和低劑量組，各組劑量分別為每1克含有0.064 g、0.032 g、0.016 g生藥的ZD制劑，每組用量0.2 g/ cm2；陽(yáng)性組為按摩乳0.2 g/cm2；空白對(duì)照組給予相同量基質(zhì)0.2 g/cm2。

1.6對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[5]取昆明系小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，即外用中藥高、中和低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組（按摩乳）、空白對(duì)照組。所給藥物涂于腹部皮膚，給藥時(shí)間間隔為1 h，給藥3次。于末次給藥后15 min，經(jīng)尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水0.2 mL，并同時(shí)腹腔注射0.6%醋酸生理鹽水溶液0.2 mL。30 min后處死動(dòng)物。剪開(kāi)小鼠腹部皮膚，分離肌肉，暴露腹腔，用5 mL生理鹽水分?jǐn)?shù)次洗滌腹腔，收集沖洗液。經(jīng)3 000 r/min離心，取上清液用分光光度法在波長(zhǎng)590 nm處測(cè)定伊文思藍(lán)的吸光度值。

1.7對(duì)小鼠血液流變學(xué)的影響

1.7.1動(dòng)物造模參考文獻(xiàn)的造模方法[6]，制造急性軟組織損傷模型。試驗(yàn)前1 d用8%硫化鈉溶液脫去小鼠左側(cè)臂部及大腿部毛。選擇大腿中部外側(cè)軟組織做好標(biāo)記，將小鼠側(cè)臥式固定于自制軟組織打擊器上，用50 g砝碼從15 cm高度自由落下，連續(xù)擊打2下，打擊后肉眼即見(jiàn)打擊部位腫脹、瘀血、皮膚完整無(wú)破損且無(wú)骨折，說(shuō)明造模成功。

1.7.2分組及給藥動(dòng)物分為6組，即外用中藥高、中和低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組（按摩乳）、空白對(duì)照組及模型組，各組按劑量涂抹相應(yīng)藥物，模型組不給藥。

1.7.3對(duì)小鼠血液流變學(xué)的影響取昆明系種小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只。造模后，于小鼠損傷處涂抹相應(yīng)藥物，每天涂藥2次，連續(xù)治療4 d，第5天采用摘除眼球采血1 mL，迅速注入肝素抗凝管內(nèi)，測(cè)定血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SAS9.0軟件處理。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以X±SD表示，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，外用中藥各劑量組均可明顯抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性（P<0.01），其中，高劑量組的效果接近于按摩膏組。見(jiàn)表1。

表1　各處理組對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（X±SD，n=10）

2.2對(duì)小鼠血液流變學(xué)的影響結(jié)果表明，模型組小鼠各項(xiàng)指標(biāo)均明顯高于空白組（P<0.05或P< 0.01），說(shuō)明造模是成功的。與模型組比較，外用中藥膏劑各劑量組均可使全血黏度、血漿黏度等指標(biāo)明顯降低，有顯著差異（P<0.05或P<0.01），表明外用中藥膏劑可使血瘀模型之黏、濃、凝、聚狀態(tài)明顯恢復(fù)，有活血化瘀之功效。見(jiàn)表2。

3　討論

軟組織損傷屬于中醫(yī)“筋傷”范疇，中國(guó)傳統(tǒng)獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為，軟組織損傷的本質(zhì)是血瘀，損傷之后脈絡(luò)破損，血離經(jīng)而成瘀，瘀而化熱，瘀積不散，為腫為痛。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，血液流變性的改變是血液循環(huán)和微循環(huán)障礙發(fā)生的原因和基礎(chǔ)。軟組織損傷使局部毛細(xì)血管破裂，血液循環(huán)破壞，出血組織細(xì)胞壞死，血管通透性增加[5]，血管內(nèi)液滲到組織間隙，引起血液的高黏、高凝、高濃[7]等血液流變學(xué)改變。

表2　各處理組對(duì)小鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響　（X±SD，n=10）

中藥外用是藥物通過(guò)透皮吸收作用于創(chuàng)傷局部，從而維持局部相對(duì)穩(wěn)定的血藥濃度，起到散瘀、消腫和止痛的功效[8]。通過(guò)活血化瘀治療，可以改善局部及全身血液循環(huán)，以此達(dá)到活血化瘀的目的，其病因及療效可能與血液流變性相關(guān)[9]。

ZD制劑是在傳統(tǒng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上研制而成。外用中藥膏劑中的紅花能抑制血小板的聚集，從而起到抗凝作用防止血栓形成；當(dāng)歸具有增強(qiáng)特異性和非特異性免疫功能及鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎作用；乳香具有降低血小板粘附、鎮(zhèn)痛作用[10]。ZD制劑中各種成分都不同程度降低毛細(xì)血管的通透性，減少炎癥滲出及紅細(xì)胞外漏，降低全血和血漿黏度，減輕紅細(xì)胞的聚集，改善紅細(xì)胞變形能力，使局部血液循環(huán)恢復(fù)，改善血液的流變性，從而達(dá)到消腫止痛的作用。方劑中又加入了冰片和氮銅作為透皮劑，使藥物更好的滲透進(jìn)組織中，發(fā)揮藥效。ZD制劑能顯著降低毛細(xì)血管通透性和改善血液的流變性，對(duì)急性軟組織損傷的修復(fù)有良好的作用，從而為治療賽馬肢蹄軟組織損傷，提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值，提供了重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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A Research on Capillary permeability and Hemorrheology of ZD Preparation treating acutesoft tissueinjuries in mice

BAI He1，2，WANG Wei1，LI Yun-zhang1，LIN De-gui3
（1.College of Veterinary Medicine，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China；2.MuDanJiang Medical University，Mudanjiang 157013，China；3.College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

To observe the therapeutical effect of self-made topical ZD Preparation on mice with acute soft tissue injury and preliminary study its mechanism of action.Observation of the effect of self-made topical ZD Preparation on the capillary permeabili?ty of mice which were given acetic acid solution by intraperitoneal injection respectively.And acute soft tissue injury model mice were measured the effect of self-made topical ZD Preparation on hemorheology.The results showed that ZD preparations inhibited the increased capillary permeability（P<0.01）and reduced Hemorheology（P<0.05 or P<0.01）.ZD preparations promote the repair of acute soft tissue injury by inhibiting capillary permeability and lower indicators hemorheology.

ZD Preparation；soft tissue injury；Capillary permeability；Haemorheology

LI Yun-zhang

S853.7

A

0529-6005（2016）07-0025-03

2015-01-29

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31360629）；中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)校際合作項(xiàng)目（ZN201004）

柏合（1987-），女，碩士，研究方向?yàn)楂F醫(yī)外產(chǎn)科學(xué)，E-mail：568789575@qq.com

李云章，E-mail：liyunzhang1956@163.com