蒙古族生物樣本庫的標準化建立及質量鑒定

房 君，斯琴，沙日耐，白薩日娜，納貢畢力格

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·轉化醫學·

蒙古族生物樣本庫的標準化建立及質量鑒定

房 君，斯琴，沙日耐，白薩日娜，納貢畢力格

目的 建立規范的蒙古族生物樣本庫，收集高質量的樣本用于牛皮癬、高血壓、失眠、抑郁及腫瘤心身疾病的機制研究。方法 籌備建立樣本庫所需資金并通過倫理委員會審查，建立樣本收集、儲存的標準操作流程；收集相應臨床患者信息及符合實驗要求的血液樣本并進行低溫儲存；對生物樣本進行嚴格的質量控制。結果 建立了標準的血液庫操作流程，2015年1月開始建庫。建庫6個月共收集患者血液樣本562例。隨機抽取樣本質量控制良好。結論 血液樣本質量可靠并附有完整的臨床資料，可以充分滿足科學研究的需要。

心身疾病；生物樣本庫；標準化；質量鑒定

［Abstract］Objective The estab1ishment of standardized Mongo1ia peop1e's biobank，the co11ection of high qua1ity specimens used in psoriasis，hypertension，insomnia，depression and cancer，and other psychosomatic diseases.Methods Biobank funds needed for the estab1ishment of the preparatory and got the ethics committee a11owed.To estab1ish the standard operation procedure of samp1e co11ection and so on and to co11ect the information of the corresponding c1inica1 patients and the b1ood samp1es for fina11y frozen storage are needed strict1y qua1ity contro1 on bio1ogica1 samp1es. Results This study estab1ished a standard b1ood biobank operation process，construction began in January 2015.We have co11ected the b1ood samp1es of a tota1 of 562 patients for more than 6 months. Conclusion Random1y se1ected samp1e to undergo a qua1ity contro1 test.The resu1t showed that the co11ected b1ood samp1es with re1iab1e qua1ity and comp1ete c1inica1 data.It can fu11y meet the needs of scientific research.

［Key words］Psychosomatic diseases；Biobank；Standardization；Qua1ity identification

生物樣本庫又稱生物銀行，主要是指收集和保存用于各種研究而非用于器官移植的人類各種生物樣本，包括組織、全血、血漿、血清、DNA、RNA、生物體液，或經初步處理過的生物樣本，以及與這些生物樣本相關的各種臨床資料、病理、治療與隨訪等信息數據，是按嚴格的技術標準專業化收集、運輸、存儲、管理和使用的資源庫［1-2］。自20世紀80年代以來，生物樣本庫在全球范圍內得到了空前發展，廣泛用于臨床與基礎研究、相關藥物靶點與個體化治療方面［3-4］。目前，許多研究是以規范化診治的多中心臨床隊列建立為基礎，以獲得高質量樣本和系統臨床隨訪資料為核心。而轉化醫學已成為基礎研究與臨床實踐兩者之間的紐帶，以臨床需求為指引，通過研究探討發病機制和疾病相關基因，進一步篩選診斷和治療靶點從而應用于臨床［5］。內蒙古國際蒙醫醫院的蒙古族生物樣本庫的建立，更是為發展具有我國自主知識產權的綜合性轉化醫學研究提供資源。作者介紹該生物樣本庫在建立過程中所積累的經驗與不足。

1　資料與方法

1.1資金、設備與人員培訓 通過文獻查閱以及赴上海市參加生物樣本庫研討會議后，建立生物樣本庫流程，購買樣本處理設備及液氮罐和-80℃冰箱；聘用生物學專業人員，經技術培訓，專職負責樣本庫的運轉和維護。生物樣本庫初步建立后，由內蒙古國際蒙醫醫院心身醫學科提供日常運行資金和管理負責日常工作。

1.2政策與患者知情同意 建立生物樣本庫及知情同意書需通過內蒙古國際蒙醫醫院臨床機構倫理委員會審查，嚴格按照赫爾辛基宣言保護患者利益及隱私。本生物樣本庫建立的原則是非盈利性的，樣本及臨床資料信息以醫學研究為目的，使用樣本過程中要求研究者保證合法和合理。患者知情同意書主要是征求患者同意采取血液樣本及相關臨床信息。

1.3臨床信息收集 收集對象為內蒙古國際蒙醫醫院心身醫學科就診的心身疾病患者，收集患者臨床信息包括年齡、性別、民族、住址、聯系方式、家族史、心身互動治療前的治療情況、心身互動治療開始及截止日期、治療反應、轉歸及近期檢查結果和后期的隨訪報告。

1.4血液樣本標準化操作流程 在接受蒙醫心身互動治療前、后分別收集患者血液。采集患者早晨空腹血液，每個患者根據病種采集含抗凝劑1～2管和不含抗凝劑1～2管，每管3～4 mL經2 100 r/min離心15 min后分裝血漿和血清，并通過細胞裂解液提取白細胞后分別裝入凍存管并保存在-80℃冰箱，整個過程要求在2 h內完成。

1.5質量控制 生物樣本庫的質量保證體現在樣本采集、處理的每一步驟中，如果能夠嚴格按照標準操作流程操作，則能夠保證樣本質量。生物樣本質量控制主要包括：①取樣—分裝—存儲標準化流程的控制；②存儲溫度24 h動態監測及記錄；③存儲樣本定期抽檢。對在庫的樣本質量控制鑒定采用隨機抽樣方式，并分別進行臨床資料復查和樣本的DNA、RNA質量檢測。使用血液DNA提取試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］按照說明書提取DNA，在1%瓊脂凝膠上進行電泳檢測其完整性；使用生物基因通用RNA提取分離試劑盒提取RNA并檢測完整性。

1.6樣本資源的使用 申請使用者在申請時需填寫申請書，要求申請樣本的研究者必須有一定的資質，有能力妥善使用樣本，減少不必要的浪費。樣本庫的資源屬于重要的臨床和基礎研究資源，主要提供給內蒙古國際蒙醫醫院心身醫學科科研組及其他一些研究機構。

2　結果

2.1通過知情同意書并建立標準操作流程 本研究的建庫申請及知情同意書通過了內蒙古國際蒙醫醫院臨床機構倫理委員會審查；根據國內外血液庫經驗，并結合本院實際情況，建立了標準的收集工作流程（圖1），2015年1月開始建庫。

圖1　生物樣本庫工作流程

2.2收集心身疾病血液樣本 生物樣本庫建庫6個月共收集562例的血液樣本，其中牛皮癬295例（52.5%）、高血壓35例（6.2%）、食管癌82例（14.6%）、胃癌52例（9.3%）、失眠32例（5.7%）和抑郁66例（11.7%）。根據各個病種科研目的不同，又將血液樣本分類收集，其中全血562份、血清428份、血漿295份、白細胞562份，血漿倒去后剩余血細胞159份。所有樣本收集前患者均簽署了知情同意書。

2.3樣本質量檢測 收集6個月后對樣本進行質量檢測，隨機選取20例入庫樣本病例，對病例中的臨床資料進行復查（表1），病例資料中均含有所查的重要臨床資料。生物質量檢測中隨機選取6例全血及白細胞樣本，選擇入庫儲存6個月、5個月、4個月、3個月、2個月和1個月的全血和白細胞分別提取DNA 和RNA。DNA電泳圖顯示無明顯拖尾現象（圖2），RNA電泳圖顯示28 s、18 s條帶清晰可見（圖3）。

表1　20例生物樣本庫臨床信息復查

圖2　DNA電泳圖

圖3　RNA電泳圖

3　討論

冰島健康數據庫是全球建設最早的生物樣本庫，始于1996年，擁有一半以上成年人口的基因型和醫療數據，目的在于鑒別常見病的遺傳成分；英國生物樣本庫則正式啟動于2005年，主要收集普通人群樣本用于研究“遺傳和復雜環境下的患病危險”［6］；人類癌癥生物樣本庫由美國國立癌癥研究所資助，專供研究使用的高質量生物樣本［7］。目前我國的生物樣本庫建設工作也開展得如火如荼：由深圳華大基因研究院運營的國家基因庫，從事收集和保存高質量、可溯源的生物資源樣本［8］；泰州人群隊列樣本庫已經搜集15萬人的健康數據庫，并開展了相關分子流行病學調查，特別關注中國人群易患的重大慢性疾病［9］。隨著社會發展，生物樣本庫在現代生物科技領域中已經占據了非常重要的地位。

近年來，蒙醫心身互動療法在治療各種疑難雜癥方面有非常好的療效，它以蒙醫理論為指導，以國學傳統文化為背景，按照東方人的文化特點和思維模式制訂本土化心理治療技術，結合現代醫學、心理學知識的同時運用現代光電聲像技術手段，在潛移默化中對患者群體進行催眠、暗示、分析、認知、行為、音樂、疏導的“多維立體”“綜合調理”。治療方法獨特，作為廉價而本土化綠色治療方法，深受患者的認可［10］，但其作用的科學機制仍不清楚。因此，建立以心身疾病為主的樣本庫可最大限度地保護利用接受該療法的心身疾病患者的血液樣本，從而對促進蒙醫心身互動療法的研究具有重要意義。高質量、標準化收集樣本是生物樣本庫的核心［11-12］。要保證高質量就要建立嚴格標準的收集過程和標準化的質量檢測。樣本庫自建庫以來一直秉承這一原則，并于建庫6個月后隨機選取了6例全血及白細胞進行檢測，提取的DNA電泳圖完整清晰無明顯拖尾現象，說明保存完好，無降解；RNA條帶清晰可見，說明完整性好，無明顯降解，可滿足大部分實驗要求。對20例入庫病例資料復查結果顯示，一些重要的臨床信息記錄完整。樣本庫質量檢測結果顯示，蒙古族生物樣本庫儲存的血液樣本是高質量的，而且附有完整的臨床資料可充分滿足科研需求，具有豐富臨床信息的樣本有利于分子信息與臨床意義之間的研究。但是，根據腫瘤生物樣本收集的標準和要求［13-14］，結合現在科室建設的特殊性和局限性導致組織樣本很難收集；而且樣本庫軟件系統沒有和醫院信息系統對接，因此資料查詢比較困難。作為一個以少數民族為特色的生物樣本庫，也采取一些特殊措施，將臨床信息采集表以及相關的心理專業測試題目翻譯為蒙古文以便患者閱讀和配合。心身疾病的患者容易激動或者產生抵觸心理，所以要求接診的醫生應具備一定的心理咨詢能力。為了防止患者治療后的脫落情況，科室推行一系列方便患者就診的策略。目前，蒙古族生物樣本庫的建設處于起步階段，還有許多需要完善和改進的地方，繼續努力使之成為全國乃至全球認可的高質量和標準化的生物樣本庫。

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Standardization establishment and quality identification of the biobank of Mongolia PeoPle

FANG Jun1，Siqin2，Sharinai1，BAI Sarina1，Nagongbilige1
（1.Department of Psychosomatic Medicine，Inner Mongo1ia Internationa1 Mongo1ian Hospita1，Huhot Inner Mongo1ia 010065，China；2.Department of Research，Inner Mongo1ia Internationa1 Mongo1ian Hospita1，Huhot Inner Mongo1ia 010065，China）

R-05

B

2095-3097（2016）03-0134-04

10.3969/j.issn.2095-3097.2016.03.002

國家民族醫藥重點專科建設項目（ZP0503MZ022）；內蒙古國際蒙醫醫院院內項目（GJMY-201512）

010065內蒙古呼和浩特，內蒙古國際蒙醫醫院心身醫學科（房 君，沙日耐，白薩日娜，納貢畢力格），科研部（斯琴）

納貢畢力格，E-mai1：781871909@qq.com

（2016-03-19 本文編輯：張在文）