梅州地區3309例女性人乳頭瘤病毒檢測結果及其基因類型分析

羅曉東，徐美蘭，邱玉林

(1.嘉應學院醫學院，2.嘉應學院附屬醫院檢驗科，梅州514031)

梅州地區3309例女性人乳頭瘤病毒檢測結果及其基因類型分析

羅曉東1，徐美蘭2，邱玉林1

(1.嘉應學院醫學院，2.嘉應學院附屬醫院檢驗科，梅州514031)

目的了解24種人乳頭瘤病毒(Human papillomaviruses，HPV)型別在梅州地區女性人群中的最新感染情況及分布特點。方法采用賽樂其基因芯片檢測方法對2011年12月到2014年12月在婦科體檢和就診的3309例不同年齡的女性患者進行了HPV基因檢測，分析最新HPV亞型感染情況。結果3309例受檢者HPV總感染率為17.47%，其中單一基因型別感染率14.17%，雙重感染率2.60%，三重及以上感染率0.7%。HPV基因型分布陽性率居前5位的是HPV52(2.87%)、HPV43(2.51%)、HPV58(2.45%)、HPV16(2.39%)和HPV11(1.45%)。感染率居前3位的年齡段是≥60歲(33.33%)，20～29歲(19.14%)，30～39歲(17.32%);20～24歲及≥60歲年齡段與各組間(除55～59歲)總感染率比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)。結論梅州地區女性HPV感染率接近于國內平均感染率，感染率年齡分布呈U型分布，HPV52、58、16為地區主要的感染亞型，需要針對不同年齡段、易感人群定期進行HPV核酸檢測及基因分型篩查。

人乳頭瘤病毒;基因型別;宮頸癌

人乳頭瘤病毒(HPV)是一類具有高度種屬及組織特異性感染人類皮膚及黏膜鱗狀上皮，引起良性病變或惡性腫瘤的小雙股環狀DNA病毒，目前通過DNA測序識別的HPV基因型別已有130余種［1］。大量流行病學研究證實，高危型人乳頭狀瘤病毒持續感染是宮頸癌發生發展的主要因素之一［2～4］。近幾年來，在一些國家和地區發現宮頸癌的發病和死亡均有增長的趨勢，尤其是宮頸癌的年輕患者開始增加［5］。為掌握2011～2014年來梅州地區女性最新HPV感染率及其型別的分布情況，以及HPV感染與年齡的關系，采用賽樂其基因芯片檢測方法對3309名女性宮頸分泌物等進行了HPV型別檢測，現將結果報告如下。

1　對象與方法

1.1研究對象收集2011年12月～2014年12月來我院婦科或體檢行HPV DNA檢查的3309例女性，年齡20～85歲，中位年齡38歲。將研究對象分為20～29歲、30～39歲、40～49歲，50～59歲，≥60歲，共5個不同年齡段。

1.2樣本采集所有待測標本均由臨床醫生采集，在無菌條件下，用宮頸刷伸入宮頸管內2 cm，旋轉數周并停留片刻后取出，將其放入生理鹽水保存管中。通過抽提DNA，經PCR擴增后，采用賽樂其基因芯片方法進行HPV DNA 24種分型的檢測。24種HPV型別包括高危型16、18、26、31、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、MM4，以及低危型6、11、42、43、44、83、84。

1.3檢測方法DNA提取:震蕩混勻臨床標本，取1 ml轉移至1.5 ml離心管中，12 000 rpm，離心10 min，棄上清后，采用賽樂其基因組抽提試劑盒提取DNA，具體操作步驟見試劑盒說明書，冷凍保存。將PCR反應液及DNA模板依次添加混勻成25 μL/反應的擴增反應體系，其中DNA模板5 μL;另外，陰陽性對照各一管。擴增程序:50℃，2 min，94℃15 min，94℃30 s，45℃1 min，72℃ 30 s，進行40個循環; 72℃延伸10 min后，4℃密封保存備用;基因芯片檢測:將10 μL上述PCR產物加入直用型雜交液中，混勻后加入基因芯片孔中，經45℃水浴35 min后，讓其冷卻至室溫。經洗滌液洗滌后，加入直用型BW反應液(100 μL)室溫下反應15 min，洗滌后加入顯色液100 μL避光常溫下反應5 min，充分洗滌后，應用芯片自動分析系統進行判斷。結果判斷:使用自動分析報告系統檢測，信號位置灰度值與背景灰度值大于4為陽性，或肉眼觀察檢測結果，出現藍色信號，信號斑點顏色有深淺，均代表陽性;多個圓點陽性即為多重感染。每張芯片上有PCR反應質控點和雜交顯色質控點各一個。

1.4統計學方法所有數據均采用Excel軟件進行整理，應用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計數資料的組間比較采用χ2檢驗，檢驗水準:α=0.05。

2　結　果

2.1HPV檢測結果3309例檢測標本中，共檢出23種 HPV亞型，HPV感染578例，總感染率為17.47%。其中，高危型總感染率為13.72%(454/ 3309)，以HPV52為主，檢出率2.87%;低危型總感染率為3.75%(124/3309)，以HPV43為主，檢出率2.51%。HPV型別檢測結果見表1、表2。

2.2HPV感染基因型分布及多重感染情況分布

單一基因型別者469例，檢出率14.17%;雙重感染者86例，檢出率2.60%;三重及以上感染者23例，檢出率0.7%。HPV基因型分布陽性率居前5位的是 HPV52(2.87%)、HPV43(2.51%)、HPV58 (2.45%)、HPV16(2.39%)和HPV11(1.45%)。

2.3HPV感染各年齡段分布如圖1所示，總HPV陽性率居前3位的是≥60歲(33.33%)，20～29歲(19.14%)，30～39歲(17.32%)，各年齡段總HPV感染率比較(P=0.007＜0.01)有統計學意義。如表3所見，20～24歲及≥60歲年齡段與各組間(除55～59歲)總感染率比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)。

表1　高危型感染率前6名

表2　低危型感染率前6名

圖1　不同年齡段HPV感染率比較

表3　不同年齡段HPV感染率

3　討　論

宮頸癌是發病率僅次于乳腺癌之后的女性惡性腫瘤，據世界范圍內統計，每年約有50萬的新發病例，占所有癌癥新發病例的5%，其中80%的病例發生在發展中國家［7］。我國每年約有13.15萬的新發病例，占世界宮頸癌新發病例總數的28.8%［7］。有研究證明持續性高危型HPV感染和多重感染是宮頸癌發生的必要條件［2～4］，因此通過對HPV感染的篩查，對于宮頸癌前病變的提前發現，以及減少宮頸癌的發病率和病死率有其重要的意義。

HPV感染是常見的性傳播疾病，在女性的一生中，感染HPV的概率大于75%，但大多可自然消除［8］。在國內，廣州地區HPV感染率為35.33%，山東地區為29.38%［9，10］，本研究對3309名本地區女性進行 HPV型別檢測，發現人群總感染率為17.47%，與深圳地區女性17.6%HPV感染率接近［11］，高于李霓等人［12］報道16.1%的中國婦女人乳頭瘤病毒感染率。結果顯示與國內其他地區有一定差異，可能與研究的目標人群或采用的檢測方法不同造成;另外，檢測結果低于楊海坤等［13］報道的客家女性20.67%HPV總感染率，分析可能與梅州近年大力宣傳健康醫療，以及開放旅游、外來人口數增加有關。

目前在世界范圍內流行最為廣泛的為高危型HPV16和HPV18，在世界各地區間沒有明顯差異，而其他高危型別的分布則有著明顯的差異［14］。Clifford GM等［15］對11個國家15 613名無宮頸病變婦女的HPV型別研究中發現，人群中主要的感染型別為HPV16、HPV42、HPV58、HPV31、HPV18、HPV56、HPV81、HPV35、HPV33和HPV 45。而在國內對山西陽城縣、深圳市和沈陽市三個地區的感染調查中，則發現HPV16、HPV52、HPV58是婦女感染的主要高危型別［12］。通過研究發現，梅州地區HPV高危型感染前5名分別為HPV52、HPV58、HPV16、HPV33、HPV31，這與Lin等［17］的研究結果相似，與李利平等［18］報道的客家地區主要感染型別 HPV16、HPV58、HPV52、HPV31、HPV33略有差異，本研究對象為婦科就診患者及體檢者，不能完全代表各型別在自然人群中的感染率，但檢測結果可以分析各型別的大致分布情況。結果分析表明梅州地區女性HPV感染的優勢型別主要為HPV52、HPV58、HPV16型，其中HPV52檢出率高于HPV16，可能是HPV變異體與宿主免疫系統間的相互作用有關［18］;另外，在感染HPV的過程中，70%～90%的HPV感染可被免疫系統自然清除［8］，可能導致同一地區不同時間段HPV感染率及感染型別發生變化。因此，在開展地區性的HPV疫苗接種前有必要研究該地區最新型別分布及主要感染型別。

HPV感染的影響因素中，包括地區、年齡、性生活開始時間、生活習慣等相關因素，其中年齡是其重要的一項因素。de Sanjos é S等［19］對相關報道的統計分析發現，HPV感染高峰主要在34歲之前，在35 ～44歲年齡段HPV感染率逐漸降低，在45～54歲除亞洲地區外其他地區的HPV感染率又有所升高。張勁松等［20］的研究結果則顯示，女性HPV感染高峰在29歲以下和50歲左右，感染率年齡分布呈“S”形分布。本研究結果發現20～29歲和≥60歲年齡段感染率較高，其中又以20～24歲及≥60歲年齡段感染更嚴重，與各組間(除55～59歲)總感染率比較均有顯著性差異，隨著年齡的增加HPV的感染率開始逐漸下降，在55～59歲年齡段又開始升高，并在≥60年齡段中達到一較高的感染率。感染率年齡分布與Franceschi S等［21］的研究結果基本一致，感染高峰呈明顯的U型分布，說明女性越年輕，開始性生活時間越早越活躍，感染HPV的概率越高，而中老年女性由于正處于圍絕經期，激素的波動可能導致機體生理及免疫力開始下降，使得對病毒的抑制及清除能力明顯減弱。所以有必要針對本地區20 ～24歲及≥55歲年齡段女性人群開展HPV宣傳教育，并建議其每年體檢，從而降低HPV的感染率。

綜上所述，通過分析2011～2014年3309例的HPV檢測結果，發現梅州地區女性最新HPV感染率接近國內平均感染率，感染率年齡分布呈U型分布，HPV52、HPV58、HPV16為地區主要的感染亞型，需要針對不同年齡段、易感人群加大衛生健康宣傳教育，定期進行HPV核酸檢測及基因分型篩查。

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(編輯:梁明佩)

An analysis of human papillomaviruses detection result and genotype of 3309 female in Meizhou

LUO Xiaodong1，XUE Meilang2，QIU Yulin1
(1.Medical College of Jiaying University，2.Clinical Laboratory Department，Hospital Affiliated to Jiaying University，Meizhou 514031，China)

ObjectiveTo understand the latest infection status and distribution features of 24 kinds of Human papillomaviruses(HPV)among women in Meizhou area.MethodsSeiler vakuumtechnik gene chip detection method was adopted to perform HPV genetic tests of 3309 female of varoius ages，who came to gynaecology to examin and receive treatment from December，2011 to December，2014.And the newest infection status of subtype HPV was analyzed.ResultsThe total infection rate of the 3309 patients was 17.47%，among which 14.17%were infected by single HPV genotype，2.60%by two genotypes and 0.7%by three or more genotypes.The top five HPV genotype distribution positive rate were HPV52(2.87%)，HPV43(2.51%)，HPV58(2.45%)，HPV16(2.39%)and HPV11(1.45%).The highest infection rate ages were≥60 (33.33%)，20～29(19.14%)，30～39(17.32%)，differences of total infection rate of patients aged 20～24，≥60 and other age groups(except for 55～59)were all statistically significant(P＜0.05).ConclusionThe HPV infection rate of female in Meizhou area is close to the domestic average infection rate，and the age distribution of the infection rate is U type.The dominant genotypes of this area are HPV52，58 and 16.It is necessary to regularly carry out HPV nucleic acid detection and genotyping detection for women in different age groups and for the susceptible population.

HPV;genotype;cervical cancer

R737.33

ADOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2016.03.015

羅曉東，男，助教，醫學碩士，研究方向:免疫學。E-mail:lqjatai@163.com

2016－03－16

2016－06－20)