Cripto—1介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在卵巢漿液性腺癌形成中的作用

步曉琳

【摘要】 目的 檢測(cè)Cripto-1、E-鈣粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）在卵巢腫瘤中的表達(dá)， 探討卵巢漿液性腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制， 以及Cripto-1介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）在其中的作用。方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)Cripto-1、E-cadherin、Vimentin在60例卵巢漿液性腺癌、30例卵巢交界性漿液性腫瘤、20例卵巢漿液性腺瘤中的表達(dá)， 并探討其表達(dá)程度的相關(guān)性及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果 Cripto-1在卵巢漿液性腺瘤中的表達(dá)20.0%低于漿液性腺癌76.7%和交界性漿液性腫瘤56.7%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， E-cadherin在卵巢漿液性腺瘤中的表達(dá)90.0%高于漿液性腺癌35.0%和交界性漿液性腫瘤53.3%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Cripto-1、Vimentin在卵巢漿液性腺癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；E-cadherin的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P<0.05）， 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）。在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1與E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.81， P<0.05）， Cripto-1與Vimentin的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.42， P<0.05）。結(jié)論 在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1、Vimentin表達(dá)上調(diào)， E-cadherin表達(dá)下調(diào)， 提示Cripto-1介導(dǎo)的EMT可能在卵巢漿液性腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起作用。

【關(guān)鍵詞】 Cripto-1；E-鈣粘蛋白；波形蛋白；卵巢漿液性腺癌；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.22.001

Effect by Cripto-1 mediated epithelial-mesenchymal transition in formation of ovarian serous adenocarcinoma BU Xiao-lin. Department of Pathology， Xinglin Branch of First Affiliated Hospital of Xiamen University， Xiamen 361000， China

【Abstract】 Objective To detect expression of Cripto-1， E-cadherin and Vimentin in ovarian tumor， and to investigate development mechanism of ovarian serous adenocarcinoma and effect by Cripto-1 mediated epithelial-mesenchymal transition （EMT）. Methods Immunohistochemical SP test was applied to detect expression of Cripto-1， E-cadherin and Vimentin in 60 cases with ovarian serous adenocarcinoma， 30 cases with ovarian borderline serous tumor and 20 cases with ovarian serous adenoma. Investigation was made on relationship between expression degree and clinical pathological parameters. Results Expression of Cripto-1 was lower in ovarian serous adenoma as 20.0% than 76.7% in ovarian serous adenocarcinoma and 56.7% in ovarian borderline serous tumor， their difference had statistical significance （P<0.05）. Expression of E-cadherin was higher in ovarian serous adenoma as 90.0% than 35.0% in ovarian serous adenocarcinoma and 53.3% in ovarian borderline serous tumor， their difference had statistical significance （P<0.05）. Expression of Cripto-1 and Vimentin showed their relationship with histological grade and lymphatic metastasis in ovarian serous adenocarcinoma （P<0.05）； while expression of E-cadherin was related with histological grade （P<0.05） and not related with lymphatic metastasis （P>0.05）. Cripto-1 and E-cadherin showed negatively correlated expression in ovarian serous adenocarcinoma （r=-0.81， P<0.05）， and expression of Cripto-1 and Vimentin showed their positive correlation （r=0.42， P<0.05）. Conclusion Up-regulated expression of Cripto-1 and Vimentin and down-regulated expression of E-cadherin in ovarian serous adenocarcinoma suggest the effect by Cripto-1 mediated EMT in invasion and metastasis of ovarian serous adenocarcinoma.

【Key words】 Cripto-1； E-cadherin； Vimentin； Ovarian serous adenocarcinoma； Epithelial-mesenchymal transition

卵巢癌是女性生殖器官常見(jiàn)的惡性腫瘤之一， 是卵巢惡性腫瘤最常見(jiàn)的組織類型， 因?yàn)槠浣M織學(xué)類型復(fù)雜， 早期病情隱匿， 大部分患者發(fā)現(xiàn)到確診時(shí)腫瘤細(xì)胞已經(jīng)播散和轉(zhuǎn)移， 錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)間， 治療效果不佳， 生存期短， 是女性生殖系統(tǒng)中病死率最高的腫瘤。卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移方式主要有兩種：①直接在腹腔內(nèi)播散和血管淋巴管轉(zhuǎn)移；②研究發(fā)現(xiàn)， EMT是癌細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一[1]。在EMT的發(fā)生過(guò)程中， 腫瘤細(xì)胞不僅形態(tài)學(xué)上發(fā)生改變， 其表達(dá)的標(biāo)志物也會(huì)隨之發(fā)生變化。最近一項(xiàng)研究表明， Cripto-1可以促進(jìn)EGFR基因突變的非小細(xì)胞肺癌患者的EMT[2]。本研究旨在探討Cripto-1介導(dǎo)的EMT在卵巢漿液性腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來(lái)源 選取2010～2015年廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理確診卵巢漿液性腺癌患者60例。年齡24～73歲， 中位年齡58歲， 平均年齡56.3歲。術(shù)前未經(jīng)輔助治療。選取同期病理確診的卵巢漿液性腺瘤患者20例及交界性漿液性腫瘤患者30例作為對(duì)照。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定， 常規(guī)脫水、石蠟包埋， 將蠟塊制備3 μm厚度連續(xù)切片。

1. 2 結(jié)果判定 采用免疫組化SP法， 按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作， Cripto-1主要定位于細(xì)胞質(zhì)， 出現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色為陽(yáng)性；E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞膜， 細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性；Vimentin蛋白定位于胞漿， 胞質(zhì)中呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Cripto-1在卵巢漿液性腺瘤中的表達(dá)低于漿液性腺癌和交界性漿液性腫瘤， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， E-cadherin在卵巢漿液性腺瘤中的表達(dá)高于漿液性腺癌和交界性漿液性腫瘤， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。Cripto-1、Vimentin在卵巢漿液性腺癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；E-cadherin的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P<0.05）， 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）。見(jiàn)表2。在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1與E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.81， P<0.05）， Cripto-1與Vimentin的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.42， P<0.05）。見(jiàn)表3。Cripto-1分別在卵巢漿液性腺瘤、漿液性交界性腫瘤、漿液性腺癌中的免疫組化染色見(jiàn)圖1， 圖2， 圖3。

3 討論

腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移是卵巢癌死亡的主要原因， 其機(jī)制尚未十分明確， 一直以來(lái)是研究者關(guān)注的熱點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞由良性向惡性轉(zhuǎn)變時(shí)， 為適應(yīng)與周圍基質(zhì)的接觸， 其形態(tài)學(xué)和分子機(jī)制也隨之發(fā)生了變化， 上皮細(xì)胞經(jīng)去分化轉(zhuǎn)變?yōu)殚g葉細(xì)胞， 同時(shí)細(xì)胞的粘附力降低， 運(yùn)動(dòng)遷移能力增強(qiáng)， 即EMT， 既往有研究報(bào)道， EMT與獲得干細(xì)胞樣特性有關(guān)[3]。Luo等[4]發(fā)現(xiàn)， 卵巢癌EMT的發(fā)生與干細(xì)胞的形成密切相關(guān)， 而干細(xì)胞對(duì)傳統(tǒng)治療手段不敏感[5， 6]。積極的探索卵巢漿液性腺癌的發(fā)病機(jī)制， 從初始階段抑制腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展， 對(duì)卵巢癌患者的防治尤為重要。

E-cadherin是跨膜糖蛋白， 主要位于上皮細(xì)胞， 能抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生， 通過(guò)介導(dǎo)上皮細(xì)胞間的粘附， 促進(jìn)同型細(xì)胞間連接的緊密性， 維持細(xì)胞形態(tài)、運(yùn)動(dòng)及粘附能力。發(fā)生EMT時(shí)， 正常上皮細(xì)胞表面的E-cadherin表達(dá)下調(diào)， 而代表間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的標(biāo)記蛋白表達(dá)升高， 導(dǎo)致癌細(xì)胞之間粘附能力下降， 加快細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[7， 8]。本研究中， 在漿液性腺瘤中E-cadherin的表達(dá)程度較高， 其表達(dá)程度與漿液性腺癌患者的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P<0.05）， 腫瘤從良性向交界性再向惡性轉(zhuǎn)變過(guò)程中， 其表達(dá)程度越來(lái)越低， 并且表達(dá)程度與漿液性腺癌患者的分化有關(guān)， 在高-中分化組織中的表達(dá)高于低分化， 說(shuō)明從良性到癌這個(gè)轉(zhuǎn)變過(guò)程中其細(xì)胞間的粘附能力越來(lái)越差。Vimentin是間質(zhì)表達(dá)的標(biāo)記物， 但在一些低分化惡性腫瘤的上皮組織中也有表達(dá)。本研究中Vimentin的表達(dá)水平與卵巢漿液性腺癌患者的組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）， 分化越差的組織中其表達(dá)程度越高， 說(shuō)明在一些腫瘤發(fā)生過(guò)程中， 其細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)方式也發(fā)生變化， 上皮細(xì)胞向纖維細(xì)胞樣形態(tài)轉(zhuǎn)變， 更易移動(dòng)， 進(jìn)而引起EMT的發(fā)生。

Cripto-1基因?yàn)楸砥どL(zhǎng)因子家族的成員。在人幾種不同類型的腫瘤中過(guò)表達(dá)， 但其生物學(xué)行為在惡性腫瘤中的機(jī)制不明。本研究發(fā)現(xiàn)， 漿液性腺瘤患者Cripto-1的表達(dá)水平較低， 其表達(dá)程度與漿液性腺癌患者的組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。提示其陽(yáng)性的正常組織細(xì)胞存在有惡變的潛在風(fēng)險(xiǎn)， 高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。進(jìn)一步行Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示， 在癌組織中Cripto-1的表達(dá)程度較高， 而E-cadherin的表達(dá)程度較低， 二者之間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.81， P<0.05）， 而與Vimentin的表達(dá)程度呈正相關(guān)（r=0.42， P<0.05）， 由此可見(jiàn)， 隨著病變惡性程度的增高， Cripto-1的陽(yáng)性表達(dá)增高， E-cadherin表達(dá)下調(diào)， Vimentin表達(dá)于上皮中。本次研究發(fā)現(xiàn)， 當(dāng)Cripto-1表達(dá)較高時(shí)， E-cadherin的表達(dá)受到抑制， 而其表達(dá)程度降低說(shuō)明細(xì)胞間粘附能力下調(diào)， 進(jìn)而促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生， 腫瘤細(xì)胞即播散種植于腹盆腔， 發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。其機(jī)制可能是， Cripto-1 通過(guò)激活Ras-Raf-MEK- ERK和PI3K-Akt信號(hào)通路刺激腫瘤細(xì)胞的增殖與存活。但EMT的發(fā)生是多因子共同作用的結(jié)果， 是腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要樞紐， 對(duì)其發(fā)生的分子機(jī)制還有待進(jìn)一步研究， 早期阻斷EMT的轉(zhuǎn)變可以提高患者的遠(yuǎn)期生存率， 并且為治療提供寶貴的機(jī)會(huì)。

綜上所述， 在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1、Vimentin表達(dá)上調(diào)， E-cadherin表達(dá)下調(diào)， 提示Cripto-1介導(dǎo)的EMT可能在卵巢漿液性腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起作用。

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[收稿日期：2016-03-25]