雞肉粉完全替代魚粉飼料中補充包被氨基酸對凡納濱對蝦生長、體成分及組織氨基酸含量的影響

林建偉張春曉， 2孫云章， 2翟少偉， 2宋 凱， 2葉繼丹， 2

（1. 廈門市飼料檢測與安全評價重點實驗室， 廈門 361021； 2. 農業部東海海水健康養殖重點實驗室， 廈門 361021）

雞肉粉完全替代魚粉飼料中補充包被氨基酸對凡納濱對蝦生長、體成分及組織氨基酸含量的影響

林建偉1張春曉1， 2孫云章1， 2翟少偉1， 2宋 凱1， 2葉繼丹1， 2

（1. 廈門市飼料檢測與安全評價重點實驗室， 廈門 361021； 2. 農業部東海海水健康養殖重點實驗室， 廈門 361021）

為了探討雞肉粉完全替代魚粉時飼料氨基酸的平衡性以及外源氨基酸的添加方式與凡納濱對蝦生長、體成分、血漿游離氨基酸及肌肉氨基酸含量的關系， 本試驗采用2×6因子試驗設計進行了為期56d的飼養試驗。2個飼料蛋白質水平分別為40%和32%， 6個飼料處理分別為魚粉組（對照組）、雞肉粉組、雞肉粉+晶體EAA組、雞肉粉+晶體EAA+晶體NEAA組、雞肉粉+包被EAA組、雞肉粉+包被EAA+包被NEAA組， 配制12組飼料。將凡納濱對蝦（0.30±0.01） g隨機分配到36個圓桶（150 L）中， 每桶30尾， 每3個桶為一個處理組， 飼喂一種飼料， 每天飽食投喂三次。在每一飼料蛋白質水平下， 無論是補充晶體氨基酸（CAA）組還是包被氨基酸組對蝦的增重率均顯著高于雞肉粉組（P＜0.05）， 且在32%蛋白質水平下， 包被EAA組對蝦增重率達到了魚粉組水平（P＞0.05）； 補充晶體EAA+NEAA組對蝦增重率與補充晶體EAA組無差異（P＞0.05）， 但均顯著低于補充包被氨基酸組（P＜0.05）； 補充包被EAA組對蝦增重率顯著高于補充包被EAA+NEAA組（P＜0.05）。飼料系數的變化正好與增重率變化相反（P＜0.05）。飼喂高蛋白質水平飼料較之飼喂低蛋白質飼料明顯提高對蝦增重率、蝦體蛋白含量（P＜0.05）， 但降低蝦體脂肪含量（P＜0.05）。包被氨基酸組凡納濱對蝦血漿游離氨基酸含量總體顯著低于CAA組（P＜0.05）。除谷氨酸、甘氨酸以及脯氨酸外， 各組對蝦肌肉氨基酸含量無顯著差異（P＞0.05）。結果表明， 在32%飼料蛋白質水平下， 用雞肉粉完全替代魚粉時， 飼料中補充包被EAA可明顯促進凡納濱對蝦的生長， 且達到了魚粉組的飼喂效果。

凡納濱對蝦； 雞肉粉； 氨基酸平衡； 生長性能； 游離氨基酸

魚粉以其高的必需氨基酸含量、良好的氨基酸平衡性而著稱， 是水產動物飼料中最為重要的一類優質蛋白源， 部分水產養殖種類的飼料配方中不可或缺。由于魚粉資源量不斷減少， 供給日益趨緊，迫使人們努力尋找適宜的魚粉替代品， 而且這個探尋的腳步長期以來就一直沒有停止過。有研究表明， 用雞肉粉最高可替代凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）飼料中80%的魚粉而不影響其生長［1， 2］，是潛在的魚粉替代品［1—7］。飼料蛋白質的質與量直接影響動物生長， 而其質量的高低又較大程度地反映在必需氨基酸（Essential amino acids，EAA）的豐缺程度和平衡性上， 甚至還可能受到非必需氨基酸（Nonessential amino acids，NEAA）的影響。Ye等［8］通過調配飼料中賴氨酸和蛋氨酸平衡后可將凡納濱對蝦飼料中的魚粉水平降低至15%。一般來說，解決飼料氨基酸平衡性的方法有兩種， 一是通過調配飼料中各種蛋白源的比例來來解決， 二是通過在飼料中直接添加外源合成氨基酸使飼料氨基酸達到平衡， 而后者無疑是最為直接的解決方案。在以往的魚粉替代研究中， 通常只考慮通過補充少數必需氨基酸來彌補替代魚粉后的EAA的不足問題［9， 10］， 而較少關注替代魚粉后飼料中所有EAA和NEAA的平衡性問題。此外， 飼料中外源氨基酸的添加方式也會影響水產動物對飼料氨基酸的利用率［11—14］。為此， 本試驗設計了兩個不同蛋白質水平的參考飼料配方， 并以參考配方的EAA和NEAA水平為標準， 采用外源添加氨基酸方式， 設計雞肉粉完全替代魚粉后飼料氨基酸平衡性不同的飼料配方， 探討飼料氨基酸的平衡性與對蝦生長、體成分及血漿、肌肉氨基酸間的關系， 為合理設計高效和低魚粉的凡納濱對蝦飼料配方提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

本試驗按2×6因子試驗設計， 設兩個飼料蛋白質水平（40%和32%）。每個蛋白質水平下設置魚粉組（對照組）、雞肉粉組（雞肉粉完全替代魚粉組）、雞肉粉+晶體EAA組、雞肉粉+包被EAA組、雞肉粉+晶體EAA+晶體NEAA組和雞肉粉+包被EAA+包被NEAA組， 飼料配方及常規成分列于表1。在40%飼料蛋白質水平下， 試驗料分別記為D1-D6， 其中D2不添加氨基酸， D3、D4分別補足相對于D1缺乏的EAA， D5、D6分別補足相對于D1缺乏的EAA+NEAA； 在32%飼料蛋白質水平下， 試驗料分別記為D7-D12， 其中D8不添加氨基酸， D9、D10分別補足相對于D7缺乏的EAA， D11、D12分別補足相對于D7缺乏的EAA+NEAA。D3-D6、D8-D12晶體氨基酸和硬化油脂包被氨基酸混合物組成見表 2。魚粉和雞肉粉中氨基酸含量見表 3。將所有原料用粉碎機粉碎后過80目篩網， 然后制成直徑為1.5 mm的硬顆粒飼料， 自然風干后于-20℃冰箱保存備用。飼料氨基酸組成和凡納濱對蝦必需氨基酸建議需要量列于表 4。

包被氨基酸壁材的選擇與制作 對水產動物而言， 尤其是蝦類， 飼料高的耐水性有助于減少營養物質在水中的溶失， 提高飼料效率。常用的包被壁材有蛋白質和脂類， 由于脂類具有很高的耐水性， 而晶體氨基酸（Crystalline amino acids， CAA）易溶于水， 因此使用脂類作為包被CAA的壁材更為理想［15—17］。

本試驗使用的包被壁材為硬化牛油（學名“三硬脂酸甘油酯”）， 其熔點在58—62℃左右。使用熔化冷凝分散法制作包被氨基酸， 操作步驟如下： 將硬化牛油于70℃熔化， 與粉碎后的晶體氨基酸1∶1混合， 攪拌分散， 滴加到70℃丙二醇、甲醇混合溶液（2∶1）中， 用磁力攪拌器攪拌得到分散液滴， 迅速冷卻， 過濾、干燥后得硬化油脂包膜氨基酸［18］。

包被氨基酸溶失率的測定 取20 mL蒸餾水于燒杯中， 加入0.4 g晶體或硬化油脂包被氨基酸，分別浸泡5min、10min、20min和40min后， 迅速過濾， 取10 mL上清液， 用凱氏定氮儀測定水中氮含量， 計算氨基酸溶失率。

氨基酸溶失率=100×（加入氨基酸一定時間后水中氮含量-蒸餾水中氮含量）/加入氨基酸的氮含量

1.2 試驗動物與管理

從廈門翔安養殖場購進健康凡納濱對蝦仔蝦，放入2個1000 L的循環水裝置的圓桶內培育， 1個月后仔蝦規格達到0.25 g左右， 選取較大規格的蝦苗（0.30±0.01） g， 隨機分配到36個循環水裝置的圓桶（150 L）中， 每桶30尾， 每3個桶為一個處理組， 共12個處理組。

1.3 飼養管理

養殖過程中每天分別在08：00， 14：00和20：00定時投喂飼料， 每次投喂2—3輪至飽食， 第一輪少量投喂， 確保蝦能夠快速攝食無殘餌， 1h后進行第二輪投喂， 30min后吸去殘料和糞便， 記下殘料量， 并換水。每天換水量約為1/3。養殖試驗持續56d。養殖期間水溫25—30℃， 鹽度26‰—29‰， 氨氮含量低于0.2 mg/L， 溶氧量4.7—5.5 mg/L， pH 8.0—8.4。

1.4 樣品采集

養殖試驗結束后， 對每桶蝦稱重， 再將蝦放回圓桶內穩定24h。在飼喂后30min， 用經預冷抗凝劑［22］（配置1 L抗凝劑： 50 mmol檸檬酸鈉+10 mmol EDTA·Na2+蒸餾水）潤濕后的1 mL注射器， 從蝦的心臟取血， 血樣以4000 r/min離心10min， 收集血漿，血漿樣本保存在-80℃冰箱中待測。抽完血后， 剝離蝦殼留取肌肉， 保存在-20℃冰箱中。

1.5 樣品測定

飼料和全蝦樣品中水分含量采用105℃烘箱干燥法測定， 粗蛋白含量采用Foss凱氏定氮儀測定；粗脂肪含量采用索氏抽提法測定； 粗灰分含量采用馬福爐灼燒法測定。

飼料氨基酸及肌肉氨基酸含量的測定［23］： 取風干飼料或風干肌肉樣品先用6 mol/L HCl真空110℃水解22h， 再經0.45 μm濾膜過濾后， 真空抽干，加入0.02 mol/L HCl， 用日立L-8900氨基酸分析儀檢測。測定飼料色氨酸時用4 mol/L NaOH水解樣品。測定飼料含硫氨基酸時樣品先用過甲酸（88%甲酸與30%過氧化氫按9∶1）氧化， 再用6 mol/L HCl水解。血漿游離氨基酸的測定［24］： 將血漿樣品與4%的磺基水楊酸按3∶1的比例混合， 超聲波勻質， 13000 r/min下離心沉淀蛋白質。取上清液經0.45 μm濾膜過濾， 濾液用日立L-8900氨基酸分析儀檢測。

表 1 飼料組成及營養水平（風干基礎）Tab. 1 Ingredients and composition of experimental diets （on an as fed basis） （g/kg）

表 2 晶體氨基酸和硬化油脂包被氨基酸混合物組成（風干基礎）Tab. 2 Composition of crystalline amino acid and hardened lipid coated amino acids mix （on an as fed basis） （g/kg）

表 3 原料氨基酸含量（風干基礎）（%）Tab. 3 Amino acid profile of protein source used in the experiment （on an as fed basis） （%）

1.6 計算公式

增重率（Weight gain rate， WGR）（%）=100×（實驗蝦終末均重-實驗蝦初始均重）/實驗蝦初始均重；

特定生長率（Specific growth rate， SGR） （%/ d）=100×（ln實驗蝦終末均重-ln實驗蝦初始均重）/飼喂天數；

飼料系數（Feed conversion ratio， FCR）=實驗蝦進食總量/（實驗蝦終末重+死亡蝦重量-實驗蝦初始重）；

成活率（Survival rate， SR， %） =100×（實驗末蝦數量/實驗初蝦數量）；

每尾日攝食量［Feed intake， FI， mg/（尾/d）］=攝食飼料總重/（實驗蝦終末數量×飼養天數）；

蛋白沉積率（Protein deposition ratio， PDR， %）= 100×（實驗蝦終末總重×實驗蝦終末體蛋白質含量-實驗蝦初始總重×實驗蝦初始體蛋白質含量）/ 實驗蝦攝入蛋白質總量

1.7 數據統計

所有實驗數據采用SPSS 17.0統計軟件進行單因素方差分析（one-way ANOVA）和二因素方差分析（two-way ANOVA）， 若處理組之間存在顯著差異（P＜0.05）， 則采用Student-Newman-Keuls法進行多重比較分析， 實驗數據以平均值±標準差（mean±SD）的形式表示。

2 結果

2.1 生長性能

由表 5可知， 飼料蛋白質水平及不同的氨基酸處理（飼料氨基酸平衡性和外源氨基酸的添加方式）均顯著影響凡納濱對蝦的生長性能。與32%飼料蛋白質水平相比， 40%飼料蛋白質水平顯著提高對蝦WGR和SGR（P＜0.05）， 降低FCR（P＜0.05）。在每一個飼料蛋白質水平下， 魚粉組和包被EAA組凡納濱對蝦FI均顯著高于雞肉粉組（P＜0.05）， 包被氨基酸組對蝦WGR和SGR均分別顯著高于CAA組（P＜0.05）， 但包被EAA組對蝦WGR顯著高于包被EAA+包被NEAA組（P＜0.05）。在40%蛋白質水平下， 對照組對蝦WGR（903.0%）顯著高于其余各組（P＜0.05）， 但是在32%飼料蛋白質水平下， 包被EAA組凡納濱對蝦WGR（769.0%）與對照組對蝦WGR（770.5%）無顯著性差異（P＞0.05）， 說明雞肉粉替代魚粉的飼料中添加EAA對凡納濱對蝦生長的促進作用要優于同時添加EAA和NEAA， 在飼料中添加包膜氨基酸比添加CAA更能夠明顯地改善對蝦生長性能， 因此， 在低蛋白質水平下， 凡納濱對蝦能更有效地利用外源氨基酸。凡納濱對蝦存活率在各組間無顯著性差異（P＞0.05）。飼料的蛋白質水平和飼料的氨基酸平衡之間存在顯著的交互作用（P＜0.05）。

表 4 試驗飼料氨基酸含量Tab. 4 Amino acid profile of experimental diets （%）

2.2 體成分

與32%飼料蛋白質水平相比， 40%飼料蛋白質水平顯著提高凡納濱對蝦的蝦體粗蛋白質和灰分含量（P＜0.05）， 而降低粗脂肪含量（P＜0.05）。在每一個飼料蛋白質水平下， 外源添加氨基酸能夠顯著提高凡納濱對蝦體蛋白質沉積率（P＜0.05）， 但氨基酸添加與否或以何種形式添加對凡納濱對蝦蝦體成分沒有明顯的影響（P＞0.05）。飼料的蛋白質水平和飼料氨基酸平衡性之間交互作用不顯著（P＞0.05）（表 6）。

2.3 包被氨基酸的溶失率

氨基酸溶失率見表 7。

2.4 血漿游離氨基酸

從表 8可見， 飼料處理對凡納濱對蝦攝食30min后血漿游離氨基酸含量影響顯著（P＜0.05）。在每一個飼料蛋白質水平下， 相比于雞肉粉組， CAA組對蝦在攝食后， 血漿游離氨基酸含量顯著上升（P＜0.05），且顯著高于魚粉組（P＜0.05）。無論是補充EAA還是EAA+NEAA， 包被氨基酸組對蝦的血漿游離氨基酸濃度相對于CAA組均有所下降（P＜0.05）。

2.5 肌肉氨基酸

各飼料組間（除谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸外）肌肉氨基酸和總氨基酸均無顯著性差異（P＞0.05）（表 9）。

表 5 不同實驗飼料對凡納濱對蝦生長性能的影響Tab. 5 Growth performance of shrimp fed different experimental diets

3 討論

3.1 生長性能

本試驗表明， 飼料蛋白質水平、飼料氨基酸平衡性、外源氨基酸的添加方式都明顯影響凡納濱對蝦的生長和飼料利用率。且高的飼料蛋白質水平明顯促進凡納濱對蝦的生長和飼料利用， 這與Ye等［25］、李廣麗等［26］的研究相一致， 說明處于快速生長階段的凡納濱對蝦需要高的飼料蛋白質水平來滿足其生長需要。本試驗結果表明， 在每一蛋白質水平下， 魚粉組和包被EAA組凡納濱對蝦的攝食要明顯好于雞肉粉組， 這與飼料中魚粉或添加包被EAA促進飼料的適口性有關。本試驗結果顯示， 在40%飼料蛋白質水平下， 各試驗組凡納濱對蝦的生長均明顯低于對照組水平， 而在32%飼料蛋白質水平下， 雞肉粉+包膜EAA組凡納濱對蝦的生長到達了與魚粉組水平， 這可能是因為低蛋白質水平飼料中的氨基酸水平， 特別是EAA水平， 并未滿足凡納濱對蝦的生長需求（表 4）， 因此相比于高的飼料蛋白質水平， 在低的飼料蛋白質水平下， 凡納濱對蝦對飼料中所補充的外源氨基酸存在更高的利用率，從而使低蛋白質水平下的雞肉粉+包膜EAA組對蝦的生長達到了魚粉組水平。飼料氨基酸平衡不僅僅是指飼料中EAA的數量與比例上滿足動物體生長的需要［27， 28］， 飼料中NEAA的質與量也會影響動物體的生長［29—32］。Mambrini等［31］研究表明， 羅非魚飼料中NEAA占總氨基酸的比例不宜超過60%。Green等［30］報道， 當飼料EAA/NEAA為57/43時， 虹鱒獲得最大氮沉積與最小氮排泄。本試驗表明， 在每一蛋白質水平下， 凡納濱對蝦的生長和飼料效率均與飼料EAA/NEAA呈相同趨勢， 即魚粉組（50/50）＞雞肉粉+包被EAA組（49/51）＞雞肉粉+包被EAA+包被NEAA組（48/52）＞雞肉粉組（46/54）， 這說明可以通過平衡飼料中氨基酸組成的方式來提高凡納濱對蝦的飼料蛋白質的利用率， 進而提高飼料效率， 從而可以實現在不影響對蝦生長的情況下適當降低對蝦飼料蛋白質含量［33， 34］。研究人員通常使用外源氨基酸來平衡飼料中的氨基酸組成， 然而不同外源氨基酸的添加方式也會影響外源氨基酸的利用效果［11］。Alam等［11］使用CAA替代飼料中所有的酪蛋白后， 日本囊對蝦的生長明顯下降， 然而使用酪蛋白-明膠包被的氨基酸替代飼料中所有的酪蛋白后， 對蝦的生長達到了對照組水平。劉永堅等［12］研究表明， 在草魚飼料中添加包膜賴氨酸對其生長的促進作用要優于添加晶體賴氨酸。本試驗結果也表明， 在雞肉粉替代魚粉的飼料中添加硬化油脂包被的氨基酸對凡納濱對蝦生長的促進作用要明顯好于直接添加CAA。本試驗晶體EAA組與晶體EAA+NEAA組凡納濱對蝦生長沒有明顯差異，而包被EAA組凡納濱對蝦的生長卻又好于包被EAA+NEAA組， 這說明飼料EAA/NEAA比例（即飼料氨基酸平衡性）與凡納濱對蝦生長之間的關系密切。上述研究表明， 將CAA通過包被處理后， 能夠有效提高水產動物對外源合成氨基酸的利用效率。當前對于水產動物利用CAA效果不如包被氨基酸的原因主要有： （1） CAA在水中溶失率高； （2） CAA與完整蛋白質氨基酸吸收不同步； （3） 由于CAA在水產動物體內吸收過快， 超出了水產動物體內游離氨基酸庫對飼料來源氨基酸的容納量或水產動物體內游離氨基酸庫對某些氨基酸在短時間內大量吸收的緩沖能力有限， 因此先被吸收的氨基酸可能被水產動物用于能量消耗或是通過轉氨基作用分解排泄掉了［35—37］， 這也解釋了為什么畜禽能夠很好的利用飼料中的CAA［38， 39］， 而水產動物對飼料中CAA利用效果不理想的原因， 即動物體對體內氨基酸的短期存儲和利用能力不同［15］。而將CAA包被后， 即可以降低CAA的溶失， 又可以延緩CAA的吸收， 因此更有利于水產動物的生長。

表 6 不同實驗飼料對凡納濱對蝦體成分及蛋白質沉積率的影響（濕重基礎）Tab. 6 Whole-body composition and protein deposition ratio of shrimp fed different experimental diets （wet weight basis） （%）

表 7 晶體或包被氨基酸在水中的溶失率Tab. 7 The leaching rate of crystal and coated amino acids （%）

表 8 不同試驗飼料對凡納濱對蝦血漿游離氨基酸含量的影響Tab. 8 Plasma free amino acid concentrations of shrimp fed different experimental diets （mg/100 mL）

3.2 體成分

Ye等［25］報道， 高飼料蛋白質水平促進凡納濱對蝦蝦體蛋白質和灰分沉積， 降低蝦體脂肪沉積。該結果與本試驗結果相一致。低飼料蛋白質水平導致蝦體蛋白質沉積降低而體脂沉積增加， 原因可能是， 低的飼料蛋白質水平更易出現氨基酸平衡失衡問題， 尤其是EAA的失衡（表 4）， 因此， 部分EAA被用于能量代謝， 過多能量會轉化為脂肪并以體脂的形式沉積， 而相應地減少了氨基酸用于蛋白質的沉積。Xie等［40］研究表明， 飼料賴氨酸含量從2.23%降到1.99%時， 凡納濱對蝦蝦體的蛋白質含量隨之明顯下降。他們認為， 飼料賴氨酸的缺乏可能增加了其他EAA的氧化， 降低了氨基酸的沉積。本試驗表明， 在每一個飼料蛋白質水平下， 外源添加氨基酸能夠明顯提高凡納濱對蝦體蛋白質沉積率， 這一結果與陳乃松等［41］在大口黑鱸上的研究結果一致。本試驗結果還顯示， 外源添加氨基酸與否并不影響凡納濱對蝦的蝦體成分， 可見， 凡納濱對蝦的體成分與飼料氨基酸之間的平衡性無關。González等［42］研究表明， 隨著飼料中脂肪含量增加， 凡納濱對蝦肝胰腺與肌肉脂肪含量明顯上升。吳尚忠等［43］報道， 日本對蝦能夠利用飼料中的三棕櫚酸甘油酯。本試驗表明， 在每一個飼料蛋白質水平下，雞肉粉+包被氨基酸組凡納濱對蝦的體脂肪沉積要明顯高于其他各組， 這可能是因為本試驗選用脂類作為CAA的包被壁材， 增加了包被氨基酸組飼料中的脂肪含量， 進而提高了對蝦的體脂肪沉積。

表 9 不同實驗飼料對凡納濱對蝦肌肉氨基酸含量的影響Tab. 9 Muscle amino acid contents of shrimp fed different experimental diets （mg/100 g）

3.3 血漿游離氨基酸及肌肉氨基酸

動物體內游離氨基酸水平能夠在一定程度上反映不同飼料蛋白質的利用程度［12， 13， 44， 45］。Segovia-Quintero等［44］研究表明， 使用軟脂酸甘油酯聚乙烯醇包被蛋氨酸， 能夠有效延緩羅非魚腸道對游離蛋氨酸的吸收。Schuhmacher等［45］報道， 虹鱒在飼喂小麥蛋白飼料18h后血漿游離氨基酸濃度達到峰值， 而在飼喂氨基酸飼料后9h其血漿游離氨基酸濃度就達到峰值； 冷向軍等［13］報道， 相對CAA而言， 飼料中補充環糊精或淀粉包膜氨基酸使異育銀鯽血清游離氨基酸峰值有所延遲， 且補充環糊精或淀粉包膜氨基酸組異育銀鯽的生長要明顯好于補充CAA組。以上研究表明， 水產動物對CAA的吸收速度要快于完整蛋白質氨基酸， 通過包被CAA可有效延緩CAA在水產動物腸道內的吸收速度， 降低血液中游離氨基酸的濃度， 提高外源氨基酸與完整蛋白質氨基酸吸收的同步性， 從而提高飼料蛋白質的利用率， 進而有效促進水產動物的生長。本試驗結果也表明， 在飼喂30 min后， 補充包被氨基酸組凡納濱對蝦的血漿游離氨基酸濃度要明顯低于補充CAA組， 且在32%蛋白質水平下， 雞肉粉+包被EAA組凡納濱對蝦的生長與魚粉組水平一致。這說明使用硬化油脂包被CAA能夠有效降低CAA在凡納濱對蝦腸道內的吸收速率， 提高與完整蛋白質氨基酸吸收的同步性， 促進對蝦生長。各處理組凡納濱對蝦肌肉氨基酸含量（除谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸外）， 均無明顯差異， 這與牛化欣［14］的研究結果類似， 說明飼料氨基酸平衡與否對對蝦肌肉氨基酸含量影響不大。

4 結論

（1）在雞肉粉完全替代魚粉的飼料中添加外源合成EAA或EAA+NEAA能夠明顯促進凡納濱對蝦的生長， 添加硬化油脂包被氨基酸對凡納濱對蝦生長的促進作用要明顯好于添加CAA， 在低蛋白質水平（32%）雞肉粉組飼料中添加硬化油脂包被EAA，能使凡納濱對蝦的生長達到魚粉組水平， 在添加了EAA的雞肉粉組飼料中進一步補充NEAA沒有改善凡納濱對蝦的生長。（2）相對于CAA而言， 在雞肉粉完全替代魚粉的飼料中添加硬化油脂包被AA能夠有效延緩外源合成氨基酸的吸收速率， 降低血漿游離氨基酸濃度， 提高與完整蛋白氨基酸吸收的同步性， 降低外源合成氨基酸的溶失率， 從而提高凡納濱對蝦的生長。（3）飼喂高蛋白質水平（40%）的飼料比飼喂低蛋白質水平（32%）的飼料更能促進凡納濱對蝦的生長， 且高飼料蛋白質水平增加凡納濱對蝦的體蛋白質沉積， 減少體脂肪沉積。

［1］Cruz-Suárez L E， Nieto-López M， Guajardo-Barbosa C，et al. Replacement of fish meal with poultry by-product meal in practical diets for Litopenaeus vannamei， and digestibility of the tested ingredients and diets ［J］. Aquaculture， 2007， 272（1）： 466—476

［2］Chi S， Tan B， Mai K， et al. Growth and feed efficiency of juvenile shrimp Litopenaeus vannamei fed formulated diets containing different levels of poultry by-product meal ［J］. Journal of Ocean University of China， 2009，8（4）： 399—403

［3］Zhu W， Mai K， Zhang B， et al. A study on the meat and bone meal and poultry by-product meal as protein substitutes of fish meal in practical diets for Litopenaeus vannamei juveniles ［J］. Journal of Ocean University of China， 2004， 3（2）： 157—160

［4］Samocha T M， Davis D A， Saoud I P， et al. Substitution of fish meal by co-extruded soybean poultry by-product meal in practical diets for the Pacific white shrimp， Litopenaeus vannamei ［J］. Aquaculture， 2004， 231（1）：197—203

［5］Davis D A， Arnold C R. Replacement of fish meal in practical diets for the Pacific white shrimp， Litopenaeus vannamei ［J］. Aquaculture， 2000， 185（3）： 291—298

［6］Cheng Z J， Behnke K C， Dominy W G. Effects of poultry by-product meal as a substitute for fish meal in diets on growth and body composition of juvenile Pacific white shrimp， Litopenaeus vannamei ［J］. Journal of Applied Aquaculture， 2002， 12（1）： 71—83

［7］Saoud I P， Rodgers L J， Davis D A， et al. Replacement of fish meal with poultry by-product meal in practical diets for redclaw crayfish （Cherax quadricarinatus） ［J］. Aquaculture Nutrition， 2008， 14（2）： 139—142

［8］Ye J D， Liu X H， Kong J H， et al. The evaluation of practical diets on a basis of digestible crude protein， lysine and methionine for Litopenaeus vannamei ［J］. Aquaculture Nutrition， 2012， 18（6）： 651—661

［9］El-Saidy D M S D， Gaber M. Complete replacement of fish meal by soybean meal with dietary L-lysine supplementation for Nile tilapia Oreochromis niloticus （L.） fingerlings ［J］. Journal of the World Aquaculture Society，2002， 33（3）： 297—306

［10］Hu M， Wang Y， Wang Q， et al. Replacement of fish meal by rendered animal protein ingredients with lysine and methionine supplementation to practical diets for gibel carp， Carassius auratus gibelio ［J］. Aquaculture， 2008，275（1）： 260—265

［11］Alam M S， Teshima S， Koshio S， et al. Effects of supplementation of coated crystalline amino acids on growth performance and body composition of juvenile kuruma shrimp Marsupenaeus japonicas ［J］. Aquaculture Nutrition， 2004， 10（5）： 309—316

［12］Zhang S， Ai Q H， Mai K S， et al. Effects of fish meal replacement with crystalline amino acid on digestive and metabolic enzymes of tongue sole （Cynoglossus semilaevis günther， 1873） larvae ［J］. Acta Hydrobiologica Sinica， 2014， 38（5）： 801—808 ［張珊， 艾慶輝， 麥康森，等. 晶體氨基酸替代魚粉蛋白對半滑舌鰨稚魚消化酶和代謝酶活力的影響. 水生生物學報， 2014， 38（5）：801—808］

［13］Leng X J， Tian J， Chen B A， et al. Comparison study on utilizing crystalline or coated methionine by tilapia （Oreochromis niloticus × O. aureus） ［J］. Acta Hydrobiologica Sinica， 2013， 37（2）： 235—242 ［冷向軍， 田娟， 陳丙愛，等. 羅非魚對晶體蛋氨酸、包膜蛋氨酸利用的比較研究. 水生生物學報， 2013， 37（2）： 235—242］

［14］Niu H X. Preparation of microencapsulated amino acids and its evaluation in feed processing and shrimp culture ［D］. Wuxi： Jiangnan University. 2011 ［牛化欣. 微膠囊氨基酸制備及其在飼料加工和蝦養殖中的效果研究. 無錫： 江南大學. 2011］

［15］Deng J M， Mai K S. A review on utilization of crystalline amino acids by fishes ［J］. Journal of Yunnan Agricultural University， 2008， 23（4）： 552—557 ［鄧君明， 麥康森. 魚類對晶體氨基酸利用效率的研究進展. 云南農業大學學報， 2008， 23（4）： 552—557］

［16］Langdon C J， Buchal M A. Comparison of lipid-walled microcapsules and lipid spray beads for the delivery of water-soluble， low-molecular weight materials to aquatic animals ［J］. Aquaculture Nutrition， 1998， 4（4）： 275—284

［17］López-Alvarado J， Langdon C J， Teshima S I， et al. Effects of coating and encapsulation of crystalline amino acids on leaching in larval feeds ［J］. Aquaculture， 1994，122（4）： 335—346

［18］Liang Z Q. Microencapsulation Technology and Application ［M］. Beijing： China Light Industry Press. 1999，255—256 ［梁治齊. 微膠囊技術及其應用. 北京： 中國輕工業出版社. 1999， 255—256］

［19］Akiyama D M. Future considerations for shrimp nutrition and the aquaculture feed industry ［C］. Proceeding of the Special Session on Shrimp Farming World Aquaculture Society. Baton Rouge USA. 1992

［20］Wilson R P. Amino Acid Requirements of Finfish and Crustaceans ［M］. Amino Acids in Animal Nutrition. CABI Publishing. 2003， 427—447

［21］Wang Y L. Study on the requirements of threonine， leucine， tryptophan and valine for juvenile Pacific white shrimp， Litopenaeus vannamei ［D］. Master thesis， Zhanjiang： Guangdong Ocean University. 2013 ［王用黎. 凡納濱對蝦幼蝦對蘇氨酸， 亮氨酸， 色氨酸和纈氨酸需要量的研究. 碩士畢業論文. 湛江： 廣東海洋大學. 2013］

［22］Jiang Q， Wang L. Selection of anticoagulant to the hemolymph of Penaeus chinesis ［J］. Journal of Fisheries of China， 2001， 25（4）： 359—362 ［蔣瓊， 王雷. 中國對蝦血淋巴抗凝劑的篩選. 水產學報， 2001， 25（4）： 359—362］

［23］Mente E， Coutteau P， Houlihan D， et al. Protein turnover，amino acid profile and amino acid flux in juvenile shrimp Litopenaeus vannamei： effects of dietary protein source ［J］. Journal of Experimental Biology， 2002， 205（20）：3107—3122

［24］Findley A M， Stickle W B. Effects of salinity fluctuation on the hemolymph composition of the blue crab Callinectes sapidus ［J］. Marine Biology， 1978， 46（1）： 9—15

［25］Ye J D， Wang K， Li F D， et al. Incorporation of a mixture of meat and bone meal， poultry by-product meal，blood meal and corn gluten meal as a replacement for fish meal in practical diets of Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei at two dietary protein levels ［J］. Aquaculture Nutrition， 2011， 17（2）： e337-e347

［26］Li G L， Zhu C H， Zhou Q C. Effects of dietary protein level on the growth of Penaeus vannamei ［J］. Marine Science， 2001， 25（4）： 1—4 ［李廣麗， 朱春華， 周歧存. 不同蛋白質水平的飼料對凡納濱對蝦生長的影響. 海洋科學， 2001， 25（4）： 1—4］

［27］Rollin X， Mambrini M， Abboudi T， et al. The optimum dietary indispensable amino acid pattern for growing Atlantic salmon （Salmo salar L.） fry ［J］. British Journal of Nutrition， 2003， 90（5）： 865—876

［28］Twibell R G， Griffin M E， Martin B， et al. Predicting dietary essential amino acid requirements for hybrid striped bass ［J］. Aquaculture Nutrition， 2003， 9（6）： 373—381

［29］Peres H， Oliva-Teles A. Effect of the dietary essential to non-essential amino acid ratio on growth， feed utilization and nitrogen metabolism of European sea bass （Dicentrarchus labrax） ［J］. Aquaculture， 2006， 256（1）： 395—402

［30］Green J A， Hardy R W， Brannon E L. The optimum dietary essential： nonessential amino acid ratio for rainbow trout （Oncorhynchus mykiss）， which maximizes nitrogen retention and minimizes nitrogen excretion ［J］. Fish Physiology and Biochemistry， 2002， 27（1—2）： 109—115

［31］Mambrini M， Kaushik S J. Partial replacement of dietary protein nitrogen with dispensable amino acids in diets of Nile tilapia， Oreochromis niloticus ［J］. Comparative Biochemistry and Physiology Part A： Physiology， 1994，109（2）： 469—477

［32］Heger J. Essential to non-essential amino acid ratios ［C］. Amino Acids in Animal Nutrition. 2003， 103—204

［33］Yamamoto T， Sugita T， Furuita H. Essential amino acid supplementation to fish meal-based diets with low protein to energy ratios improves the protein utilization in juvenile rainbow trout Oncorhynchus mykiss ［J］. Aquaculture， 2005， 246（1）： 379—391

［34］Gaylord T G， Barrows F T. Multiple amino acid supplementations to reduce dietary protein in plant-based rainbow trout， Oncorhynchus mykiss， feeds ［J］. Aquaculture，2009， 287（1）： 180—184

［35］Ye Y T. Freshwater fish nutrition and feed formulation technology trends analysis （A） ［J］. Feed China， 2005， 10：32—34 ［葉元土. 淡水魚類營養與飼料配制技術發展趨勢與存在問題分析（上）. 飼料廣角， 2005， 10： 32—34］

［36］Zarate D D， Lovell R T， Payne D M. Effects of feeding frequency and rate of stomach evacuation on utilization of dietary free and protein-bound lysine for growth by channel catfish Ictalurus punctatus ［J］. Aquaculture Nutrition，1999， 5（1）： 17—22

［37］Cowey C B， Walton M J. Studies on the uptake of （14C）amino acids derived from both dietary （14C） protein and dietary （14C） amino acids by rainbow trout， Salmo gairdneri Richardson ［J］. Journal of Fish Biology， 1988， 33（2）：293—305

［38］Adeola O， Lawrence B V， Cline T R. Availability of amino acids for 10-to 20-kilogram pigs： lysine and threonine in soybean meal ［J］. Journal of Animal Science，1994， 72（8）： 2061—2067

［39］Fernandez S R， Parsons C M. Bioavailability of the digestible lysine and valine in cottonseed and soybean meals for chicks ［J］. Poultry Science， 1996， 75（2）：216—223

［40］Xie F， Zeng W， Zhou Q， et al. Dietary lysine requirement of juvenile Pacific white shrimp， Litopenaeus vannamei ［J］. Aquaculture， 2012， 358—359： 116—121

［41］Chen N S， Liang Q L， Xiao W W et al. Effects of supplementing EAA to lower protein diets on growth， body composition and immunological index of largemouth bass （Micropterus salmoides） ［J］. Acta Hydrobiologica Sinica，2014， 38（2）： 262—271 ［陳乃松， 梁勤朗， 肖溫溫， 等. 在低蛋白質飼料中補充必需氨基酸對大口黑鱸生長， 體組成和免疫指標的影響. 水生生物學報， 2014， 38（2）：262—271］

［42］González-Félix M L， Gatlin D M， Lawrence A L， et al. Effect of various dietary lipid levels on quantitative essential fatty acid requirements of juvenile Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei ［J］. Journal of the World Aquaculture Society， 2002， 33（3）： 330—340

［43］Wu S Z， Effects of phospholipid on transporting ［^ 14C］tripalmitin in vivo for Penaeus japonicas ［J］. Foreign Fisheries， 1989， （2）： 24—27 ［吳尚忠. 餌料中磷脂在日本對蝦體內輸送 ［^ 14C］ 三棕櫚酸甘油酯的作用. 國外水產， 1989， （2）： 24—27］

［44］Segovia-Quintero M A， Reigh R C. Coating crystalline methionine with tripalmitin-polyvinyl alcohol slows its absorption in the intestine of Nile tilapia， Oreochromis niloticus ［J］. Aquaculture， 2004， 238（1）： 355—367

［45］Schuhmacher A， Wax C， Gropp J M. Plasma amino acids in rainbow trout （Oncorhynchus mykiss） fed intact protein or a crystalline amino acid diet ［J］. Aquaculture，1997， 151（1）： 15—28

COMPLETE REPLACEMENT OF FISH MEAL BY POULTRY BY-PRODUCT MEAL IN PRACTICAL DIETS SUPPLEMENTED WITH COATED AMINO ACIDS FOR PACIFIC WHITE SHRIMP LITOPENAEUS VANNAMEI

LIN Jian-Wei1， ZHANG Chun-Xiao1， 2， SUN Yun-Zhang1， 2， ZHAI Shao-Wei1， 2， SONG Kai1， 2and YE Ji-Dan1， 2
（1. Xiamen Key Laboratory for Feed Quality Testing and Safety Evaluation， Xiamen 361021， China； 2. Key Laboratory of Healthy Mariculture for the East China Sea， Ministry of Agriculture， Xiamen 361021， China）

A 2 × 6 factorial experiment with two levels of dietary protein （32% and 40%） and six amino acid （AA）treatments were conducted to determine effects of complete replacement of fish meal （FM） with poultry by-product meal （PBM） in diets on a basis of EAAs or EAA+NEAAs on the growth and body composition of Pacific white shrimp over an 8-week feeding trial. Six AA-treated diets were formulated and expressed as diet FM （basal diet）， diet PBM，PBM+ crystalline EAA， diet PBM+ coated EAA， diet PBM+ crystalline EAA+ crystalline NEAA and diet PBM+ coated EAA+ coated NEAA， respectively. For each dietary protein level， WGR in groups of PBM+ crystalline EAA and PBM+ crystalline EAA+ crystalline NEAA were higher than that in PBM group （P＜0.05）. No difference in WGR between group PBM+ coated EAA and control groups at 32% dietary protein level （P＞0.05） was observed. The WGR in group PBM+ crystalline EAA and in group PBM+ crystalline EAA+ crystalline NEAA was not different （P＞0.05）， but it was lower than that in group PBM+ coated EAA and group PBM+ coated EAA+ coated NEAA groups （P＜0.05）. The WGR value in group of PBM+ coated EAA was significantly higher than that in group PBM+ coated EAA+ coated NEAA （P＜0.05）. Changes in FCR was the opposite of WGR （P＜0.05）. The shrimp fed the 40% protein diets had higher WGR and body protein content but lower body lipid content （P＜0.05） compared to those shrimp fed 32% protein diets. Plasma free AA concentrations of group PBM+ coated AA were generally lower than those in group PBM+ crystalline AA （P＜0.05）. There were no differences in muscle AA contents （P＞0.05） except glutamate， glycine and proline across dietary treatments （P＜0.05）. Feeding a diet with PBM+ coated EAA can lead to a growth comparable to feeding the basal diet at 32% dietary protein level.

Litopenaeus vannamei； Poultry by-product meal； Amino acid balance； Growth； Free amino acids

S968.2

A

1000-3207（2016）04-0700-12

10.7541/2016.93

2015-05-25；

2015-12-16

國家公益性行業（農業）專項（201303053）； 廈門市科技計劃項目（3502Z20130040）資助 ［Supported by the Special Fund for Agroscientific Research in the Public Interest （201303053）； Xiamen Science and Technology Plan Project （3502Z20130040）］

林建偉（1990—）， 男， 福建南平人； 碩士研究生； 研究方向為水產動物營養與飼料學。E-mail： linjianwei1013@163.com

葉繼丹（1966—）， 男， 博士； 研究員； 碩士生導師； E-mail： yjdwk@sina.com