顯齒蛇葡萄總黃酮對(duì)急性酒精中毒小鼠的解酒及肝損傷的保護(hù)作用

蔡建峰，藍(lán)文明，魏亮龍，黃珠萍，劉娉娉，陳俊毅，許　　文，黃鳴清（.泉州正骨醫(yī)院，福建 泉州 6000；.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州 50；.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 50）

顯齒蛇葡萄總黃酮對(duì)急性酒精中毒小鼠的解酒及肝損傷的保護(hù)作用

蔡建峰1，藍(lán)文明2，魏亮龍2，黃珠萍2，劉娉娉2，陳俊毅2，許文3，黃鳴清3
（1.泉州正骨醫(yī)院，福建 泉州 362000；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州 350122；3.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

目的觀察顯齒蛇葡萄總黃酮對(duì)急性酒精中毒小鼠的解酒及肝損傷的保護(hù)作用。方法建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，隨機(jī)分為正常組、模型組、顯齒蛇葡萄高、中、低組、陽性藥物組，比較醒酒時(shí)間、ALT、AST、GSH、SOD、MOA、ADH、ALDH的變化。結(jié)果顯齒蛇葡萄總黃酮可縮短醒酒時(shí)間，提高ADH、ALDH活性，降低ALT、AST水平，增加SOD、GSH水平，減少M(fèi)DA含量。結(jié)論顯齒蛇葡萄總黃酮對(duì)急性酒精性肝損傷有較好的保護(hù)作用。

肝損傷；酒精中毒；顯齒蛇葡萄；總黃酮；抗氧化；小鼠模型

顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand2-Mazz）W.T.Wang是葡萄科蛇葡萄屬藤本藥用植物，文獻(xiàn)［1-4］顯示顯齒蛇葡萄對(duì)感染鴨血清乙型肝炎病毒DNA水平有顯著的抑制作用，對(duì)非酒精性脂肪肝、肝纖維化、四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷等具有良好的保護(hù)作用，但是對(duì)于急性酒精中毒的解酒作用及酒精性肝損傷的保護(hù)作用報(bào)道較少。因此，我們研究顯齒蛇葡萄總黃酮解酒及抗急性酒精性肝損傷的作用，為以顯齒蛇葡萄為原料，開發(fā)解酒、抗酒精性肝損傷的新藥，保健食品的研發(fā)，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1實(shí)驗(yàn)儀器Sartorius CPA225D十萬分之一電子天平 （賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BH-2系統(tǒng)顯微鏡（日本Olympus公司），M200多功能酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)材料顯齒蛇葡萄藥材于2014年8月實(shí)地采自福建省三明市尤溪縣西城鎮(zhèn)湆頭村顯齒蛇葡萄繁育圃，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院范世明高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為葡萄科蛇葡萄屬顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand2Mazz）W.T.Wang干燥葉。凱西萊（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；鹽酸納洛酮（百靈威科技有限公司）；56%酒精（v/ v）采用56°紅星二鍋頭（北京紅星釀酒總廠）；ALT、AST、SOD、TG、丙二醛 （MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）試劑盒（南京建成生物工程研究所）；乙醇脫氫酶（ADH）、乙醛脫氫酶（ALDH）活性測(cè)試試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性昆明種小鼠120只，體質(zhì)量（20±2）g，福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1顯齒蛇葡萄總黃酮制備根據(jù)文獻(xiàn)［5］，取顯齒蛇葡萄干燥葉100 g，用30倍量60%乙醇超聲提取2次，每次28 min，提取液濃縮干燥制備顯齒蛇葡萄總黃酮提取物，實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配制成16、32、48 mg/mL（每mL含生藥0.05、0.1、0.15 g）的低、中、高3個(gè)劑量，備用。

2.2陽性對(duì)照藥物配制稱取凱西萊100 mg，實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配制成500 mg/mL備用。稱取鹽酸納洛酮100 mg，實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配成50 mg/mL備用。

2.3顯齒蛇葡萄解酒作用模型的建立及給藥方法

［6］的造模方法，SPF級(jí)雄性小鼠60只隨機(jī)分成模型組、顯齒蛇葡萄160 mg/（kg/d）組（低劑量組）、顯齒蛇葡萄320 mg/（kg/d）組（中劑量組）、顯齒蛇葡萄 480 mg/（kg/d）組（高劑量組）、鹽酸納溶酮5 mg/（kg/d）組（陽性藥物組），每組12只。每組用56%酒精20 mL/（kg/d）灌胃造模，酒精灌胃后，顯齒蛇葡萄低、中、高劑量組分別灌胃給藥，陽性藥物組腹腔注射鹽酸納洛酮，觀察各組小鼠活動(dòng)狀況，以翻正反射消失時(shí)間為醉酒潛伏期，翻正反射恢復(fù)時(shí)間為醒酒時(shí)間。

2.4小鼠急性酒精性肝損傷模型的建立及給藥方法參考文獻(xiàn)［7］的造模方法，SPF級(jí)昆明種雄性小鼠60只，隨機(jī)分為正常組、模型組、顯齒蛇葡萄160 mg/（kg/d）組（低劑量組）、顯齒蛇葡萄320 mg/ （kg/d）組（中劑量組）、顯齒蛇葡萄480 mg/（kg/d）組（高劑量組）、凱西萊 50 mg/（kg/d）組（陽性藥物組），每組10只，造模連續(xù)10 d，除了正常組外，每組給56%酒精15 mL/（kg/d）灌胃造模，正常組給等體積的生理鹽水，每日1次。自造模第1天起，治療組每日按照10 mL/kg灌胃給予相應(yīng)藥液。于末次灌胃后禁食12 h后，進(jìn)行取材和生化指標(biāo)檢測(cè)。摘眼球采血，3 500 r/min離心10 min，分離血清，按照試劑盒方法檢測(cè)ALT、AST。采血后處死動(dòng)物，剖腹取肝臟左葉，按照試劑盒方法制作肝臟勻漿并檢測(cè)SOD、GSH、MDA及肝臟乙醇脫氫酶（ADH）和乙醛脫氫酶（ALDH）活性。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1～表4。

表1　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精中毒小鼠模型的解酒作用（±s）

表1　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精中毒小鼠模型的解酒作用（±s）

注：與模型組比較，1）P＜0.01，2）P＜0.05。

組別模型組陽性藥物組低劑量組中劑量組高劑量組醒酒時(shí)間/h 5.3±1.7 3.9±1.12）4.6±0.9 3.9±1.12）3.8±0.92）小鼠/只9 1 0劑量/ （mg/kg）—5 10 9 11 160 320 480醉酒潛伏期/min 14.7±5.1 26.6±12.91）18.4±7.3 18.6±9.3 21.1±8.42）

表2　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響（±s）

表2　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響（±s）

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01，3）P＜0.05。

組別正常組模型組陽性藥物組低劑量組中劑量組高劑量組AST/KU 27.5±4.7 50.7±7.91）29.7±4.32）39.1±6.23）37.8±7.63）34.2±6.13）小鼠/只1 0劑量/ （mg/kg）10 10 10 10 10——5 0 160 320 480 ALT/KU 25.2±4.3 47.5±7.91）21.8±9.12）37.6±3.63）35.6±4.13）32.6±7.53）

表3　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠肝臟GSH、SOD、MDA的影響（±s）

表3　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠肝臟GSH、SOD、MDA的影響（±s）

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01，3）P＜0.05。

組別正常組模型組陽性藥物組低劑量組中劑量組高劑量組小鼠/只10 10 10 10 10 10劑量/（mg/kg）——5 0 160 320 480 GSH/（mg/gprot）4.8±0.8 2.6±0.61）3.6±0.63）3.4±0.63）3.5±0.53）3.7±0.73）SOD/（U/mgprot）164.4±14.5 72.4±12.31）121.4±33.43）112.2±26.23）126.3±34.43）131.7±25.32）MDA/（nmol/mgprot）4.6±0.8 7.7±1.31）4.7±0.52）5.3±0.73）5.7±1.23）6.0±0.82）

表4　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠肝臟ADH、ALDH的影響（±s）

表4　　顯齒蛇葡萄對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠肝臟ADH、ALDH的影響（±s）

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05。

組別正常組模型組陽性藥物組低劑量組中劑量組高劑量組小鼠/只1 0劑量/ （mg/kg）10 10 10 10 10——5 0 160 320 480 ADH/ （U/mgprot）21.4±3.1 35.8±5.01）40.8±4.0 36.2±4.7 38.5±5.1 44.0±5.82）ALDH/ （U/mgprot）19.6±1.8 32.5±5.21）38.9±3.22）35.0±5.6 36.2±4.1 39.9±4.12）

4討論

研究發(fā)現(xiàn)顯齒蛇葡萄總黃酮在解酒方面可以有效地延長醉酒潛伏期和縮短醒酒時(shí)間，這與其提高肝臟解酒酶（ADH、ALDH）活性有關(guān)。對(duì)于急性酒精性肝臟損傷，顯齒蛇葡萄總黃酮能有效降低模型小鼠的ALS、AST，增加肝臟SOD、GSH水平，減少肝臟MDA含量，提示顯齒蛇葡萄總黃酮對(duì)急性酒精性肝損傷有較好的保護(hù)作用。

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R285.5

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1000-338X（2016）03-0016-02

2016-03-10

福建省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201510393021）

蔡建峰（1987—），男，藥師，主要從事藥械管理和中草藥質(zhì)量研究。

黃鳴清（1980—），男，副教授。Email：hmq19801215@126. com