鹿銜草對去卵巢大鼠骨形成的促進作用

陳　　翔，段曉敏，林　　煜，黃云梅，黃美雅，賈曉康，林燕萍（.福建中醫藥大學，福建 福州 350；.福州市第二醫院，福建 福州 350007）

·實驗研究·

鹿銜草對去卵巢大鼠骨形成的促進作用

陳翔1，段曉敏1，林煜2，黃云梅1，黃美雅1，賈曉康1，林燕萍1
（1.福建中醫藥大學，福建 福州 350122；2.福州市第二醫院，福建 福州 350007）

目的觀察鹿銜草對去卵巢大鼠骨形成的作用。方法將3月齡SD雌性大鼠通過手術切除雙側卵巢，隨機分為鹿銜草高、中、低劑量組、生理鹽水組、骨疏康對照組，另設假手術組，分別進行干預，術后4、8、12周分批處死，行骨密度、股骨干骺端骨小梁面積、雌二醇、骨鈣素水平檢測，Bradford法檢測骨組織中骨堿性磷酸酶蛋白含量。結果各用藥組可增加骨密度、骨小梁面積百分比，提高血清中雌二醇、骨鈣素水平，增加骨堿性磷酸酶的表達。結論鹿銜草對去卵巢大鼠的骨形成有促進作用。

鹿銜草；絕經后骨質疏松癥；大鼠模型；骨堿性磷酸酶；骨鈣素

絕經后骨質疏松癥（postmenopausal osteoporosis，PMOP）是中老年婦女常見的一種代謝性疾病。中醫認為PMOP屬“骨痿”、“骨痹”范疇，病因主要為“腎虛”。因此，針對PMOP中醫常以補腎立法施治。在骨傷方藥中，鹿銜草作為補腎健骨強筋的藥物被廣泛應用，本課題組前期研究［1］結果顯示：鹿銜草能明顯促進體外成骨細胞的增殖和分化。為進一步明確鹿銜草對絕經后骨質疏松癥的防治機理，我們通過在體動物實驗，觀察鹿銜草對去卵巢大鼠骨形成的促進作用。

1材料和方法

1.1實驗藥物鹿銜草顆粒（培力藥業有限公司，批號：A100099-02）；骨疏康顆粒（遼寧康辰藥業有限公司，批號：101109）。

1.2實驗動物造模、分組選3月齡健康清潔級雌性SD大鼠180只［上海斯萊克實驗動物有限公司，實驗動物合格證號：SCXK（滬）2010-0002，編號：0021099］，體質量（200±20）g。將大鼠隨機分為卵巢切除組150只、假手術組30只。卵巢切除組用2%戊巴比妥鈉麻醉，取腹部正中切口，結扎切除卵巢，術后肌注青霉素預防感染。假手術組除不結扎摘除雙側卵巢外，其它同卵巢切除組。術后將卵巢切除組150只大鼠隨機分為鹿銜草高、中、低劑量組、骨疏康顆粒組、生理鹽水組，每組30只。

1.3藥物干預大鼠于手術后第3天開始干預，鹿銜草低、中、高劑量組分別給鹿銜草顆粒0.125 g/ （kg/d）、0.25 g/（kg/d）、0.50 g/（kg/d），骨疏康組給骨疏康顆粒1.5 g/（kg/d），所有顆粒藥物以2 mL生理鹽水溶解灌服，生理鹽水組、假手術組大鼠每只每日灌服生理鹽水2 mL/只，每日1次。實驗動物在室溫（23±2）℃、濕度70%條件下喂養，自由攝食、飲水、活動。

1.4實驗動物取材卵巢切除組、假手術組于術后4周、8周、12周3個批次取材，用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，檢測大鼠全身骨密度。腹主動脈取血，離心取血清保存待測；取第3腰椎和右側股骨保存待測。

1.5標本檢測用Expert雙能X線骨密度儀（美國Lunar公司）檢測大鼠全身骨密度。用ELisa法檢測血清中雌二醇（E2）、骨鈣素（BGP），試劑盒來自美國R&D公司。制備骨勻漿，Bradford法檢測骨堿性磷酸酶（BALP）含量。HE染色制備骨組織病理切片，用全自動真彩色圖像分析總組織面積（T.Ar）、骨小梁面積 （Tb.Ar），計算骨小梁面積百分率（Tb. Ar%）并進行圖像觀察。

2結果

實驗結果見表1～表5。

3討論

3.1本研究使用的去勢雌性大鼠動物模型，因其在短期內顯著降低雌激素水平，很好的模擬絕經后骨質疏松癥骨代謝的特點，被廣泛用于絕經后骨質疏松癥研究［2］。BGP和BALP作為反映骨形成的特異性指標，已廣泛用于實驗研究。其中BGP是由成熟的成骨細胞合成分泌，其功能主要與骨轉換有關。目前認為，當骨形成與骨吸收偶聯時，BGP可反映骨轉換情況。當骨形成與骨吸收解偶聯時，BGP可特異性地反映骨形成情況［3］。在評價藥物治療骨質疏松癥的療效上，BGP水平上升，提示藥物刺激了骨的形成，BGP水平下降提示藥物減緩了骨的吸收［4］。研究［5-8］顯示BGP的表達在骨質疏松模型中有明顯升高。另外，BALP是堿性磷酸酶（ALP）同工

表1　6組大鼠股骨的骨密度檢測結果（±s）gms/cm2

表1　6組大鼠股骨的骨密度檢測結果（±s）gms/cm2

注：與假手術組比較，1）P＜0.05；與生理鹽水組比較，2）P＜0.05。

組別假手術組生理鹽水組骨疏康組鹿銜草高劑量組鹿銜草中劑量組鹿銜草低劑量組大鼠/只8 9 8 9 9 9手術后4周0.147±0.005 0.148±0.005 0.147±0.007 0.147±0.007 0.149±0.007 0.144±0.005手術后8周0.164±0.011 0.150±0.0031）0.160±0.0072）0.160±0.0052）0.159±0.0082）0.159±0.0052）手術后12周0.166±0.007 0.156±0.0051）0.163±0.0052）0.163±0.0072）0.163±0.0072）0.164±0.0112）

表2　6組大鼠血清E2水平（±s）ng/L

表2　6組大鼠血清E2水平（±s）ng/L

注：與假手術組比較，1）P＜0.05；與生理鹽水組比較，2）P＜0.05。

組別假手術組生理鹽水組骨疏康組鹿銜草高劑量組鹿銜草中劑量組鹿銜草低劑量組大鼠/只8 9 8 9 9 9手術后4周64.26±5.00 39.66±5.351）52.95±6.881）2）52.54±6.031）2）52.89±8.181）2）52.49±9.871）2）手術后8周81.78±3.80 50.10±5.741）71.01±5.691）2）69.26±6.101）2）69.30±7.161）2）69.24±5.231）2）手術后12周80.26±4.39 47.38±6.181）70.38±8.101）2）65.78±5.801）2）66.09±8.781）2）68.73±10.581）2）

表3　6組大鼠血清BGP檢測結果（±s）ng/L

表3　6組大鼠血清BGP檢測結果（±s）ng/L

注：與假手術組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.05。

組別假手術組生理鹽水組骨疏康組鹿銜草高劑量組鹿銜草中劑量組鹿銜草低劑量組大鼠/只8 9 8 9 9 9手術后4周483.00±25.84 572.63±75.021）570.58±36.471）585.81±54.652）619.44±69.992）558.22±76.831）手術后8周784.04±15.27 867.53±59.03 832.10±97.30 812.12±37.55 810.37±69.41 831.62±66.84手術后12周695.20±30.71 834.22±102.852）820.96±58.741）844.82±51.762）776.41±77.42 778.17±88.02

表4　6組大鼠骨小梁面積百分比變化（±s）

表4　6組大鼠骨小梁面積百分比變化（±s）

注：與假手術組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與生理鹽水組比較，3）P＜0.01，4）P＜0.05。

組別假手術組生理鹽水組骨疏康組鹿銜草高劑量組鹿銜草中劑量組鹿銜草低劑量組大鼠/只8 9 8 9 9 9手術后4周0.5746±0.029 0.4687±0.0812）0.5281±0.081 0.5194±0.035 0.5383±0.0383）0.5086±0.0332）手術后8周0.6052±0.023 0.4378±0.0402）0.5010±0.0612）3）0.5154±0.0672）3）0.5078±0.0562）4）0.5298±0.0412）3）手術后12周0.5510±0.023 0.4208±0.0532）0.4790±0.0611）4）0.4843±0.0631）4）0.5089±0.0991）3）0.4793±0.0432）4）

表5　6組大鼠BALP檢測結果（±s）U/gprot

表5　6組大鼠BALP檢測結果（±s）U/gprot

注：與假手術組比較，1）P＜0.05；與生理鹽水組比較，2）P＜0.05。

組別假手術組生理鹽水組骨疏康組鹿銜草高劑量組鹿銜草中劑量組鹿銜草低劑量組大鼠/只8 9 8 9 9 9手術后4周229.14±23.61 240.57±35.18 207.18±15.77 204.16±42.54 204.66±26.56 205.79±38.38手術后8周187.78±20.74 237.84±29.711）259.45±49.201）250.96±48.031）260.22±53.541）251.84±55.111）手術后12周199.35±34.85 238.03±33.641）234.52±34.111）272.29±45.721）2）270.05±33.321）2）263.07±18.971）

酶之一，由成骨細胞分泌，能促進骨的形成。研究表明［9-12］BALP在骨質疏松發病活動期有顯著增高，是成骨細胞活性增加的重要標志，其定量測定和動態觀察可為骨質疏松癥的早期診斷和療效判定提供有效依據。同時發現BALP和BGP在去卵巢大鼠骨質疏松模型中呈顯著表達，與骨質疏松發生程度呈正相關［13］。

3.2研究顯示，雌性大鼠在切除雙側卵巢后，與假手術組比較，生理鹽水組的E2顯著降低，而同期血清BGP水平及BALP活性明顯升高，可能由于卵巢摘除后引起大鼠體內雌性激素減少，對破骨細胞的抑制作用減弱，破骨細胞活性增強，骨吸收亢進，進而出現代償性的骨形成增強［14］。由于骨吸收大于骨形成，引起骨小梁含量降低，導致生理鹽水組骨小梁面積百分比和BMD的下降。各用藥組的E2水平低于同期的假手術組，高于同期的生理鹽水組。表明鹿銜草高中低劑量組能有效的提升機體E2水平。除12周鹿銜草高劑量組外，8周、12周各用藥組血清BGP濃度均高于同期假手術組，低于同期生理鹽水組。8周、12周BALP活性高于同期假手術組，推測鹿銜草中、低劑量組可以降低骨轉化，促進骨形成。鹿銜草高劑量組能更有效提高成骨細胞活性，刺激骨形成。因此，鹿銜草高、中、低各劑量組的骨形成速率大于骨吸收，使得骨小梁面積百分比和BMD的提高。

3.3研究表明鹿銜草治療絕經后骨質疏松癥有良好的療效，其機理是通過促進骨形成，改善骨代謝。

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R285.5

B

1000-338X（2016）03-0012-02

2016-03-29

國家自然科學基金資助課題（81574003），福建省科技廳引導性項目（2015Y0069）

陳翔（1991—），男，2014級中醫骨傷專業碩士研究生，主要從事骨傷基礎研究。

林燕萍（1963—），女，教授。E-mail：lyp66@126.com