吡羅昔康注射液的有關物質及含量分析

陳敬蘇 薛 薇

（錦州市中醫醫院，遼寧 錦州 121000）

?

吡羅昔康注射液的有關物質及含量分析

陳敬蘇 薛 薇

（錦州市中醫醫院，遼寧 錦州 121000）

【摘要】目的 高效液相法測定吡羅昔康注射液含量及有關物質方法。方法 色譜柱：ODS-SP（4.6×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（55∶35）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：338 nm；柱溫：30 ℃。結果 吡羅昔康在7.8～192.9 μg/mL范圍內呈良好線性關系y=66724x-172143（r=0.9999）。回收率：準確度試驗測得高中低三個濃度的總平均回收率為101.01%，精密度試驗RSD為0.11%（n=8）。結論 本法方便、簡單，準確，適于吡羅昔康注射液含量及有關物質的測定。

【關鍵詞】高效液相；吡羅昔康注射液；含量測定；有關物質

吡羅昔康是一種非甾體類抗炎藥物［1］，主要用于類風濕，風濕性關節炎和急性肌肉骨骼疾患等［2］。2010年版中國藥典采用容量法測定吡羅昔康含量［3-8］，但對吡羅昔康注射液的有關物質尚未見報道，故此本文對HPLC法測定吡羅昔康注射液的含量和有關物質進行研究，報道如下。

1 儀器與試藥

XS205型電子天平（瑞士梅特勒公司，精密度：0.01 mg），島津LC-20AT高效液相色譜儀，LabSolution（Lab工作站）。

吡羅昔康對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號201403）；吡羅昔康注射液（浙江尖峰藥業有限公司，規格為2 mL∶20 mg）；甲醇（色譜純），冰乙酸（AR天津市東區紅巖試劑廠），二甲基亞砜（AR天津市科密歐化學試劑有限公司），水（超純水）。

2 方法與結果

2.1色譜條件：色譜柱：ODS-SP（4.6×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（55∶35）；流速：1.0mL/min；檢測波長：338 nm；柱溫：30 ℃，進樣量：20 μL。

2.2干擾試驗：精密稱取吡羅昔康對照品12.19 mg，置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，精密量取儲備液5 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻；另按處方比例同法配制空白輔料溶液，分別測定，可見在該色譜條件下，吡羅昔康能達到基線分離且峰形穩定，試劑及輔料不影響吡羅昔康含量測定。

2.3線性試驗：精密量取儲備液1，5，10，15，20 mL，分別置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，同時取儲備液，分別測定。以吡羅昔康對照品濃度C（μg/mL）為橫坐標，峰面積A為縱坐標繪制標準曲線。線性范圍7.9～132.1 μg/mL，回歸方程為：y=66724x-172143 （r=0.9999，n=6），表明吡羅昔康在進樣濃度7.9～132.1 μg/mL范圍

通過載氣可以把其放入到原子化器中進行檢測。對比以前的檢測方法，因為許多基體沒有辦法進入到原子化器中，無法發揮出降低基體的作用，背景校正是沒有任何效果的。而且，儀器結構不難被設計成同時測定多種元素的模式。目前，這種方法是原子熒光法在生物樣品理化檢驗中應用范圍最廣的一種形式。除此之外，在國家標準、檢驗檢疫行業標準、地方標準中，它都發揮著一定的作用。

內呈良好線性關系。

表1　含量及有關物質測定結果（%，n=3）

2.4精密度試驗：精密量取儲備液10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻后測定；峰面積的RSD為0.23%（n=5）。

2.5穩定性試驗：取精密度試驗項下測試液，在0，2，4，6，12，24 h分別測定，6次測定，峰面積的RSD為0.31%，穩定性良好。

2.6回收率試驗：按處方比例（80%，100%，120%）模擬吡羅昔康注射液，精確配制200 mL，混合均勻，精密量取2 mL置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻后測定，將所得峰面積代入回歸方程計算回收率（每個濃度做三份），結果3種濃度的總平均回收率為101.12%，RSD為0.13%，n=9。

2.7重復性試驗：取一樣品，按回收率項下方法制備測試液，測得平均含量為99.1%，RSD=0.19%（n=3）。

2.8樣品測定

2.8.1含量測定：精密量取吡羅昔康注射液2 mL置100 mL容量瓶中，按回收率項下方法操作，計算含量（n=3）。

2.8.2有關物質的測定。供試品溶液的制備：取本品4 mL，置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取5 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，既得。對照溶液的制備：精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。陰性空白試驗：按處方配制吡羅昔康的陰性空白溶液。專屬性試驗：將本品置不同條件下進行加速破壞，考察破壞后的產物與主藥的色譜分離情況：取吡羅昔康儲備液5 mL，置4500 Lx光強度下10 d后，加甲醇至10 mL；作為光破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲備液10 mL，水浴加熱30 min，放冷后加甲醇至10 mL，作為熱破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲備液5 mL，加入1 mol/L的鹽酸溶液，放置1 h后，加1 mol/L的氫氧化鈉溶液1 mL中和，加甲醇至10 mL，作為酸破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲備液5 mL，加入1 mol/L的氫氧化鈉溶液，放置1 h后，加1 mol/L的鹽酸溶液1 mL中和，加甲醇至10 mL，作為堿破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲備液5 mL，加入10%雙氧水溶液2 mL，水浴30 min后，放冷，加甲醇至10 mL作為氧化破壞樣品溶液。取上述破壞性試驗所得溶液，分別測定，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。

3 結 果

在酸和堿以及熱、光照和氧化條件下均有不同程度的降解，各降解產物峰與主成分峰均能達到較好的分離。光破壞時間越長，有關物質越多，主成分越少；熱破壞生成的有關物質數量多；強氧化劑10%雙氧水可以把吡羅昔康完全氧化為有關物質，其中保留時間為3.802 min的占84.1%。

樣品中吡羅昔康有關物質檢查：取供試品溶液和對照溶液各20 μL，分別測定，記錄供試品溶液的色譜圖至主成分峰保留時間的3倍，以自身對照法計算雜質含量，結果見表1。

4 結 論

本次選擇高效液相色譜法，線性關系良好，精密度好，準確性高，該方法可以用于吡羅昔康的有關物質和含量測定；吡羅昔康注射液有關物質結果表明，易被熱，光，酸，堿，氧化物質破壞，儲存宜密封避光。

參考文獻

［1］ 潘煒，顧鑫榮，劉志璋，等.LC-MS/MS法測定中成藥制劑中23個非甾體抗炎藥［J］.藥物分析雜志，2012，32（2）:261-266.

［2］ 錢麗萍，戴桂蘭，闞慧卿，等.治療類風濕性關節炎外用制劑的研究概況［J］.海峽藥學，2010，22（8）:140-143.

［3］ 國家藥典委員會.中國藥典（二部）［M］.2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:340.

［4］ 姚武輝，王愛華.吡羅昔康透皮控釋貼片治療膝骨關節炎（OA）的療效和安全性［J］.中國醫藥指南，2012，10（23）:91.

［5］ 吳紅英，徐道華，邱棟樑.HPLC法測定吡羅昔康片中吡羅昔康的含量［J］.安徽醫藥，2009，13（11）:1343-1344.

［6］ 李存金，郭飛宇.反相高效液相色譜法測定吡羅昔康膠囊中吡羅昔康含量［J］.中國藥業，2010，19（23）:36-37.

［7］ 林君，王瓊芬，陳才軍.吡羅昔康腸溶片含量及其均勻度測定［J］.醫藥導報，2012，31（5）:668-670.

［8］ 仝桂平，鄭兆顯，劉延娟.吡羅昔康片質量標準中含量均勻度檢測方法修訂探討［J］.中國藥事，2014，28（7）:766-769.

2.2微波消解-原子熒光光譜法：微波消解法主要是指：把特定酸以及樣品一起存放至消解罐之后，蓋好蓋子，并且放置到微波消解儀中，根據特定的程序使得生物樣品溶解。這與過去的消解方法相比，具備如下優勢：①樣品可以被徹底消解掉，并且不易造成易揮發元素的過度損失，回收情況較好；②消化的速度相對較快，空白值不高、沒有元素損失并且沒有污染；③不易造成試劑的浪費，給環境造成的影響比較小。

2.3液相色譜-原子熒光光譜法：這種方法相對復雜，它主要由兩個部分連接組成，即色譜分離系統和光譜檢測系統。所謂色譜分離系統，指的是把待測的元素的多種形態按照停留時間的差異進行排序。換句話說，就是使其達到形態分離。而接口裝置把色譜分離出來之后，其有機態元素能夠通過一系列的轉化反應變成無機態；光譜檢測系統則會將待測的元素轉化成一種光譜信號。在這個過程中，要將保留的時間、光譜波長等，當作定性的參考資料，光強度峰高、峰面積則是用來作為定量的依據。這種方法的優點是，能夠使得元素的形態分析更加準確，缺點是其儀器的組成部位過于復雜，應用范圍相對狹窄。

3 展 望

使用熒光法檢測生物樣品，儀器方便操作，并且它的性能相對較好，價格比較便宜等，現已經被廣泛地應用到生物樣品檢測標準中來。調查發現，當下的熒光檢測研究方向集中表現為：①參照不同的基質、目標化合物，選擇最為合理的提取方式以及凈化方法。比如固相萃取小柱凈化等；②依據研發反應活性高、量子產量大等特點，使得檢測領域得以擴寬；③研究熒光檢測器，與別的分離裝置之間的聯用接口技術。最近幾年，由于電學的不斷進步，原子熒光法也得到了一定層次的發展。在目前出現的新型光源中，如激光、發光二極管等，使得光強度不斷提升；小型化乃至微型化成為主要發展趨勢；在聯用技術方面，都得到了不同層次的發展。

［1］ 陳殿耿，袁玉霞，王皓瑩.氫化物發生-原子熒光光譜法（HG-AFS）測定特硬鉛合金中硒和碲［J］.中國無機分析化學，2012，2（2）:38-40.

［2］ 倪通文，范寧云，王寧，等.火焰-原子熒光法與石墨爐原子吸收法測定化探樣品和礦石中金的對比研究［J］.黃金，2012，33（5）:57-59.

［3］ 章連香，馮先進，屈太原.蒸氣發生-原子熒光光譜技術的應用進展［J］.礦冶，2012，21（1）:87-90.

［4］ 馬建學，路學東，許卓.化學蒸氣發生-無色散原子熒光光譜法測定地質樣品中微量和痕量金［J］.巖礦測試，2011，30（3）:343.

［5］ 劉德林，高樹林，黃煉.火焰-原子熒光光譜法測定微量金的研究［J］.黃金，2011，32（6）:53-56.

中圖分類號：R9

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）04-0046-02