埃索美拉唑鈉中間體清潔驗(yàn)證殘留限度檢查方法學(xué)研究

劉　靜　劉秀朋（德州德藥制藥有限公司　德州　253000）

藥品質(zhì)量及檢驗(yàn)

埃索美拉唑鈉中間體清潔驗(yàn)證殘留限度檢查方法學(xué)研究

劉靜劉秀朋（德州德藥制藥有限公司德州253000）

目的：埃索美拉唑鈉合成中間體清潔驗(yàn)證殘留限度檢查方法學(xué)研究。方法：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，4.6mm× 150mm，5μm；以乙腈-磷酸鹽緩沖液（pH7.6）（50∶50）為流動(dòng)相；流速1.0mL·min-1；檢測波長302nm；進(jìn)樣量10μL。結(jié)果：中間體的線性范圍為0.06μg·mL-1～1.5μg·mL-1；定量限和檢出限分別為0.24ng和0.08ng；平均回收率為89.29%，RSD為1.8%。結(jié)論：本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、精密度高、回收率好，可用于中間體的清潔驗(yàn)證。

中間體 清潔驗(yàn)證 方法學(xué)研究

為防止原料藥生產(chǎn)過程中物料之間的交叉污染，驗(yàn)證按清洗程序清洗后，檢測化學(xué)殘留量是否在規(guī)定限度內(nèi)，以確認(rèn)清洗效果是否達(dá)到不影響產(chǎn)品質(zhì)量要求，防止可能發(fā)生的改變藥品質(zhì)量、使其安全性、純度達(dá)不到規(guī)定要求的事故或污染。

中間體（硫醚）制備中清潔限度的制定，由于中間體沒有日治療量的安全性數(shù)據(jù)，基于對其毒性數(shù)據(jù)的評估，按照《藥品GMP指南-原料藥》（2011年版）的有關(guān)規(guī)定，按十萬分之一（10ppm）作為可接受標(biāo)準(zhǔn)。

設(shè)清潔后產(chǎn)品的生產(chǎn)批量為B（Kg），因殘留物濃度最高為10×10-6，即10mg/kg，則殘留物總量最大為10B（mg），設(shè)備總內(nèi)表面積為SA（cm2），則設(shè)備內(nèi)表面殘留物允許限度按下式計(jì)算

式中：L為內(nèi)表面殘留物允許限度（mg/100cm2）；B為清潔后產(chǎn)品的生產(chǎn)批量（kg）；SA為設(shè)備的總內(nèi)表面積（cm2）。

以埃索美拉唑鈉合成為例計(jì)算清潔驗(yàn)證中中間體的允許殘留量。

1儀器與試藥

1.1儀器：日本島津LC-10ATvp高效液相色譜儀；紫外檢測器SPD-10Avp；PHS-3C酸度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；AL104電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

1.2試藥：中間體對照品（合肥拓銳生物科技有限公司，批號20130319），中間體（德州德藥制藥有限公司，批號11140601、11140602、11140603），乙腈（Merk，批號1726330 406），磷酸二氫鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號20140320），磷酸氫二鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號20140221）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱為 Agilent ZORBAX SB-C18，4.6mm× 150mm，5μm，以乙腈-磷酸鹽緩沖液［pH7.6（0.0052mol/L磷酸二氫鈉和0.032mol/L磷酸氫二鈉）］（50∶50）為流動(dòng)相，流速為1.0mL·min-1，檢測波長為302nm，進(jìn)樣量為10μL，溶劑為流動(dòng)相。

2.2專屬性試驗(yàn)：精密量取空白溶劑及空白溶劑酸、堿、高溫、氧化、光照破壞溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明空白溶劑及空白溶劑破壞試驗(yàn)不干擾主成分的測定。各強(qiáng)制降解條件下，主峰與各降解產(chǎn)物峰間均分離良好，證明專屬性良好。

2.3線性試驗(yàn)：精密稱取本品對照品適量，置10mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，再定量稀釋制成0.06μg·mL-1、0.3μg·mL-1、0.6μg·mL-1、0.9μg·mL-1、1.5μg·mL-1的系列溶液。精密量取上述溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程為y=35247x-655.76，r=0.9999，結(jié)果表明中間體在測定濃度范圍內(nèi)（0.06μg·mL-1～1.5μg·mL-1）與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4重復(fù)性試驗(yàn)：取線性試驗(yàn)中0.6μg·mL-1的溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD值為0.2%。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.5定量限、檢出限試驗(yàn)：取線性試驗(yàn)中0.06μg·mL-1溶液，用溶劑逐步稀釋，定量限按信噪比約為10∶1計(jì)算為0.24ng，檢出限按信噪比約為3∶1計(jì)算為0.075ng。

2.6回收率試驗(yàn)：供試品溶液制備：取本品約30mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成約30μg· mL-1的溶液，取1mL6份，均勻涂于6個(gè)10cm×10cm不銹鋼板表面，40℃干燥，冷卻至室溫。用一支蘸有無水乙醇的棉簽平穩(wěn)而緩慢地水平擦拭涂抹藥液的不銹鋼板表面（100cm2），擦拭過程應(yīng)覆蓋整個(gè)表面，另取一支同樣蘸有無水乙醇的棉簽與前次擦拭方向垂直進(jìn)行擦拭同一不銹鋼板面。將擦拭取樣的棉簽置于100mL的三角瓶中，用溶劑三次轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，并用溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液，平行制備6個(gè)供試品進(jìn)行測定。

對照品溶液制備：取本品對照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成0.6μg·mL-1的溶液，搖勻，作為對照品溶液。

精密量取上述溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按測得量與加入量的比值計(jì)算回收率，每塊板的取樣回收率應(yīng)大于75%。結(jié)果如表1。結(jié)果表明此方法測定本品的清潔度準(zhǔn)確、可靠。

表1回收率測定結(jié)果

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：取本品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成1.0mg·mL-1溶液，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液于室溫下放置，分別于0h、5h、8h、24h、28h、34h、37h處精密量取各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果顯示：供試品溶液室溫放置37h內(nèi)雜質(zhì)含量變化不大，未出現(xiàn)新雜質(zhì)，樣品溶液在室溫37h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8精密度試驗(yàn)：供試品溶液的制備：取本品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成1.0mg·mL-1溶液，搖勻，即得。兩組不同分析人員分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，各制備6份。

精密量取上述溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果：12份供試品溶液中，最大單個(gè)雜質(zhì)、總雜含量的RSD均小于20%，精密度良好。

2.9耐用性試驗(yàn)：分別考察流速為（1.0±0.2）mL·min-1、波長為（302±）5nm、柱溫為（25±5）℃條件下的耐用性。

供試品溶液的制備：取本品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成1.0mg·mL-1溶液，搖勻，即得。

精密量取上述溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果：經(jīng)驗(yàn)證，色譜條件微小變化后，供試品溶液主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于2.5，符合要求，樣品的檢測結(jié)果仍符合要求，說明本方法耐用性良好。

2.10清潔驗(yàn)證結(jié)果

表2清潔驗(yàn)證結(jié)果

3討論

經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、精密度高、回收率好，可用于中間體的清潔驗(yàn)證。

The methodology of cleaning validation for Esomeprazole sodium mediate limite determination

Liu Jing Liu Xiupeng（Dezhou Deyao Pharmaceutical Co.，Ltd，Dezhou 25300，China）

Objective：the methodology of cleaning validation for esomeprazole sodium mediate limite determination.Methods：The ostadecylsilane column（Agilent ZORBAX SB-C18，4.6mm×150mm，5μm）was used，the mobile phase was acetonitrile-phosphate buffered solution（pH 7.6）（50∶50），theflow ratewas 1.0mL·min-1，the detection wavelength was 302nm，the injection volume was 10μL. Results：The linear range for intermediate was 0.06μg·mL-1～1.5μg·mL-1.The limit of quantitation and the detection limit were 0.24ng and 0.08ng.The average recovery rate was 89.29%with RSD1.8%.Conclusion：This is a convenient，rapid，accurate，high precision and good recovery method，which can be used for the cleaning validation of intermediate

Intermediate Cleaning validation Methodology study

R927.2

A

1672-8351（2016）08-0001-02