丁酸鈉對嚴(yán)重燙傷后大鼠肝臟血流量及水腫的影響*

唐富波，何波，張文華，李雨夢，李靜遠(yuǎn)，胡森

（1.解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院 全軍創(chuàng)傷修復(fù)與組織再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨皮膚損傷修復(fù)與組織再生北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100048；2.武警總醫(yī)院 腫瘤科，北京 100039）

丁酸鈉對嚴(yán)重燙傷后大鼠肝臟血流量及水腫的影響*

唐富波1，何波2，張文華1，李雨夢1，李靜遠(yuǎn)1，胡森1

（1.解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院 全軍創(chuàng)傷修復(fù)與組織再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨皮膚損傷修復(fù)與組織再生北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100048；2.武警總醫(yī)院 腫瘤科，北京 100039）

目的研究丁酸鈉對嚴(yán)重燙傷后大鼠肝臟血流量及水腫的影響。方法雄性SD大鼠48只，體重（250±10）g，隨機(jī)分為正常組、燙傷+生理鹽水組（對照組）和燙傷+丁酸鈉組（丁酸鈉組）。對照組和丁酸鈉組采用沸水燙傷背部15 s、腹部8 s，造成50%總體表面積（TBSA）Ⅲ度燙傷，燙傷后立即腹腔注射丁酸鈉（400 m g/kg）或等體積生理鹽水治療，正常組腹腔注射丁酸鈉（400 m g/kg）。燙傷后3和6 h采用激光多普勒血流儀測定肝臟血流量；心臟穿刺取血檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）；取肝臟組織檢測組織含水率及肝臟微血管通透性。結(jié)果燙傷后3和6 h，與正常組比較，對照組肝臟血流量均顯著減少，微血管通透性、含水率、血漿ALT均明顯升高；燙傷后3和6 h，與對照組比較，丁酸鈉組微血管通透性、肝臟含水率、血漿ALT均明顯降低，血流量均顯著增加。結(jié)論丁酸鈉減輕嚴(yán)重燙傷后肝臟水腫，增加肝臟血流量，對肝臟功能具有一定的保護(hù)作用。

丁酸鈉；燙傷；肝臟；水腫；谷丙轉(zhuǎn)氨酶

嚴(yán)重?zé)齻?，全身循環(huán)血量重新分布，肝臟血流灌注急劇下降，造成肝臟功能損傷。全身炎癥因子及燒傷毒素等刺激肝臟，導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)一步破壞，不利于燒傷救治及患者的后期臟器功能恢復(fù)。因此，減輕肝臟損傷，保護(hù)燒傷后肝臟功能，對于燒傷的救治尤為重要。組蛋白去乙?；敢种苿╤i st one deacet yl ase i nhi bi t ors，H DACIs）是近年來缺氧和休克后保護(hù)藥物的研究熱點(diǎn)，H DACIs能夠提高機(jī)體抵抗炎癥、缺氧等的能力，保護(hù)休克動物模型臟器功能，延長動物存活時(shí)間［1-5］。丁酸鈉是一種組蛋白去乙?；敢种苿禺愋砸种平M蛋白去乙?；?（hi st one deacet yl ase6，H DAC6），本研究的目的是利用嚴(yán)重燙傷大鼠模型觀察丁酸鈉對肝臟血流量及水腫的影響。

1　材料與方法

1.1動物模型及分組

清潔級雄性SD大鼠48只（北京華阜康生物科技股份有限公司），60～70日齡，體重（250±10）g，適應(yīng)性飼養(yǎng)2周，自由飲食飲水，實(shí)驗(yàn)前12 h禁食。隨機(jī)分為正常組、燙傷+生理鹽水組（對照組）、燙傷+丁酸鈉組（丁酸鈉組），每組16只大鼠。使用戊巴比妥鈉注射液（50 m g/kg）腹腔注射麻醉后，大鼠行頸、背、腹部備皮。燙傷前予頸靜脈置管，丁酸鈉組和對照組分別采用沸水燙傷背部15 s、腹部8 s，造成50%總體表面積（t ot al body surf ace area，TBSA）Ⅲ度燙傷，傷后立即腹腔注射丁酸鈉（400 m g/kg，美國Si gm a公司）或等體積生理鹽水。正常組腹腔注射丁酸鈉（400 m g/kg）。以燙傷后3和6 h作為觀察點(diǎn)，每個觀察點(diǎn)含8只大鼠。

1.2指標(biāo)檢測及方法

1.2.1肝臟血流量采用激光多普勒血流儀（瑞典Peri m ed公司）檢測肝臟的血流量，沿大鼠腹白線無菌操作開腹，暴露肝臟。紅外探頭的中心移至肝臟右葉中心處，自動監(jiān)測血流量，時(shí)間約45 s，儀器自動輸出血流量平均值。血流灌注單位為BPU，BPU表示數(shù)碼信號。

1.2.2肝臟微血管通透性采用伊文思蘭（Evans bl ue，EB）法檢測肝臟微血管通透性。選取燙傷后3和6h作為觀察點(diǎn)，在觀察點(diǎn)前30m i n經(jīng)頸靜脈注入EB（20 m g/kg，20 m g/ml），在30 m i n后行全身灌洗至灌洗液清亮為止，灌洗時(shí)間控制在3 m i n以內(nèi)。取適量肝臟組織，稱重后置于2 m l二甲基甲酰胺試管中，加蓋橡皮塞，置于37℃恒溫箱中水浴24 h。1 500×g離心30 m i n，取上清液待測。紫外分光光度計(jì)于波長620 nm處測得吸光度值。根據(jù)EB標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)EB含量。EB含量用于評價(jià)肝臟微血管通透性的變化。

1.2.3肝臟組織含水率采用干濕重法檢測肝臟組織含水率變化。取適量肝臟組織，濾紙將其表面血液及滲出物吸干，迅速將其放置于電子天平準(zhǔn)確稱重，將肝臟組織放入電烤箱中80℃烘烤72 h，稱重烘干后的組織并記錄數(shù)值。肝臟組織含水率=（烘干前質(zhì)量-烘干后質(zhì)量）/烘干前質(zhì)量×100%。

1.2.4谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性心臟穿刺獲取血液樣本，離心得血漿，應(yīng)用全自動生化分析儀檢測血丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（al ani ne am i not ransf erase，ALT）水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，檢測各項(xiàng)指標(biāo)所得的結(jié)果均使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用多組間比較的方差分析及組間兩兩比較的SNK法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1丁酸鈉對嚴(yán)重燙傷大鼠肝臟血流量的影響

燙傷后3 h，對照組、丁酸鈉組肝臟血流量與正常組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對=10.677，P對=0.000；t丁=8.795，P丁=0.000），對照組和丁酸組均低于正常組，丁酸鈉組高于對照組（t=3.533，P= 0.004）。燙傷6 h后，對照組、丁酸鈉組肝臟血流量與正常組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對= 15.336，P對=0.000；t丁=11.116，P丁=0.000），對照組和丁酸鈉組均低于正常組，丁酸鈉組高于對照組（t= 5.431，P=0.000）。見表1、2。

2.2丁酸鈉對嚴(yán)重燙傷大鼠肝臟微血管通透性的影響

燙傷后由血管內(nèi)滲透到組織中的EB含量用以表示肝臟微血管通透性的變化。燙傷后3 h，對照組、丁酸鈉組肝臟微血管通透性與正常組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對=41.246，P對=0.000；t丁= 19.150，P丁=0.000），對照組和丁酸鈉組均高于正常組，丁酸鈉組低于對照組（t=22.685，P=0.000）。燙傷6 h后，對照組、丁酸鈉組肝臟微血管通透性與正常組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對=46.977，P對= 0.000；t丁=25.989，P丁=0.000），對照組和丁酸鈉組均高于正常組，丁酸鈉組低于對照組（t=21.649，P= 0.000）。見表1、2。

表1　各組大鼠燙傷3 h后指標(biāo)變化 （±s）

表1　各組大鼠燙傷3 h后指標(biāo)變化 （±s）

注：1）與正常組比較，P＜0.05；2）與對照組比較，P＜0.05

組別A L T/ （u / L）正常組　1 3 8 . 7 9 ± 1 6 . 5 4 　3 0 . 6 7 ± 1 . 5 4 　6 6 . 8 8 ± 1 . 2 1 　4 1 . 3 5 ± 5 . 2 1對照組　5 6 . 4 3 ± 1 4 . 2 31）　6 4 . 1 2 ± 1 . 7 01）　8 2 . 1 1 ± 1 . 7 61）　9 1 . 3 3 ± 6 . 6 71）丁酸鈉組　7 8 . 3 2 ± 1 0 . 2 32）　4 5 . 5 6 ± 1 . 5 72）　7 2 . 2 1 ± 1 . 7 92）　7 5 . 2 1 ± 6 . 6 52）血流量/ B P U通透性/ （μ g / m l）含水率/ %

表2　各組大鼠燙傷6 h后指標(biāo)變化 （±s）

表2　各組大鼠燙傷6 h后指標(biāo)變化 （±s）

注：1）與正常組比較，P＜0.05；2）與對照組比較，P＜0.05

A L T/ （u / L）正常組　1 4 0 . 3 2 ± 1 5 . 5 6 　3 1 . 3 4 ± 1 . 7 1 　6 7 . 2 6 ± 1 . 4 3 　4 2 . 2 6 ± 4 . 7 3對照組　3 2 . 3 4 ± 1 2 . 4 31）　6 9 . 4 5 ± 1 . 5 31）　8 8 . 7 1 ± 1 . 7 11）　1 1 7 . 3 1 ± 6 . 6 71）丁酸鈉組　6 4 . 6 5 ± 1 1 . 3 42）　5 2 . 6 7 ± 1 . 5 72）　7 8 . 9 3 ± 1 . 5 92）　9 5 . 3 3 ± 6 . 3 22）組別血流量/ B P U通透性/ （μ g / m l）含水率/ %

2.3丁酸鈉對嚴(yán)重燙傷大鼠肝臟組織含水率的影響

燙傷后3 h，對照組、丁酸鈉組肝臟含水率與正常組比較，采用t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對= 20.169，P對=0.000；t丁=6.978，P丁=0.000），對照組和丁酸鈉組均高于正常組，丁酸鈉組低于對照組（t= 11.155，P=0.000）。燙傷6 h后，對照組、丁酸鈉組肝臟含水率與正常組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對=27.217，P對=0.000；t丁=15.435，P丁=0.000），對照組和丁酸鈉組均高于正常組，丁酸鈉組低于對照組（t=11.847，P=0.000）。見表1、2。

2.4丁酸鈉對嚴(yán)重燙傷大鼠血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶的影響

燙傷后3 h，對照組、丁酸鈉組血漿ALT與正常組比較，采用t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對=16.703，P對=0.000；t丁=11.337，P丁=0.000），對照組和丁酸鈉組均高于正常組，丁酸鈉組低于對照組（t=4.841，P= 0.000）。燙傷6 h后，對照組、丁酸鈉組血漿ALT與正常組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t對=25.960，P對=0.000；t丁=19.015，P丁=0.000），對照組和丁酸鈉組均高于正常組，丁酸鈉組低于對照組（t=6.766，P= 0.000）。見表1、2。

3　討論

嚴(yán)重?zé)齻C傷及戰(zhàn)創(chuàng)傷等可以引起低血容量性休克，從而導(dǎo)致重要臟器的缺血缺氧、細(xì)胞正常代謝功能受損，極易造成傷員死亡。目前，及時(shí)有效的靜脈補(bǔ)液是嚴(yán)重?zé)齻?、燙傷、戰(zhàn)創(chuàng)傷等的重要急救措施［6-7］。然而，當(dāng)遭遇地震、洪災(zāi)、海嘯或大范圍爆炸傷等緊急救援時(shí)，由于醫(yī)療資源匱乏、條件有限及傷員眾多等不可抗拒原因，安全及時(shí)的靜脈補(bǔ)液難以實(shí)施，造成搶救的困難和傷員死亡率的升高。因此，進(jìn)一步研究在無靜脈補(bǔ)液條件下的急救技術(shù)，對嚴(yán)重戰(zhàn)創(chuàng)傷、燒燙傷等的救治具有重要意義［7-8］。

目前無靜脈補(bǔ)液條件下，胃腸道或骨髓腔補(bǔ)液、抗休克褲以及生命維持和細(xì)胞保護(hù)藥物的應(yīng)用，對抗休克急救都具有良好的效果。前期實(shí)驗(yàn)證明，對于40%TBSA以下嚴(yán)重?zé)隣C傷，口服補(bǔ)液可以提高血容量、改善臟器灌注、減輕臟器損傷及提高生存率［9-10］。但是，對于40%TBSA以上重度燒燙傷，因胃腸道缺血缺氧損傷等，嚴(yán)重影響口服補(bǔ)液的療效［11］。因此，研究在無靜脈輸液條件下生命維持和細(xì)胞保護(hù)藥物對于嚴(yán)重戰(zhàn)創(chuàng)傷、燒燙傷休克的急救具有重要意義。

H DACIs是近年來缺氧和休克后保護(hù)藥物的研究熱點(diǎn)，H DACIs通過提高機(jī)體細(xì)胞的抗缺氧及抗炎等能力，有效保護(hù)各臟器功能。以往的研究表明，H DACIs類藥物應(yīng)用于失血性休克［12］、膿毒癥休克［13-14］和嚴(yán)重燙傷［15-17］動物模型中，可以保護(hù)機(jī)體抗炎和抗休克能力，提高動物生存率。丁酸鈉是一種組蛋白去乙?；敢种苿?，近年來實(shí)驗(yàn)研究表明，丁酸鈉可以抑制嚴(yán)重燙傷后中性粒細(xì)胞浸潤和炎癥反應(yīng)，減輕肺損傷，保護(hù)肺的生理功能［18］；丁酸鈉也可以抑制炎癥介質(zhì)在心肌缺血/再灌注（I/R）模型中的表達(dá)，減輕心肌缺血/再灌注損傷［19］；W ang等［20］的實(shí)驗(yàn)表明，丁酸鈉具有促進(jìn)緊密連接蛋白Cl audi n-1轉(zhuǎn)錄的作用，從而保護(hù)腸屏障；H an［21］等制作小鼠腹膜炎模型證明，丁酸鈉治療后可以減輕腸道損傷，對盲腸以上的近端消化道具有保護(hù)作用。

肝臟是人體最大、最重要的實(shí)質(zhì)性器官，具有分泌、代謝、解毒和屏障等重要功能。嚴(yán)重?zé)隣C傷后，全身血流灌注不足及各種炎癥介質(zhì)的釋放等，使肝臟的正常生理功能損傷，進(jìn)而加劇機(jī)體高代謝狀態(tài)，引起蛋白質(zhì)大量分解，尿氮排出增加，機(jī)體表現(xiàn)出負(fù)氮平衡和低蛋白血癥，進(jìn)一步呈現(xiàn)免疫功能下降和營養(yǎng)不良等表現(xiàn)，甚至多臟器功能衰竭或者死亡［22］。因此，減少嚴(yán)重?zé)隣C傷后肝臟損傷，促進(jìn)肝臟恢復(fù)正常分泌、代謝、解毒及屏障等功能，對于傷員急救十分重要。

大鼠嚴(yán)重燙傷后，肝臟血流量明顯降低，灌注不足，肝臟含水率、微血管通透性迅速升高，肝臟功能受損。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，嚴(yán)重燙傷大鼠經(jīng)過丁酸鈉治療后，肝臟血流量明顯回升，肝臟含水率和微血管通透性顯著下降，水腫減輕，血ALT水平明顯降低，肝臟功能得到一定的保護(hù)。說明丁酸鈉能增加嚴(yán)重燙傷大鼠肝臟血流量，減輕肝臟水腫，對嚴(yán)重燙傷大鼠的肝臟功能具有一定的保護(hù)作用。

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（申海菊編輯）

Effects of sodium butyrate on hepatic blood flow and tissue edema in rats with severe empyrosis*

Fu-bo Tang1，Bo He2，Wen-hua Zhang1，Yu-meng Li1，Jing-yuan Li1，Sen Hu1
（1.Laboratory of Shock and Organ Dysfunction，Burns Institute，the First Affiliated Hospital of PLA General Hospital，Beijing 100048，China；2.Department of Oncology，General Hospital of the Chinese People's Armed Police Forces，Beijing 100039，China）

Objective To investigate the effects of sodium butyrate（BTR）on hepatic blood flow（HBF）and tissue edema in rats following severe empyrosis.Methods Forty-eight male SD rats，weighting（250±10）g，were randomly divided into three groups:normal+BTR（NB）group，empyrosis+normal saline（EN）group and empyrosis+BTR（EB）group.The rats in the EN and EB groups were subjected to 50%TBSA third-degree burns by immersing the back in boiling water for 15 seconds and the abdomen for 8 seconds，and then BTR （400 mg/kg）or normal saline was intraperitoneally injected，respectively.The NB group was intraperitoneally injected with BTR（400 mg/kg）.Hepatic blood flow was measured by laser Doppler 3 and 6 hours after injury. Meanwhile，blood was drawn from the heart for measurement of plasma alanine aminotransferase（ALT）.The tissue samples of liver were harvested for the measurement of microvascular permeability and tissue water content.Results The plasma level of ALT，the tissue water content and the microvascular permeability of liver significantly increased while the HBF level significantly decreased in the EN group compared with the NB group at 3 and 6 hours after injury.Compared with the EN group，the plasma level of ALT，the microvascular permeability and the tissue water content in the EB group were significantly lowered at 3 and 6 hours after empyrosis.In addition，BTR treatment significantly increased the HBF level following empyrosis both at3 and 6 hours after empyrosis.Conclusions The results indicated that sodium butyrate has significantly protective effects on liver in rats with severe empyrosis by alleviating hepatic edema and increasing blood flow to liver.

sodium butyrate；empyrosis；liver；tissue edema；ALT

R 644

A

1005-8982（2016）05-0007-04

10.3969/j.i s s n.1005-8982.2016.05.002

2015-10-21
*

國家自然科學(xué)基金（No：81471872）

胡森，E-m ai l：bs0425@163.com；Tel：010-66867395