基質金屬蛋白酶-2和E-鈣黏蛋白在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

田峰，方瑞忠，徐建（山東省臨沂市沂水中心醫院，山東 臨沂 276000）

基質金屬蛋白酶-2和E-鈣黏蛋白在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

田峰，方瑞忠，徐建
（山東省臨沂市沂水中心醫院，山東 臨沂 276000）

目的研究基質金屬蛋白酶-2（MMP-2）及E-鈣黏蛋白（E-cad）在胰腺癌組織中的表達及臨床意義。方法選取2011年6月-2013年6月該院收集的手術石蠟標本89例，其中正常胰腺組織標本34例，胰腺癌組織標本55例，采用免疫組織化學法檢測MMP-2及E-cad的表達。結果胰腺癌組織MMP-2陽性率為52.7%，正常組織MMP-2陽性率為2.9%，差異有統計學意義（P＜0.05），胰腺癌組織MMP-2陽性率高于正常組織。胰腺癌組織E-cad陽性率為32.7%，正常組織MMP-2陽性率為100.0%，差異有統計學意義（P＜0.05），胰腺癌組織E-cad陽性率低于正常組織。MMP-2及E-cad的表達與臨床分期、組織學分化、是否有淋巴結轉移及腫瘤直徑有關（P＜0.05），而與患者性別、年齡及腫瘤部位無關（P＞0.05）。MMP-2及E-cad蛋白表達陽性2例，陰性10例，兩者表達呈負相關（r=-0.673，P=0.027）。結論MMP-2表達上調和E-cad表達下調與胰腺癌的發生、發展、轉移關系密切。臨床上可通過檢測MMP-2和E-cad表達對胰腺癌的發展和轉移進行預測和評估。

胰腺癌；基質金屬蛋白酶-2；E-鈣黏蛋白；免疫組織化學法

胰腺癌為臨床常見消化道惡性腫瘤。近年來研究表明，胰腺癌發病率有逐年上升趨勢，2008年不發達地區發病率為2.1/100 000，而發達地區發病率高達5.2/100 000［1］。胰腺癌為高度惡性腫瘤，且臨床癥狀隱蔽，若不進行全面診斷將難以發現和治療。因此胰腺癌患者早期即可出現浸潤和轉移，直接侵犯血管神經，嚴重影響患者預后。因此，研究胰腺癌浸潤、轉移的分子機制和有效的臨床診斷方法具有重要意義［2］?；|金屬蛋白酶-2（matrix metalloprotenase protein-2，MMP-2），可降解胞外基質，協助癌細胞轉移［3］。E-鈣黏蛋白（E-cadherin protein，E-cad）為一種跨膜糖蛋白，可維持細胞間的連接作用［4］。目前，MMP-2和E-cad的研究主要集中于胃癌、乳腺癌等，在胰腺癌的研究中鮮有報道。本文研究MMP-2和E-cad在胰腺癌中的表達，目的為探討這兩種蛋白在胰腺癌發生、發展及轉移中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取2011年6月-2013年6月本院收集的手術石蠟標本89例，其中正常胰腺組織標本34例，胰腺癌組織標本55例，所有患者有詳細的臨床病理資料，術前未接受任何放療及化療。正常胰腺組織標本為外傷性胰腺部分切除。其中男性20例，女性14例；年齡36～73歲，平均（64.1±1.2）歲。胰腺癌組織中男性36例，女性19例；年齡36～74歲，平均（64.8±1.4）歲；胰腺頭部腫瘤39例，胰腺尾部腫瘤16例；TNM臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期32例，Ⅲ、Ⅳ期23例；組織學分化：G115例，G232例，G38例；淋巴結轉移患者24例，無淋巴結轉移患者31例；腫瘤直徑≤3 cm 38例，腫瘤直徑＞3 cm 17例。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2材料與試劑

兔抗人MMP-2單克隆抗體和兔抗人E-cad單克隆抗體購自美國Satta Cruz公司，二氨基聯苯胺（Diaminobenzidine，DAB）染色試劑盒和辣根過氧化物酶標記二抗購自武漢博士德公司，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法（streptavidin-perosidase，SP）免疫組織化學法試劑盒購自北京中杉生物工程公司。

1.3研究方法

將石蠟標本切片，進行蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，最后采用鏈霉親和素 -生物素復合物（strept avidin-biotin complex，SABC）法進行免疫組織化學法染色。石蠟切片脫蠟，3%雙氧水H2O2室溫下孵育10 min以消除內源性過氧化物酶活性。修復抗體并磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffer saline，PBS）沖洗。5～10%山羊血清封閉，室溫孵育20～30 min。加入一抗，4℃過夜。PBS沖洗，加入辣根過氧化物酶標記二抗，37℃孵育10～30 min，PBS緩沖液沖洗。加入SABC，37℃孵育10～30 min。加DAB，復染、脫水、封片。

1.4判定標準

切片制作完成后先觀察整體染色，然后在400倍鏡下隨機選取3～5個視野，固定窗口面積并用細胞計數軟件計數。MMP-2陽性著色主要以細胞質為主，呈棕色或黃色顆粒。E-cad陽性著色主要以細胞膜為主，也呈棕色或黃色顆粒。細胞顯色計分：細胞無顯色為0分；細胞呈淺黃色為1分；細胞呈棕黃色為2分；細胞呈棕褐色為3分；陽性細胞比例計分：無陽性細胞為0分；細胞陽性＜25%為1分；細胞陽性率在25～50%為2分；細胞陽性率＞50%為3分。將上述兩項計分相加，其中總分＜3分為陰性，總分≥3分為陽性。

1.5統計學方法

采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析，計數資料用χ2檢驗，相關性檢驗用Spearman分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1MMP-2及E-cad蛋白在組織標本中表達

胰腺癌組織MMP-2陽性率為52.7%，正常胰腺組織MMP-2陽性率為2.9%，差異有統計學意義（χ2=5.363，P=0.021），胰腺癌組織MMP-2陽性率高于正常胰腺組織。胰腺癌組織E-cad陽性率為32.7%，正常胰腺組織E-cad陽性率為100.0%，差異有統計學意義（χ2=39.148，P=0.000），胰腺癌組織E-cad陽性率低于正常胰腺組織。見附圖和表1。

2.2MMP-2及E-cad表達與胰腺癌臨床病理因素的相關性

MMP-2及E-cad的表達與臨床分期、組織學分化、是否有淋巴結轉移及腫瘤直徑有關（P＜0.05），與患者性別、年齡及腫瘤部位無關（P＞0.05）。見表2。

2.3MMP-2和E-cad蛋白在胰腺癌組織中表達的相關性分析

MMP-2及E-cad蛋白表達為陽性2例，陰性

10例，兩者表達呈負相關（r=-0.673，P=0.027）。見表3。

附圖　MMP-2及E-cad蛋白表達 （×400）

表1 兩組MMP-2、E-cad蛋白表達比較

表3　MMP-2和E-cad蛋白在胰腺癌組織中表達的相關性例

3　討論

胰腺為人體重要器官，位于機體上腹部腹膜后間隙，可分為外分泌腺和內分泌腺。由于胰腺位于機體較深位置，且供血較差，因此容易出現病變，病變后也不易發現和治療。胰腺癌為胰腺常見腫瘤，多起源于腺管上皮，半數以上位于胰頭。胰腺癌患者生存率較低，即便進行放、化療和手術治療，達5年生存率僅為6%，且多數患者在確診時，胰腺腫瘤已轉移，已無法通過手術治療及放、化療進一步延長生命［5-6］。由于胰腺位置原因，胰腺癌診斷難度較大，多數患者在確診時已是癌癥晚期，無法進行有效治療。即便患者通過治療，暫時抑制癌癥發展，其復發率也較高。目前行之有效的延長胰腺癌患者生命的方法為早診斷、早治療，故有必要發現新的有效的腫瘤標志物來提高胰腺癌的診斷率［7-8］。

基質金屬蛋白酶為一種重要蛋白水解酶，屬于鋅肽酶超家族，可降解細胞外基質所有成分［9-10］。研究表明，MMP蛋白的增多，可大量降解細胞外基質，導致細胞外機制穩定性下降，從而使細胞間的黏附和連接作用減弱，細胞的轉移能力提高［11］。在MMP家族中，MMP-2蛋白與腫瘤關系較密切，在腫瘤的轉移中發揮重要作用。研究發現，MMP-2蛋白在其他惡性腫瘤中有過量分泌的趨勢，該蛋白可降解細胞質基質中層黏蛋白、膠原蛋白等，在細胞連接中發揮重要作用，但細胞間黏附作用減弱，導致腫瘤轉移［11］。研究表明，在人體膀胱癌、乳腺癌中MMP-2蛋白均表達上調，而且與腫瘤的進展、轉移及患者的預后關系密切，可以作為腫瘤進展標志物［11］。但關于胰腺癌中MMP-2的研究鮮有報道。本文對MMP-2蛋白在胰腺癌組織中的表達做相關研究，對胰腺癌組織及正常胰腺組織中的MMP-2表達做免疫組織化學法檢測，結果發現，胰腺癌組織中MMP-2的陽性表達率高達52.7%，高于正常組織的2.9%，說明在胰腺癌中MMP-2蛋白有過量表達的趨勢。本實驗對MMP-2表達與臨床病理因素進行分析，結果發現，其與臨床分期、腫瘤分化程度、有無淋巴結轉移及腫瘤直徑密切相關，但與性別、年齡機腫瘤位置無關，說明腫瘤的發生、發展及轉移與MMP-2蛋白關系密切。

E-cad為一種重要黏附分子，在細胞與細胞、細胞與細胞外基質的黏附中發揮重要作用。E-cad為一種跨膜蛋白，可以連接環蛋白、微絲及肌動蛋白等形成連接復合體，并與相鄰細胞中復合體連接，使細胞與細胞間形成穩定連接［12］。若E-cad蛋白表達下降或功能抑制，將導致細胞與細胞間、細胞與細胞基質間的連接能力減弱，致使細胞轉移。研究發現，E-cad表達下調與胃癌、食管癌及口腔鱗癌等的轉移關系密切［13］，但在胰腺癌卻鮮有報道。本文對胰腺癌組織中E-cad蛋白的表達做相關研究，結果發現，胰腺癌組織中E-cad蛋白的陽性表達率為32.7%，低于正常組織的100.0%，說明E-cad表達下調與胰腺癌的發生、發展有重要聯系，且與E-cad表達在胃管、食管癌中的研究結果相似。本實驗進一步探討E-cad表達與臨床病理因素的相關性，結果發現與MMP-2結果相似，E-cad的表達只與胰腺癌的臨床分期、分化程度、有無淋巴結轉移及腫瘤直徑有關，而與患者性別、年齡和腫瘤位置無關，說明胰腺癌的發生、發展及轉移與E-cad蛋白有關。

筆者對MMP-2和E-cad蛋白表達的相關性做進一步研究，結果發現，MMP-2蛋白與E-cad的表達呈負相關，說明MMP-2表達上調及E-cad表達下調與胰腺癌的發生、發展及轉移關系密切。

綜上所述，MMP-2表達上調和E-cad表達下調與胰腺癌的發生、發展及轉移關系密切。臨床上可通過檢測MMP-2和E-cad的表達對胰腺癌的發展、轉移進行預測和評估。

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（童穎丹 編輯）

Expressions of MMP-2 and E-cadherin in prancreatic cancer tissues and their clinical significance

Feng Tian，Rui-zhong Fang，Jian Xu
（Yishui Central Hospital，Linyi，Shandong 276000，China）

Objective To study the expression and clinical significance of matrix metalloprotenase 2 （MMP-2）protein and E-cadherin（E-cad）in pancreatic cancer tissues.Methods From June 2011 to June 2013，89 tissue specimens were collected in our hospital，including 34 specimens of normal pancreatic tissue and 55 specimens of pancreatic cancer tissues.The expressions of MMP-2 and E-cad proteins were detected by immunohistochemical technique.Results The positive rate of MMP-2 in the pancreatic cancer tissues was 52.7%which was significantly higher than 2.9%of the normal tissue（P＜0.05）.The positive expression rate of E-cad in the pancreatic cancer tissues was 32.7%which was significantly lower than 100.0%in the normal tissue（P＜0.05）.The expressions of MMP-2 and E-cad were correlated to clinical stage，histological differentiation，lymph node metastasis and tumor diameter（P＜0.05），but were not correlated to gender，age or tumor location（P＞0.05）.MMP-2 and E-cad protein expressions were positive in 2 cases，negative in 10 cases；the MMP-2 and E-cad expressions were negatively correlated（r=-0.673，P=0.027）.Conclusions The upregulation of MMP-2 expression and down-regulation of E-cad expression in pancreatic cancer tissues are closely correlated with the occurrence，development and metastasis of pancreatic cancers.The development and metastasis of pancreatic cancers can be predicted and evaluated by detection of MMP-2 and E-cad expressions.

prancreatic cancer；matrix metalloprotenase protein 2；E-cadherin；immunohistochemistry

R735.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.09.007

1005-8982（2016）09-0034-05

2015-03-25