宮頸細胞DNA 定量分析在宮頸癌篩查中的應用價值

聞　明，田德明，楊小苗，懷建國

(蕪湖市第一人民醫院　1.婦產科；2.病理科，安徽　蕪湖　241001)

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·臨床醫學·

宮頸細胞DNA 定量分析在宮頸癌篩查中的應用價值

聞明1，田德明1，楊小苗2，懷建國2

(蕪湖市第一人民醫院1.婦產科；2.病理科，安徽蕪湖241001)

【摘要】目的：探討宮頸細胞DNA定量分析在已婚婦女宮頸癌早期篩查中的作用和意義。方法：同時運用細胞DNA定量分析技術與液基薄層細胞學檢測(TCT)技術對已婚婦女進行宮頸癌篩查，檢查結果陽性的患者給予陰道鏡下宮頸活檢進行病理確診。結果：1000例婦女行宮頸細胞DNA定量分析共查出DNA倍體異常者188例(18.8%)，其中DNA異倍體1～2個101例，DNA異倍體≥3個87例，經宮頸活檢病理診斷，DNA異倍體者確診宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅰ～Ⅲ級共121例，宮頸癌12例，細胞DNA定量分析檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為89.3%，特異度為18.5%，陽性預測值為13.3%，陰性預測值為92.5%；1000例婦女同時行液基薄層細胞學檢測，查出異常者共65例(6.5%)，經活檢病理診斷，液基薄層細胞學檢查異常者確診宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅰ～Ⅲ級27例，宮頸癌4例，液基薄層細胞學檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為32.1%，特異度為72%，陽性預測值為13.8%，陰性預測值為88.3%。結論：宮頸細胞DNA定量分析靈敏度高于TCT，有助于宮頸癌及癌前病變的早期發現。

【關鍵詞】子宮頸癌；細胞DNA定量；液基薄層細胞學檢測；組織學活檢

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.04.020

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，全世界每年約有新發病例50萬，我國約14萬，占總數的1/3，且年輕化傾向十分明顯[1]。由于宮頸癌有一個可逆的、較長的癌前病變期，故而是目前唯一可以早期發現并可能治愈的婦科惡性腫瘤[2]。因此，宮頸癌的防治關鍵在于及時篩查盡早發現癌前病變。我院2014年開展宮頸細胞DNA定量分析聯合液基薄層細胞學檢測進行宮頸癌篩查共1000例，研究發現細胞DNA定量分析靈敏度高于TCT，有一定臨床應用價值，現總結如下。

1資料與方法

1.1研究對象選取2014年1～12月在我院就診婦女1000名，年齡20～79歲，受檢者均無宮頸疾病史，檢查前3 d否認性生活、用藥及陰道沖洗史，均自愿進行檢查[宮頸細胞DNA定量分析及液基薄層細胞學檢測(thinprep cytology test，TCT)]。

1.2研究方法

1.2.1標本采集與制備由經治醫師使用宮頸刷在受檢者宮頸鱗柱狀上皮交界處行單向旋轉3圈以上收集脫落細胞，將收集細胞連同采樣刷頭置入盛有保存液的標本瓶中，由病理科技術人員使用液基薄層細胞制片儀將標本制備成直徑2 cm的薄層細胞涂片2張，經95%乙醇固定約15～30 min，1張予以巴氏染色，TCT檢測；1張予以Feulgen染色，經細胞DNA定量分析，常規保存標本瓶1年。TCT的細胞保存液為泰普醫藥有限公司產品，巴氏染色需3 d完成；細胞DNA定量分析細胞保存液為麥克奧迪(廈門)醫療診斷系統有限公司產品，全自動細胞定量分析儀為同一公司產品，做Feulgen染色，需5 d完成。

1.2.2病理檢查凡宮頸TCT檢測在無明顯診斷意義的不典型鱗狀細胞(atypical squamous cell of undetermined significance,ASCUS)及以上級別者或DNA定量分析結果提示倍體異常的婦女，均予陰道鏡檢查，同時于宮頸可疑部位進行4點以上的組織活檢，活檢病例共228例。病理診斷順次為正常、炎癥、CIN-Ⅰ、CIN-Ⅱ、CIN-Ⅲ(原位癌)及浸潤癌，以病理結果為金標準。

1.3統計學方法統計學分析運用SPSS 18.0軟件，進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1細胞DNA定量分析受檢細胞與正常細胞的DNA含量進行比較的值為細胞DNA指數(DI)，宮頸正常細胞的DNA指數大多為1，增殖周期為DNA整倍體，沒有異倍體峰出現，而腫瘤細胞的DI常≥2.5，增殖周期為非整倍體，如果宮頸有少數DNA異倍體時，DI仍可為1，即形成異倍體單峰，但有大量異倍體出現時，則DI≥2.5，即形成異倍體雙峰。因此，進行細胞核DNA含量測定，可用于判斷宮頸癌前病變及宮頸癌的客觀指標。

本研究中1000例患者共查出DNA倍體異常者188例(18.8%)，DNA 1～2個異倍體101例，DNA≥3個異倍體87例，見圖1。

A：正常DNA；b：1個異倍體；c：2個異倍體；d：3個異倍體；e：4個異倍體。

圖1宮頸細胞核圖像及DI值

2.2TCT使用TBS分類法，1000例患者行TCT，異常者共65例(6.5%)，其中ASCUS 44例，高度鱗狀上皮內病變(high squamous intraepithelial lesion,HSIL)11例，低度鱗狀上皮內病變(low squamous intraepithelial lesion,LSIL)10例。

2.3病理診斷DNA倍體異常者或TCT異常者均予陰道鏡檢查及宮頸活檢，結果見表1、2。將CIN-Ⅰ級及以上病變均列為陽性，比較DNA異倍體1～2個及≥3個患者活檢病理結果，發現前者101位病例中活檢病理陽性55例，而后者87位病例中陽性78例，見表3。

表1DNA倍體異常者宮頸活檢病理結果

項目正常或炎癥CIN-ⅠCIN-ⅡCIN-Ⅲ浸潤癌合計例數5573351312188比率/%29.2638.8318.626.916.38100

表2TCT異常者宮頸活檢病理檢測結果

項目正常或炎癥CIN-ⅠCIN-ⅡCIN-Ⅲ浸潤癌合計例數341665465比率/%52.3124.629.237.696.15100

表3DNA異倍體1～2個與≥3個患者宮頸活檢病理檢測結果比較

項目正常或炎癥CIN-ICIN-ⅡCIN-Ⅲ浸潤癌合計異倍體1～2個46371152101比率/%45.5436.6310.894.951.98100異倍體≥3個9421881087比率/%10.3448.2820.699.2011.49100

2.4TCT將ASCUS以上病變均列為陽性，DNA倍體定量分析將1個異倍體以上列為陽性,兩種方法結果比較，后者檢出率高于前者，有統計學差異(P<0.05)，見表4。以宮頸活檢病理結果為標準，228例活檢病例中，發現28例CIN-Ⅲ及以上級別的宮頸疾病，16例為CIN-Ⅲ，12例為浸潤性宮頸癌。若將ASCUS定為篩查后需活檢的標準，TCT檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為32.1%，特異度為72%，陽性預測值為13.8%，陰性預測值為88.3%。若將DNA異倍體≥1個以上定為篩查后需活檢的標準，細胞DNA定量分析檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為89.3%，特異度為18.5%，陽性預測值為13.3%，陰性預測值為92.5%。若將DNA異倍體≥3個定為篩查后需活檢的標準，檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為64.3%，特異度為65.5%，陽性預測值為20.7%，陰性預測值為92.9%，比較結果分析見表5、6。

表4TCT與細胞DNA定量分析比較

項目陽性陰性陽性率/%χ2PTCT659356.568.460.00DNA定量細胞學檢測18881218.8

表5TCT與DNA異倍體≥1個以上檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的統計學數據分析

%

表6TCT與DNA異倍體≥3個檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的統計學數據分析

%

比較數據可得出，細胞DNA定量分析靈敏度明顯高于TCT，有統計學差異(P<0.05)，若將異倍體≥1個以上定為篩查后需做活檢的標準時，特異度低于TCT(P<0.05)，而將異倍體≥3個定為篩查后需做活檢的標準則特異度升高，與TCT相比無統計學意義。陽性預測值、陰性預測值均無統計學意義。由此，更多宮頸癌早期患者可被發現，得到確診和治療，同時因篩查陽性而需做活檢的病例數也會有所上升。我們會繼續擴大樣本采集并進行數據分析。

3討論

宮頸癌是嚴重影響婦女生活質量的常見婦科癌癥[3-4]，宮頸細胞從感染到病變直至發展為宮頸癌需3至15年[5-6]，因此早期篩查、診斷及治療，將其阻斷在癌前病變階段，在防治宮頸癌工作中起著極其重要的作用[7]。宮頸細胞DNA定量分析即通過液基制片、Feulgen染色，最后經掃描系統進行細胞DNA定量分析。正常細胞DNA指數大多為1，腫瘤細胞常≥2.5，通過對細胞核內DNA含量或倍體的測定即可判斷細胞的生理狀態或病理改變，因此，測定細胞核DNA含量，可作為判斷宮頸癌前病變及宮頸癌的客觀依據。宮頸癌早期篩查使用DNA定量分析技術，國外早已有大量報道[8]，在北美及歐洲已作為常規檢查之一[9]。

我們通過TCT、宮頸細胞DNA定量分析兩種方法在宮頸癌篩查中的應用價值比較，結果顯示：細胞DNA定量分析靈敏度高于TCT，而將細胞DNA異倍體≥3個定為活檢標準則特異度也會明顯升高，由此篩查出宮頸癌高危人群做進一步確診，并提示該群體是重點隨訪對象，我們應該繼續進行跟蹤與診治，預防宮頸癌的發生、發展。

綜上所述，在宮頸細胞惡變過程中，DNA含量的改變較形態學變化要早，故此，DNA定量分析是早期篩查宮頸癌前病變及宮頸癌的有力手段，相對宮頸活檢而言，具有取樣簡單、無損傷、操作簡便[10]等優點，同時采用該項技術進行宮頸癌篩查也有效解決了在基層開展大規模普查往往缺乏應有的技術和有經驗的細胞學醫生的問題，成本效益合理，可考慮作為適合基層大規模婦女普查宮頸癌一種篩查方法予以推廣。

【參考文獻】

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文章編號：1002-0217(2016)04-0371-04

基金項目：衛生部醫藥衛生科技發展研究中心基金項目(W2013GJ44)

收稿日期：2015-09-24

作者簡介：聞明(1975-)，女，副主任醫師，(電話)15357882072，(電子信箱)1948497833@qq.com；

【文獻標識碼】【中圖號】R 737.33A

Application value of cell DNA quantitative analysis to cervical cancer screening

WEN Ming，TIAN Deming，YANG Xiaomiao，HUAI Jianguo

Department of Obstetrics & Gynecology,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241001,China

【Abstract】Objective：To investigate the clinical significance of applying cell DNA quantitative analysis to early screening of cervical cancer in married women.Methods:Both automated quantitative image cytometry and thinprep cytology test (TCT) were randomLy performed to screen for early cervical cancer in the married women.Patients with positive findings were undergone cervical biopsy under the colposcope for following pathological verification.Results:In 1000 women received cervical cell DNA quantitative measurements,abnormal DNA ploid was detected in 188(18.8%),in whom the heteroploid occurred between one and two in 101,and equal to or greater than three in 87.Pathological examination of the cervical biopsies in cases with heteroploidy cells indicated that 121 were cervical intraepithelial neoplasia (CIN) Ⅰ-Ⅲ,and 12 were cervical cancer.Cervical cell DNA quantitative analysis screening cervical lesion(CIN III and above) indicated that the sensitivity,specificity,positive predictive value(PPV) and negative predictive value (NPV) was 89.3%,18.5%,13.3% and 92.5%,respectively.TCT was also applied to 1000 women and revealed abnormal cell in 65 cases(6.5%).Following pathology verified that 27 cases were CIN Ⅰ-Ⅲ and 4 cervical cancer.The sensitivity,specificity,PPV and NPV in screening cervical lesion(CIN III and above)by TCT 32.1%,72%,13.8% and 88.3%,respectively.Conclusion:Cervical cell DNA quantitative analysis may reveal higher sensitivity than TCT.The findings suggest that this technique can be more competent in early detection of cervical cancer and precancerous lesions in married women.

【Key words】cervical cancer；cell DNA quantitative analysis;Thinprep cytology test；biopsy

懷建國，男，副主任醫師，(電子信箱)478205286@qq.com，通信作者.