卵巢癌組織中肺癌抑癌基因1基因啟動子甲基化狀態及其臨床意義

游顏杰　劉佳佳　苑　藝　高鳳蘭

(漯河醫學高等專科學校藥學系，河南　漯河　462000)

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卵巢癌組織中肺癌抑癌基因1基因啟動子甲基化狀態及其臨床意義

游顏杰劉佳佳苑藝高鳳蘭

(漯河醫學高等專科學校藥學系，河南漯河462000)

〔摘要〕目的探討肺癌抑癌基因1(TSLC1)在卵巢癌中基因啟動子甲基化狀態及臨床意義。方法應用甲基化特異性PCR檢測TSLC1基因啟動子在50例卵巢癌組織和10例正常卵巢組織中的甲基化狀態并結合臨床病理資料進行分析。 結果在卵巢癌組織中TSLC1甲基化陽性率(36%，18/50)，正常卵巢組織未出現TSLC1甲基化。TSLC1甲基化與腫瘤淋巴結轉移與Silverberg分期密切相關(P<0.05)。結論TSLC1甲基化可能是參與卵巢癌發展的重要分子事件。

〔關鍵詞〕肺癌抑癌基因1；卵巢癌；DNA甲基化

肺癌抑癌基因1(TSLC1)介導細胞間相互黏附、胞內信號傳導及膜蛋白與細胞骨架之間的交聯，其表達下調是惡性腫瘤發生侵襲和轉移的重要因素之一〔1〕。已有研究證實，基因啟動子區域異常甲基化是導致其TSLC1基因表達降低或沉默的重要機制〔2～4〕。本實驗旨在深入探討TSLC1基因在卵巢癌組織中甲基化狀態及其臨床意義。

1材料與方法

1.1一般資料收集汕頭大學醫學院附屬腫瘤醫院在2004～2010年間手術切除50例原發卵巢癌組織標本。患者年齡22～71歲，中位年齡50.2歲，患者均在入院后經病理確診，術前未接受放化療。依據國際婦產科聯盟(FIGO，2000)分期。收集正常卵巢組織27例為實驗對照。

1.2主要試劑GTpureTM石蠟組織DNA提取試劑盒購自基因科技公司，EpiTect Kit與HotStar Taq熱啟動酶購自Qiagen公司；dNTP與合成引物購自大連Takara公司，其他常規化學試劑均為進口或國產分析純。

1.3基因組DNA提取與亞硫氫酸鹽修飾石蠟組織標本基因組DNA提取使用GTpureTM組織DNA提取試劑盒，以EpiTect Kit進行上述樣本亞硫酸氫鹽修飾與純化，各項操作按說明書進行。

1.4甲基化特異性PCR(MSP)檢測TSLC1基因啟動子甲基化狀態反應條件：95℃預變性5 min；94℃變性60 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，35個循環。引物序列見表1。甲基化狀態判定標準如下，僅非甲基化引物擴增出相應片段為甲基化陰性；僅有甲基化引物擴增出相應片段即為完全甲基化，甲基化引物與非甲基化引物均擴增出相應片段為不完全甲基化，完全甲基化和不完全甲基化均計為甲基化檢測陽性。

表1　MSP引物序列

1.4統計學分析采用SPSS11.0統計軟件行t及χ2檢驗。

2結果

2.1卵巢癌中TSLC1基因啟動子甲基化狀態MSP分析顯示，50例食管癌組織中18例檢測TSLC1甲基化陽性(18/50，36%)，而在27例正常對照卵巢組織中未出現TSLC1甲基化(圖1)。

圖1　MSP檢測TSLC1基因在卵巢癌組織與正常卵巢中的甲基化狀態

2.2TSLC1甲基化與臨床病理參數的關系表2可見，結合臨床病例資料統計分析，TSLC1甲基化陽性在淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組(P=0.002)，在Silverberg分期G3期高于G1+G2期(P<0.001)，而與患者年齡、絕經情況、FIGO分期、病理分型、雌激素受體(ER)表達、孕激素受體(PR)表達及Ki-67表達等因素無關。

3討論

TSLC1屬于免疫球蛋白超家族成員，其基因定位于人染色體11q23.2，全長約300 kb，編碼由442個氨基酸殘基組成的跨膜糖蛋白，通過介導細胞間相互黏附、胞內信號傳導及膜蛋白與細胞骨架之間的交聯〔5〕。TSLC1的亞細胞定位結構特征與上皮細胞鈣黏蛋白、連接素等經典的黏附分子相似，此外TSLC1還是誘導細胞周期的停滯及細胞凋亡過程中的關鍵分子〔6〕。啟動子甲基化引起的TSLC1表達下調或缺失與食管癌、肺癌、乳腺癌、結腸癌等多種惡性腫瘤侵襲和轉移發生發展的密切相關〔2～4,7,8〕。然而，對于TSLC1基因甲基化在卵巢腫瘤中的研究目尚未有相關報道。本研究結果表明TSLC1甲基化可能在卵巢癌發展過程中的特異發生的重要分子事件之一，是潛在的卵巢癌診治的分子標志物。明確TSLC1甲基化與卵巢癌臨床病理的關系可以指導臨床醫生對患者制定更加完善的個體化治療方案，從而提高卵巢癌的整體治療水平。

4參考文獻

1Murakami Y.Involvement of a cell adhesion molecule,TSLC1/IGSF4,in human oncogenesis〔J〕.Cancer Sci,2005;96(9):543-52.

2Ito T,Shimada Y,Hashimoto Y,etal.Involvement of TSLC1 in progression of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Cancer Res,2003;63(19):6320-6.

3Xu PW,Xu HY,Liu XN,etal.Aberrant promoter methylation of cell adhesion-related genes associated with clinicopathologic features in non-small cell lung cancer in China〔J〕.Cancer Biomark,2013;13(2):115-22.

4Liang QL,Chen GQ,Li ZY,etal.Function and histopathology of a cell adhesion molecule TSLC1 in cancer〔J〕.Cancer Invest,2011;29(2):107-12.

5Wakayama T,Iseki S.Role of the spermatogenic-Sertoli cell interaction through cell adhesion molecule-1 (CADM1) in spermatogenesis〔J〕.Anat Sci Int,2009;84(3):112-21.

6Ito A,Hagiyama M,Oonuma J.Nerve-mast cell and smooth muscle-mast cell interaction mediated by cell adhesion molecule-1,CADM1〔J〕.J Smooth Muscle Res,2008;44(2):83-93.

7Heller G,Geradts J,Ziegler B,etal.Downregulation of TSLC1 and DAL-1 expression occurs frequently in breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res Treat,2007;103(3):283-91.

8Chen K,Wang G,Peng L,etal.CADM1/TSLC1 inactivation by promoter hypermethylation is a frequent event in colorectal carcinogenesis and correlates with late stages of the disease〔J〕.Int J Cancer,2011;128(2):266-73.

〔2015-02-18修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目：河南省科技攻關計劃項目(142102310464)；漯河醫學高等專科學校自然科學項目(2013，Y-J You)

通訊作者：高鳳蘭(1966-)，女，教授，碩士，主要從事腫瘤病理學研究。

〔中圖分類號〕R73

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)13-3200-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.13.051

第一作者：游顏杰(1977-)，男，博士后，講師，主要從事腫瘤分子病理與轉化醫學研究。