H PLC測定不同產地酒黃精中5-羥甲基糠醛含量

郭婕王英姿孫秀梅張兆旺（山東省疾病預防控制中心，山東 濟南5004；北京中醫藥大學中藥學院，北京000；山東中醫藥大學，濟南5004）

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H PLC測定不同產地酒黃精中5-羥甲基糠醛含量

郭婕1王英姿2孫秀梅3張兆旺3
（1山東省疾病預防控制中心，山東 濟南250014；2北京中醫藥大學中藥學院，北京100102；3山東中醫藥大學，濟南250014）

【摘要】目的：比較不同產地酒黃精中5-羥甲基糠醛的含量。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱：Phenomenex-C18（150 mm×4.60 mm，5 μm），流動相：甲醇-0.05%磷酸水（5∶95）；流速1.0 mL/min；檢測波長284 nm；進樣量20 μL；線性范圍：2.016～40.32 μg/mL（r=0.999 9）。結果：云南版納、云南云龍、云南思茅、云南文山、貴州石阡、貴州安順、貴州遵義、湖南沅陵、湖南懷化、安徽宣城等地酒黃精5-羥甲基糠醛含量分別為：2.127，2.244，2.076，2.312，1.975，1.951，1.930，1.845，1.878，1.649 mg/g。結論：不同產地黃精中5-羥甲基糠醛的含量差異明顯，其中以云南文山產酒黃精中5-羥甲基糠醛的含量最高。

【關鍵詞】產地；酒黃精；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法；含量測定

黃精為百合科植物滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）、黃精（Polygonatum sibiricum Red.）或多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）的干燥根莖，有補氣養陰、健脾、潤肺、益腎之功效［1］。既是藥品又是食品。因其生品有刺激咽喉的不良反應，故需經炮制后供使用。黃精經酒制后，不僅可以消除刺激性，而且能增強補益療效?，F代藥理研究發現黃精有明顯的提高免疫系統功能、抗疲勞、抗衰老、降血糖、降血脂等藥理作用［2-4］。實驗研究發現酒制后黃精中5-羥甲基糠醛（5-HMF）含量增加明顯，王永祿及曾林燕等對炮制過程中5-HMF含量改變進行探討［5-6］。5-HMF在醫藥領域作為有效成分制備抗心肌缺血的心血管病藥品，已被中國藥科大學作為專利進行申請（申請專利號：CN97107191.8，公開號：CN1182589），這與現代研究中酒黃精對心血管的作用是相一致的。治療心律失常的步長穩心顆粒，其配方也是以黃精為主要原料制配而成［7］。多年來5-HMF的藥理作用研究取得了一定的進展，但仍存在一定的爭議，沒有公認的結論［8］。之前有研究認為，5-HMF有一定的毒副作用，對眼睛、黏膜、皮膚有刺激性，能與人體蛋白質結合后引起中毒，造成橫紋肌麻痹和內臟損害，并且具有神經毒性，且存在潛在的遺傳及生殖毒性，有不少中藥品種也制定了有關5-HMF的含量測定方法［9］。近年來，對于5-HMF的藥理作用出現一些新的研究，發現它有很多對人體有益的積極作用，5-HMF是一種能有效防治神經退行性疾病、認知損害和抗心肌缺血的心血管病藥物，它很有可能是被人們忽視的存在于單味中藥及復方背后的一種活性成分［10］。本實驗以不同產地酒黃精為研究對象，對5-HMF的含量進行比較。

1　實驗儀器與材料

DYQ420型參茸切片粉碎雙用機（浙江省瑞安市環球藥械廠）；KQ-250E型醫用超聲波清洗器（江蘇昆山超聲儀器公司）；FA-1104型電子天平（上海精密儀器廠）；AE 240型十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒公司）；721型分光光度計（上海第三分析儀器廠）；LDZ4-0.8北京醫用離心機；LC-10AT高效液相色譜儀（日本·島津）；SPD-10A檢測器；N2000色譜工作站。

黃精藥材經專家鑒定為百合科植物滇黃精、黃精或多花黃精的干燥根莖。取黃精藥材100 g，洗凈，加入黃酒 20 kg，水20 kg，潤 1 h，蒸 7 h，悶3 h。取出，80℃烘至藥材不粘手，切厚片（3 mm），80℃干燥，即得。悶潤后蒸制為黑褐色飲片，顯黏性，味甜。粉碎成粗粉（過《中國藥典》2號篩），備用。

5-HMF（中國食品藥品檢定研究院，批號：111626-200301），黃酒（安徽海神黃酒有限公司釀造）。甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2　方法和結果

2.1樣品的制備

分別取云南、貴州、湖南、安徽產黃精洗凈，按確定的中試工藝制備酒黃精，共10批，其中云南4批，貴州3批，湖南2批，安徽1批。本品為黑褐色飲片，顯黏性。味甜。粉碎成粗粉（過《中國藥典》2號篩），備用。

2.2酒黃精的含水量測定

取“2.1”項下樣品，按《中國藥典》2010年版一部附錄53頁水分測定法中甲苯法測定，測定結果見表1。

表1　含水量測定結果

2.3酒黃精的5-HMF含量測定

2.3.1供試液的制備分別取“2.1”項下樣品各0.4 g，精密稱定，加甲醇15 mL，超聲提取20 min，濾過，濾渣加甲醇 10 mL，超聲提取 10 min，濾過，濾液依次定容至25 mL，制得供試液F1～10（每1 mL相當于藥材約0.016 g），備用。

2.3.2對照液的制備取 5-HMF對照品 10 mg，精密稱定。用甲醇溶解定容至2 mL，備用。

2.3.3色譜條件色譜柱：Phenomenex-C18（150 mm× 4.60 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.05%磷酸水（5:95）；流速1.0 mL/min；檢測波長284 nm；進樣量20 μL；采用保留時間定性；分析方法：外標兩點法。

2.3.4標準曲線的繪制精密量取“2.3.2”項下的對照液，分別稀釋，得到7個不同濃度的對照液，分別取 20 μL進樣，按“2.3.3”項下色譜條件，依法測定。結果見表2。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制工作曲線，見圖2?；貧w方程為：y=50 180x＋ 8 307.2（r=0.999 9），線性范圍：2.016～ 40.32 μg/mL。

圖1　5-HMF高效液相圖譜

表2　5-HMF高效液相吸收曲線測定結果

圖2　5-HMF高效液相標準曲線

2.3.5精密度試驗精密移取“2.3.4”項下對照液（25.20 μg/mL）20 μL，按“2.3.3”項下色譜條件，依法測定。連續測定5次，RSD為0.47%，表明精密度良好，見表3。

表3　精密度試驗結果

2.3.6重現性試驗精密移取“2.1”項下樣品（湖南沅陵），按“2.3.1”項下條件制備供試液5份，按“2.3.3”項下色譜條件，依法測定。連續測定5次，RSD為0.71%，表明該測定方法重現性好（表4）。2.3.7穩定性試驗精密移取“2.3.4”項下對照液（25.20 μg/mL）20 μL，按“2.3.3”項下色譜條件，每隔24 h依法測定1次，連續5天，RSD為1.65%，表明5天內穩定性良好（表5）。

表4　重現性試驗結果

表5　穩定性測定結果

2.3.8樣品的5-HMF含量測定取“2.3.1”項下供試液 F1～10，稀釋至適宜濃度，精密移取 20 μL，按“2.3.3”項下色譜條件，依法測定。計算各樣品中5-HMF含量。結果見表6。

表6　5-HMF含量測定結果

2.3.9回收率考察精密移取“2.3.1”項下供試液F8共 5份，每份 10 μL，分別加入“2.3.4”項下對照液10 μL，按“2.3.3”項下色譜條件，依法測定，計算回收率。結果見表7。

表7　5-HMF回收率考察結果

3　討論

傳統中藥材講究道地藥材，道地藥材是指在一特定自然條件、生態環境的地域內所產的藥材，因生產較為集中，栽培技術、采收加工也都有一定的講究，以致較同種藥材在其他地區所產者品質佳、療效好。道地，也就是地道，也即功效地道實在，確切可靠。古代本草有關道地藥材的論述從東漢《神農本草經》開始，歷代本草對藥材產地和療效的關系均有記載，而明確道地產區的最早文獻是明代的《本草品匯精要》。該書記載植物藥916種，明確道地優劣的有2種。

我國有黃精30余種，分布廣泛，《中國藥典》2010年版［11］僅對黃精中的黃精多糖進行了限量規定，雖然多糖類有一定的免疫調節及抗腫瘤作用［12］，但不能全面反映酒黃精的質量。黃洪新等［13］對河南，河北，山西產地的生黃精進行了 5-HMF含量測定，以河北產地的為高；曾林燕等［6］以液相色譜-質譜聯用（LC-MS）法對黃精，滇黃精和多花黃精的生品進行5-HMF含量測定，認為其不存在于生品中，但未注明生品的明確加工過程和技術參數（如干燥時間及干燥溫度）［6］；常亮等［14］對黃精，滇黃精和多花黃精的生品進行5-HMF含量測定，發現不同黃精生品含有的5-HMF量不同，但都很微量。本研究認為5-HMF不是生黃精的主要藥效成分，在生黃精的質量標準研究中可忽略或較少考慮此成分的測定。黃精酒制過程加熱時間長，溫度較高，含有大量的糖類成分，炮制過程中可能產生還原糖類成分與氨基酸類成分的美拉德反應，不可避免會產生5-HMF等反應產物，5-HMF作為酒黃精中主要活性成分之一，有必要對其含量進行控制。

本研究結果表明各地酒黃精中5-HMF含量差別明顯，其含量從低到高依次為安徽宣城、湖南沅陵、湖南懷化、貴州遵義、貴州安順、貴州石阡、云南思茅、云南版納、云南云龍、云南文山，以云南產為高。測定不同產地酒黃精中5-HMF的含量可為研究黃精產地對酒黃精質量的影響及酒黃精的質量標準制定奠定基礎。

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doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.007

收稿日期：（2015-09-11）

作者簡介：郭婕，女，碩士，主管藥師。主要從事食品藥品等健康相關產品的研究。通訊作者E-mail：gjsd2008@126.com

Determination of 5-Hydroxymethyl Furfural Content in Alcoholis Rhizoma Polygonat from Different Places of Production by HPLC

Guo jie1，Wang Yingzi2，Sun Xiumei3，Zhang Zhaowang3
（1 Shandong Center for Disease Control and Prevention，Shandong Jinan 250014，China；2 School of Chinese Pharmacy of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102；3 Shandong University of Chinese Medicine，Jinan 250014）

ABSTRACTObjective:To compare the content of 5-hydroxymethyl furfural（HMF）in Alcoholis Rhizoma Polygonat derived from different places of production.Methods:High performance liquid chromatography（HPLC）was adopted. The Phenomenex-C18column（150 mm×4.60 mm，5 μm）was used，serving methanol-0.05%phosphoric acid solution （5∶95）as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was 284 nm，while the sample loading was 20 μL.The linear range of 5-HMF was 2.016～40.32 μg/mL（r=0.999 9）.Results:The content of 5-HMF in Alcoholis Rhizoma Polygonat from Banna Yunnan，Yunlong Yunan，Simao Yunan，Wenshan Yunan，Shiqian Guizhou，Anshun Guizhou，Zunyi Guizhou，Yuanling Hunan，Huaihua Hunan and Xuancheng Anhui were 2.127，2.244，2.076，2.312，1.975，1.951，1.930，1.845，1.878 and 1.649 mg/g，respectively.Conclusion:The contents of 5-HMF in Alcoholis Rhizoma Polygonat from different places of productionn are significantly different，in which one from Wenshan Yunnan is the highest.

KEY WORDSPlace of Production；Origin；Alcoholis Rhizoma Polygonat；5-Hydroxymethyl Furfural（HMF）；HPLC；Content Determination