H PLC測(cè)定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-羥甲基糠醛含量

李彩霞　劉光斌（酒鋼醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅 嘉峪關(guān)735100）

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H PLC測(cè)定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-羥甲基糠醛含量

李彩霞劉光斌
（酒鋼醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅 嘉峪關(guān)735100）

【摘要】目的：建立高效液相色譜法測(cè)定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-三乙胺溶液（9∶91，取水1 000 mL加三乙胺2.5 mL，用稀磷酸溶液（1→5）調(diào)pH值為3.0）；流速為1.0 mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長284 nm。結(jié)果：5-羥甲基糠醛在0.002 8～ 7.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 8），平均回收率為99.81%，RSD為1.87%。結(jié)論：本方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法；含量測(cè)定

轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液為復(fù)方制劑，其組分為每 500 mL（5%）：果糖 12.5 g，葡萄糖 12.5 g，乳酸鈉1.400 0 g，氯化鈉0.730 0 g，氯化鉀0.930 0 g，氯化鎂0.143 0 g，磷酸二氫鈉0.375 0 g，用于需要非口服途徑補(bǔ)充水分或能源及電解質(zhì)的患者的補(bǔ)液治療［1］。轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液在臨床使用過程中發(fā)生的藥品不良反應(yīng)很可能與其內(nèi)果糖和葡萄糖在生產(chǎn)和儲(chǔ)存過程中產(chǎn)生的5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural，5-HMF）有關(guān)［2］。5-HMF是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物，該化合物對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害［3］。有報(bào)道稱5-HMF有可能引發(fā)并促進(jìn)結(jié)腸小囊異常生長［4］及具有一定程度的基因毒性［5］。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中的5-HMF進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行多批次不同時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)，為轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的安全性評(píng)價(jià)提供參考。

1　材料

1.1儀器

LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津），島津 LC solution工作站；AUY220電子分析天平（日本島津）。

1.2藥品與試劑

5-HMF對(duì)照品購自中國食品藥品檢定研究院（批號(hào)：111626-200301）；轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)上海海尼藥業(yè)有限公司，規(guī)格：500 mL）；乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-三乙胺溶液（9∶91，取水1 000 mL加三乙胺2.5 mL，用稀磷酸溶液（1→5）調(diào)pH值為 3.0）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：284 nm；進(jìn)樣量：10 μL。5-HMF對(duì)照品、轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的色譜圖見圖1。

圖1　高效液相色譜圖

2.2溶液的配制

2.2.1對(duì)照品溶液的配制精密稱取5-HMF對(duì)照品適量，置于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得10 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的配制取轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液樣品直接進(jìn)樣。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取5-HMF對(duì)照品7.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，精密量取1 mL 置25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。

精密量取上述對(duì)照品貯備液0.01，0.05，0.1，1.0，5.0，10.0，25.0 mL分別置于 100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得濃度分別為0.002 8，0.014，0.028，0.28，1.4，2.8，7.0 μg/mL的對(duì)照品溶液。將上述對(duì)照品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣 10 μL，以5-HMF峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，5-HMF濃度（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為：

Y=1.172 34×107X＋ 1 236.1，

r=0.999 8（n=7）。結(jié)果表明5-HMF對(duì)照品在 0.002 8～ 7.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4精密度試驗(yàn)［6］

2.4.1重復(fù)性試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液按照“2.1”色譜條件以10 μL重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得5-HMF含量的RSD=1.12%；取同一批轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液按照“2.1”色譜條件以 10 μL重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算5-HMF含量，RSD為1.22%，結(jié)果表明，本法的重復(fù)性較好。

2.4.2中間精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液按上述色譜條件，由不同的實(shí)驗(yàn)人員分別于0，1，2，3，4，5日進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果峰形無改變，峰面積的RSD為1.64%，說明建立測(cè)定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-HMF含量的方法中間精密度良好。

2.4.3重現(xiàn)性試驗(yàn)將上述同一供試品溶液送至嘉峪關(guān)市藥品檢驗(yàn)所，依本文建立的方法用不同的高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果峰形無改變，峰面積的RSD為2.35%，說明不同的實(shí)驗(yàn)室不影響本方法的重現(xiàn)性結(jié)果。

2.5回收率試驗(yàn)

精密量取已知5-HMF含量的轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液2.0 mL 9份，分別置于5 mL量瓶中，分為3組，每組3份。3組待測(cè)溶液分別精密加入“2.3”項(xiàng)下0.28 μg/mL對(duì)照品溶液1.1，1.3，1.5 mL，使得低、中、高濃度對(duì)照品加入量與所取供試品待測(cè)定成分量之比控制在0.8∶1，1∶1，1.2∶1左右［6］，加超純水至刻度。分別測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1，5-HMF平均回收率為99.81%，RSD為1.87%。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.6樣品含量測(cè)定及穩(wěn)定性考察

按擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定了10批市售轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)上海海尼藥業(yè)有限公司，規(guī)格：500 mL）樣品，并在效期內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)多次進(jìn)行檢測(cè)，5-HMF的含量在0.009～ 1.375 μg/mL之間。同一批號(hào)的轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果的RSD均小于2.0%，說明同一批號(hào)的轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液在效期內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)多次檢測(cè)結(jié)果是穩(wěn)定的。

3　討論

5-HMF是含有葡萄糖、果糖的注射液制備、運(yùn)輸及儲(chǔ)存過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，因此有必要制訂轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-HMF的檢查方法。《中國藥典》2015年版對(duì)于含葡萄糖注射液標(biāo)準(zhǔn)中采用紫外-可見分光光度法檢測(cè)5-HMF限度［7］，UV吸收度法因簡單、通用、不需對(duì)照品，可作為首選方法。若藥品成分比較復(fù)雜干擾檢測(cè)時(shí)，該方法分離度不高、專屬性較差。經(jīng)試驗(yàn)，本文所用HPLC專屬性好，可用于轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中雜質(zhì)含量的控制。

采用HPLC外標(biāo)法限度要求應(yīng)不低于藥典中葡萄糖注射液或葡萄糖氯化鈉注射液限度，需用對(duì)照品進(jìn)行限度的等量轉(zhuǎn)換試驗(yàn)，以確定合適的限度。根據(jù)《中國藥典》2015年版規(guī)定：葡萄糖注射液中5-HMF“在284 nm的波長處測(cè)定，吸光度不得大于0.32”。有研究認(rèn)為［3］，《中國藥典》所規(guī)定的“吸光度不得大于0.32”時(shí)相對(duì)應(yīng)的5-HMF濃度約為2 μg/mL，所有葡萄糖類注射液中5-HMF的限度應(yīng)定為2 μg/mL。因此，按以上限度進(jìn)行判斷，所測(cè)定的10批樣品中實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的5-HMF的吸光度均小于2 μg/mL，在限度控制范圍內(nèi)，說明轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液樣品的安全性有保障。

本文曾參照文獻(xiàn)［8］選擇0.05 mol/mL磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH值至 3.5）-甲醇（80∶20）進(jìn)行測(cè)定，5-HMF的吸收峰拖尾比較嚴(yán)重。而用本文方法減少了拖尾的問題。

轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液是由葡萄糖與果糖等分子混合制成含有多種電解質(zhì)的復(fù)方制劑，不僅適用于手術(shù)后、燒創(chuàng)傷和感染等胰島素抵抗以及糖尿病患者的能量補(bǔ)充，同時(shí)還可作為靜脈給藥的載體，與多種藥物配伍。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［9-12］，有些藥物可以與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液配伍使用，而有些藥物與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液存在配伍禁忌。本研究認(rèn)為，在考察藥物與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的配伍穩(wěn)定性時(shí)應(yīng)該考察5-HMF的限度。5-HMF是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物。藥品與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液等含有單糖的注射液配伍后在放置過程中可能會(huì)分解產(chǎn)生5-HMF［13］。因此在藥物與含糖輸液配伍穩(wěn)定性研究中不可忽視，有必要檢測(cè)5-HMF的含量。

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doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.006

收稿日期：（2015-09-08）

作者簡介：劉光斌，男，主任藥師。研究方向：臨床藥學(xué)、醫(yī)院藥學(xué)。通訊作者E-mail：jgyylgb@sina.com

Determination of 5-Hydroxymethyl Furfural Content in Invert Sugar and Electrolytes Injection by HPLC

Li Caixia，Liu Guangbin（Department of Pharmacy of Jiugang Hospital，Gansu Jiayuguan 735100，China）

ABSTRACTObjective：To develop a HPLC method for determination of 5-hydroxymethyl furfural content in invert sugar and electrolytes injection.Methods:Kromasil C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm）was used，serving acetonitrile-triethylamine solution（9∶91，add 2.5 mL triethylamine to 1 000 mL water，and adjust the pH value to 3.0 with dilute phosphoric acid solution（1→5）as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min.The temperature of column was 25℃，while the detection wavelength was 284 nm.Results:The standard curve of 5-hydroxymethyl furfural showed a good linearity at a concentration range of 0.002 8～7.0 μg/mL（r=0.999 8）. The average recovery was 99.81%，with a RSD of 1.87%.Conclusion：The developed HPLC method is simple，sensitive，specific and accurate.

KEY WORDSInvert Sugar and Electrolytes Injection；5-Hydroxylmethyl Furfural；HPLC；Content Determination