HPLC法測定不同產地辣椒中辣椒素和二氫辣椒素的含量

曹　莉　黃多臨

廣東省湛江中醫學校，廣東　湛江　524094

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藥物研究

HPLC法測定不同產地辣椒中辣椒素和二氫辣椒素的含量

曹莉黃多臨

廣東省湛江中醫學校，廣東湛江524094

【摘要】目的：采用反相高效液相法測定不同產地辣椒中辣椒素和二氫辣椒素的含量。方法：采用安捷倫Eclipse SB C18色譜柱(250mm×4.6mm；5μm)，流動相為甲醇-水(50∶50)，流速為1.0ml/min，檢測波長280nm，柱溫25℃。結果：各產地辣椒中均含有辣椒素和二氫辣椒素，目不同產地的含量差別較大。結論：該方法準確、簡便、可行，可作為辣椒藥材的含量測定方法。

【關鍵詞】高效液相色譜法；辣椒；辣椒素；二氫辣椒素；含量測定

辣椒為茄科植物辣椒(CapsicumannuumL.)或其栽培變種的干燥成熟果實，夏秋二季果皮變紅時采收，除去枝梗，曬干。辣椒現收載于2015年版《中國藥典》一部中，其味辛熱，歸心脾經，具有溫中散寒、開胃消食的功效，用于寒滯腹痛、嘔吐、瀉痢、凍瘡[1]370，是著名中成藥十滴水[1]449、關節止痛膏[1]869-870、天和追風膏[2]等的組方藥材之一。辣椒在中國南北方具有大量栽培，也作為蔬菜或調味品。辣椒中已發現有生物堿、萜類、不飽和脂肪酸等類型的化合物，辣椒素和二氫辣椒素是辣椒中的主要活性成分，也是辣椒中辣味的來源，其含量的高低直接影響到辣椒及其制品的辣度和療效，可作為評價辣椒質量的重要指標成分[3]。研究以辣椒素和二氫辣椒素為對照品，采用高效液相色譜法(HPLC)對全國收集到的26批辣椒進行測定，比較各地辣椒的質量，該方法簡便快捷，結果準確。

1儀器與材料

1.1儀器日本島津高效液相色譜儀(SIL-20A自動進樣器，LC-20AT 紫外檢測器，DGU-20A5 柱溫箱)；安捷倫Eclipse SB C18(250mm×4.6mm；5μm)色譜柱；萬分之一電子天平(Sartorius BP110s, 德國賽多利斯公司)；FW100型粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)；KQ-3200DV超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2材料對照品辣椒素(批號：110839-201205)和二氫辣椒素(批號：111666-201303)購自中國食品藥品檢定研究院；辣椒藥材為紅色干燥尖辣椒，去梗(購自全國各大藥店，按產地計)；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1對照品溶液制備精密稱取辣椒素和二氫辣椒素對照品約10mg，分別置10ml量瓶中，加入甲醇溶解并定容，制成含辣椒素和二氫辣椒素約1mg/ml的對照品貯備液，再次稀釋成含辣椒素和二氫辣椒素約40μg/ml的對照品溶液，濾過，取續濾液，即得。

2.2供試品溶液的制備藥材經粉碎機粉碎，取粗粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3色譜條件及系統適用性考察C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-水(50∶50)；流速：1.0ml/min；柱溫：25℃；檢測波長：280nm；進樣量：10μl。各峰與相鄰峰的分離度均大于1.5，理論塔板數均在10000以上。色譜圖見圖1。

2.4線性關系考察取“2.1”項下對照品溶液，分別進樣1、5、10、15、20μl ，注入液相色譜儀，記錄色譜峰。以進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積平均值Y為縱坐標，繪制標準曲線并進行回歸計算，辣椒素的回歸方程為Y=5825.7X+5.3，r=0.9999，結果表明辣椒素在0.0408～0.816μg范圍內進樣量與峰面積呈良好的線性關系；二氫辣椒素的回歸方程為Y=4832.7X+12.5，r=0.9999，結果表明辣椒素在0.0398～0.796μg范圍內進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗精密吸取上述對照品溶液10μl，連續進樣6次，測定峰面積。結果辣椒素峰面積的平均值為232580，RSD=0.35%；二氫辣椒素峰面積的平均值為154236，RSD=0.56%，表明儀器精密度良好。

2.6重復性試驗分別稱取同一批樣品(批號：140703)6份，按“2.2”項下方法平行制備6份試品溶液，辣椒素平均含量分別為4.01mg/g，RSD依次為1.5%；二氫辣椒素平均含量分別為4.01mg/g，RSD依次為1.5%，表明該方法重復性良好。

2.7穩定性試驗取同一份供試品(廣東饒平基地1)溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h測定，記錄色譜圖，計算色譜峰的峰面積值，辣椒素峰面積平均值為233152，RSD為0.96%；二氫辣椒素峰面積平均值為154789，RSD為0.57%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.8加樣回收率試驗取“2.6”項中已測知含量的辣椒粉末6份，每份約0.25g，精密穩定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入辣椒素對照品儲備液和二氫辣椒素對照品儲備液1.0ml，按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣10μl，記錄峰面積，計算回收率，結果見表1，表明方法準確度良好。

表1　加樣回收率試驗結果　(n=6)

2.9樣品測定取不同產地辣椒樣品，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算各成分含量，結果見表2。

表2　樣品測定結果

3討論

本試驗對辣椒素溶液進行了紫外全波長掃描，其最大吸收波長在280nm左右，在該波長下測定樣品，各成分峰形較好，基線穩定，干擾少，故選擇280nm作為檢測波長。對4種常用的流動相系統(乙腈-水、乙腈-磷酸水、甲醇-水、甲醇-磷酸水)的應用進行了考察，結果表明上述系統在等度洗脫情況下，所測的2個成分均能很好的分離，考慮到簡便以及溶劑價格，最終用甲醇-水系統，被測2個成分分離度良好，峰形窄而對稱，不受其他峰的干擾。

從各批次樣品的色譜圖來看，辣椒素和二氫辣椒素為辣椒中的主要色譜峰，二者的含量能夠反映辣椒的辣度和質量。從含量看，所測26批次樣品中，辣椒素的含量均明顯高于二氫辣椒素，一般為1.0～2.8倍之間，并且有15批在1.0～2.0倍，因此推斷，對于辣椒及其制劑，僅測定辣椒素1個成分的含量即能夠起到質量控制的目的。

從所采集樣品來看，各地辣椒中辣椒素含量差異較大，這可能與溫度、光照、海拔以及采收時間等因素的影響有關，但由于樣品采集量有限，目前還缺乏確切的數據支撐，值得進一步研究。因此，中醫臨床用藥或中成藥投料時，應注意藥材的辣椒素和二氫辣椒素含量。

本實驗首次對不同產地辣椒中主要活性成分辣椒素進行測定，建立的方法簡便、快速、準確，對于辣椒的質量控制具有重要意義。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2015: 370，449，869-870.

[2] 衛生部藥典委員會. 衛生部藥品標準中藥成方制劑第十八冊 [S]. 1996: 47.

[3] 張晶，佟全勝，石磊嶺，等. 辣椒的化學成分研究進展[J].中成藥，2009, 31(12): 1906-1912.

作者簡介：曹莉(1982-)，女，講師。研究方向：中藥學。E-mail：zjzyxxjwkcl@yeah.net 通信作者：黃多臨(1977-)，研究方向：中醫中藥。E-mail：huangduolin@yeah.net

【中圖分類號】R284.1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)12-0008-03

(收稿日期：2016.04.21)

Determination of capsaicin and dihydrocapsaicin in fruits ofCapsicumannuumby HPLC

CA0 Li HUANG Duolin

Zhanjiang college of Chinese medicines, Zhanjiang 524094,China

Abstract:Objective To establish an HPLC method for determination of capsaicin and dihydrocapsaicin in fruits of Capsicum annuum, and compare the quality of the different areas of Capsicum annuum.Methods The HPLC system consisting of Agilent Eclipse SB C18(250mm×4.6mm, 5μm)column and a solution system of methanol-water (50∶50), The detection UV wavelength was at 280nm, the flow rate was 1.0ml·min-1, the column temperature was 25 ℃.Results The contents of capsaicin and dihydrocapsaicin in fruits of Capsicum annuum from different habitats are significantly different. Conclusion The method is simple, rapid and accurate, and can be used for the quality control of Capsicum annuum L.

Key words:HPLC; Capsicum annuum; capsaicin; dihydrocapsaicin; determination