蒙藥額爾頓烏日勒對兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的血液流變學影響

白斯琴　烏仁圖雅　李常勝　吳薩日娜　蘇倫高娃

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學，內(nèi)蒙古　呼和浩特　010110

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蒙藥額爾頓烏日勒對兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的血液流變學影響

白斯琴烏仁圖雅李常勝吳薩日娜蘇倫高娃

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學，內(nèi)蒙古呼和浩特010110

【摘要】目的：觀察兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷血液流變學變化及額爾頓烏日勒的保護作用。方法：將95只日本大耳白兔隨機分為正常組、模型組、額爾頓·烏日勒(又名珍寶丸)組和原花青素組(PC組)，采用升高兔眼壓到50mmHg持續(xù)2h的方法制作視網(wǎng)膜缺血再灌注模型。除正常組外，每組分別在缺血再灌注1、6、12、24、48、72h后檢測視網(wǎng)膜組織中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及血液流變學指標。結(jié)果：除血漿黏度外，模型組與正常組比較，血液流變學差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；珍寶丸組及PC組與模型組比較，血液流變學差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，珍寶丸組與PC組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。SOD：模型組的24h、48h、72h與正常組比較視網(wǎng)膜組織中SOD活力均明顯下降，珍寶丸組及PC組的24 h、48h、72h視網(wǎng)膜組織中SOD活力均相應(yīng)的有所提高，且明顯高于同時間點模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。組內(nèi)24 h、48h、72h與1h、6h、12h比較，SOD活力均有降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。MDA：模型組24 h、48h、72h與1h、6h、12h比較，珍寶丸組及PC組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論：額爾頓烏日勒可改善視網(wǎng)膜的血流，防治視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷。

【關(guān)鍵詞】額爾頓烏日勒；視網(wǎng)膜；缺血再灌注；血液流變學

1材料和方法

1.1實驗動物及分組健康成年無眼疾雄性日本大耳白兔95只，體重2.5～3.0kg，室溫環(huán)境飼養(yǎng)。隨機分為正常組(5只)、模型組(30只)、珍寶丸組(30只)、PC組(30只)。

1.2主要儀器和試劑721分光光度計(上海第三分析儀器廠) ,JN-A型精密扭力天平(上海第二天平儀器廠)。丙二醛測試盒,超氧化物歧化酶測試盒(南建成生物工程研究所)。

1.3給藥方法于造模前7天按體重下胃管給藥,珍寶丸組灌入珍寶丸0.15g/kg,PC組灌入原花青素300mg/kg,1次/d。正常組及模型組給予等量生理鹽水。

1.4動物模型制備采用前方灌注高眼壓致缺血的方法：將兔子稱體質(zhì)量，2%戊巴比妥鈉以劑量1 ml/kg,耳緣靜脈注射麻醉后，隨機選取每只兔的1只眼造模，復(fù)方托吡卡胺散瞳，滴鹽酸奧布卡因滴眼液眼表面麻醉，將連有生理鹽水灌注的7號頭皮針沿顳側(cè)角鞏膜緣斜面向上刺入兔眼前房，為了避免損傷晶狀體和虹膜，用膠布固定頭皮針于兔眼同側(cè)耳緣處。緩慢升高輸液瓶至兔眼實驗眼垂直距離為90cm，此高度可在眼內(nèi)形成50mmHg的眼壓，使眼內(nèi)壓超過體循環(huán)收縮壓，從而阻斷視網(wǎng)膜血流，達到缺血的目的。當球結(jié)膜及虹膜迅速變白時用直接檢眼鏡觀察視網(wǎng)膜蒼白，視網(wǎng)膜中央動脈的供血完全阻斷。實驗過程中間斷點紅霉素眼膏以保持角膜濕潤并預(yù)防感染。持續(xù)2h后，逐漸降低輸液瓶高度至兔眼球水平使眼內(nèi)壓緩慢降低，以恢復(fù)視網(wǎng)膜血供，此時關(guān)閉輸液器并拔出前房灌注針頭，虹膜及球結(jié)膜顏色迅速恢復(fù)正常，眼底視網(wǎng)膜呈橘紅色，說明阻斷的血管重新開放，形成再灌注，即為IR模型建立成功。術(shù)畢結(jié)膜囊涂紅霉素眼膏，待清醒后回籠。

1.5取材造模后通血再灌注1h時間點從耳緣靜脈取血5ml進行血流變檢查，分別再灌注1、6、12、24、48、72h后處死兔，立即摘取右眼剝離視網(wǎng)膜，取上清液做MDA、SOD吸光度值的測定。

1.6觀察內(nèi)容

1.6.1從各小組動物耳緣靜脈抽取全血5ml，置于肝素鈉抗凝管，搖勻后置于北京塞科希德自動血流變測試儀上立即檢測全血高切黏度、全血中切黏度、全血低切黏度、血漿黏度等指標，其指標由機載程序及特定公式導(dǎo)出；并將所檢測指標的結(jié)果打印成表。

1.6.2分別于再灌注1h、6h、12h、24h、48h、72h后立即空氣栓塞處死動物，迅速摘除眼球，在冰環(huán)境中環(huán)角鞏膜緣切開,棄去角膜和晶狀體等,外翻眼球,解剖顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜,以分析天平稱視網(wǎng)膜濕重,再用雙蒸水配成2%的濕重,勻漿。將勻漿液倒入試管中, 3000r/min離心15min,取出上清液,測定其MDA 含量和SOD的活性值。具體操作方法依照MDA和SOD 試劑盒說明書步驟進行。

2結(jié)果

2.1實驗動物情況實驗過程中3只兔因腹瀉死亡，2只兔因胃腸脹氣死亡，2只兔不明原因死亡，尸檢發(fā)現(xiàn)肺臟充血，纖維化嚴重，考慮肺炎，整個實驗過程中共死亡7只兔，與實驗藥物作用無關(guān)。

2.2血液流變學的檢測結(jié)果除血漿黏度外，模型組與正常組比較，血液流變學差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；珍寶丸組及PC組與模型組比較，血液流變學差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，珍寶丸組與PC組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

全血高切粘度全血中切變率全血低切變率血漿粘度正常組3.36±0.774.54±1.6418.89±9.681.32±0.16模型組3.99±2.22▲5.02±3.46▲20.35±11.43▲1.06±0.55珍寶丸組1.82±0.96*2.32±0.96*11.68±3.69*1.22±0.58PC組2.87±1.1*3.53±1.43*17.39±13.24*1.31±0.36

注：與正常組比較,▲P<0.05；與模型組比較，*P<0.05。

2.3視網(wǎng)膜組織中MDA含量及SOD活性的檢測結(jié)果模型組的24h、48h、72h與正常組比較視網(wǎng)膜組織中SOD活力均明顯下降，珍寶丸組及PC組的24 h、48h、72h視網(wǎng)膜組織中SOD活力均相應(yīng)的有所提高，且明顯高于同時間點模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。MDA含量明顯低于模型組(P<0.05)，見表3。組間內(nèi)24h、48h、72h 與1h、6h、12h比較，SOD活力均有降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

表2　額爾頓烏日勒對兔視網(wǎng)膜組織中SOD活性的影響　±s，U·ml-1)

注：與正常組比較,▲P<0.05；與同時間點的模型組比較，*P<0.05。

表3　額爾頓烏日勒對兔視網(wǎng)膜組織中MDA活性的影響　±s，nmol·ml-1)

注：與正常組比較,▲P<0.05；與同時間點的模型組比較，*P<0.05。

3討論

血液流變學是一門研究物體流動、變形的科學。血液流變學是生物流變學的重要分支，是研究有關(guān)血液的變形性與流動性的科學。血液流變學包括兩部分內(nèi)容: 宏觀血液流變學和微觀血液流變學。前者包括血液黏度、血漿黏度、血沉、血液及管壁應(yīng)力分布; 后者包括紅細胞聚集性、紅細胞變形性，血小板聚集性、血小板黏附性等，故又稱為細胞流變學[1]。血液為非牛頓液體,即血粘度隨切變率而改變。切變率是指在層流的情況下,相鄰兩層血液流速的差和液層厚度的比值,血流快和血管管徑小時,切變率高;血流慢和血管管徑大時,切變率低。當血粘度增加時,血管擴張,維持正常的血容量。因此,如果外部壓力(如眼內(nèi)壓)阻止了血管擴張或引起血管收縮,而自身血粘度又增高,此時血流量將減少,由此產(chǎn)生局部的血循環(huán)障礙,引起組織缺血、缺氧及功能代謝失調(diào),成為組織(如視神經(jīng))變性、萎縮等一系列病理變化的基礎(chǔ)[2]。

視網(wǎng)膜是代謝非常旺盛的組織,其耗氧及糖原分解能力超過全身其它任何組織,因此對缺血、缺氧極其敏感,當眼壓升高超過視網(wǎng)膜和篩板的自身調(diào)節(jié)功能時, 即引起視網(wǎng)膜血液循環(huán)障礙、CRA血流改變，導(dǎo)致視網(wǎng)膜、篩板、視神經(jīng)供血不足，損害視神經(jīng)和視野。那么急性高眼壓對眼組織的損傷, 實質(zhì)是缺血-再灌注的問題[3-4]。視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后視網(wǎng)膜組織MDA含量明顯增高，SOD活性明顯降低[5]。MDA為機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，SOD、GSH是生物體內(nèi)主要的氧自由基清除劑，視網(wǎng)膜缺血時脂質(zhì)過氧化活躍，MDA生成增多，SOD則因消耗而減少[6-7]。

作為地域性知名藥種，在當?shù)鼐哂小吧袼帯敝Q的傳統(tǒng)蒙藥額爾頓-烏日勒(珍寶丸)是治療白脈病(類似于腦出血、腦血栓、神經(jīng)損傷、神經(jīng)根炎等腦神經(jīng)系統(tǒng)疾病)、黑脈病(類似于高血壓、高心病、冠心病等心血管疾病)和各種頑癥(疑難病)的常用蒙藥[8]。20世紀八、九十年代，學者們對額爾頓烏日勒進行了初步的藥理學研究，認為該藥具有擴張毛細血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集和抗血栓作用，以及保護神經(jīng)損傷等作用，據(jù)研究報道，額爾敦烏日勒還對氧自由基有很強的清除和抑制作用[9-10]。

本實驗研究證實蒙藥額爾頓-烏日勒改善CRA血流的功能，有效的提高兔眼視網(wǎng)膜組織中的SOD活性和降低MDA含量，對抗氧自由基介導(dǎo)的視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中具有保護作用。模型組(眼內(nèi)壓升高法)的切變率比正常組明顯增高，血粘度增高，此時血流量減少而引起眼組織缺血、缺氧及代謝功能失調(diào)至視神經(jīng)的變性、萎縮等病變損害視神經(jīng)和視野。而珍寶丸組的全血切變率值與模型組比較明顯降低，血粘度降低。從而為臨床防止視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷相關(guān)性眼病及改善視網(wǎng)膜中動脈血流藥物的篩選提供實驗性依據(jù)。

參考文獻

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基金項目：蒙藥額爾頓-烏日勒對兔眼視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后視網(wǎng)膜中動脈血流變學和血流動力學的影響及機制研究(81441108)。

【中圖分類號】R-332

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)12-0002-03

(收稿日期：2016.04.14)

Effect of Mongolian Medicine Eerdun wurile on the Hemarheology in Rabbits' Retinal Ischemia-Reperfusion Injury

BAI SiqinWurentuyaLI ChangshengWusarinaSulungaowa

Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110，China

Abstract:Objective To explore the hemarheology changes in rabbits’ retinal ischemia- repercussion Injury and the protective effect of Eerdun wurile．Methods 95rabbits were randomized into a normal control group，a chemist- repercussion model group，a Eerdun wurile group(Zhen-Bao Pills group) and a Proanthocyanidins group(PC group)．A method of elevating intraocular pressure of rabbits up to 50mm Hg for 2 hours was employed to make a retinal ischemia- reperfusion model.Except normal control group,the tissue malondialdehyde(MDA) content，the activity of superoxide dismutase(SOD) and hemarheology indicators were detected in the rabbits of each group,after Ischemia-reperfusion 1,6,12,24,48,72hour. Results Except plasma viscosity，in comparison of the model group with the normal control group,the differences in hemarheology were significant statistically(P<0.05).In comparison of theZhen-Bao Pills group,PC group with the model group,and Zhen-Bao Pills group with PC group, the differences in hemarheology were significant statistically(P<0.05).SOD:Concerning to SOD activity，the differences were significant statistically in comparison of the 24h、48h and 72h of model group with the normal control group(P<0.05)．The SOD activity of retinal tissue were increased obviously in comparison of the 24h、48h and 72h of Zhen-Bao Pills group,PC group with same time-point subgroups of the model group.MDA:Concerning to MDA content，the differences were significant statistically in comparison of the24h、48h and 72h with the 1h、6h、12h of the model groups，and the Zhen-Bao and PC group with the model group(P<0.05)．Conclusion Eerdun wurile can prevent from and treat the retinal ischemia reperfusion injury．

Key words:Eerdun wurile;Retinal;Ischemia-reperfusion;Hemarheology