雙波長HPLC法同時測定玄麥甘桔顆粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量

舒　柯

貴州省食品藥品檢驗所，貴州　貴陽　550004

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雙波長HPLC法同時測定玄麥甘桔顆粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量

舒柯

貴州省食品藥品檢驗所，貴州貴陽550004

【摘要】目的：建立以雙波長HPLC法同時測定玄麥甘桔顆粒中哈巴苷、哈巴俄苷含量的方法。方法：色譜柱Dikmaonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)；以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)為流動相，梯度洗脫：0～18min，5%A；18～25min，5%～29%A；25～55min，29%A；55～56min，90%A；56～60min，5%A；檢測波長為210nm(哈巴苷)和 278 nm(哈巴俄苷)，體積流速1ml/min；柱溫：30℃。結果：哈巴苷、哈巴俄苷的進樣量線性范圍分別為0.03931μg～0.4914μg、0.005835μg～0.04862μg，回歸方程分別為Y=20.511X+1.0747，r=0.9997、Y=122.46X+0.596，r=0.9997；二者的平均加樣回收率分別為96.0%、102.2%，RSD分別為1.3%、1.2%(n=6)。結論：所建立的雙波長法能方便、快速地對中藥中多種成分同時測定，可用于該制劑的質量控制。

【關鍵詞】玄麥甘桔顆粒；哈巴苷；哈巴俄苷；雙波長高效液相色譜法；含量測定；質量控制

玄麥甘桔顆粒由玄參、麥冬、甘草、桔梗四味藥材組成，具有清熱滋陰，祛痰利咽的功效，用于陰虛火旺，虛火上浮，口鼻干燥，咽喉腫痛。現行質量標準中除TLC鑒別外，只有甘草中甘草酸和玄參中哈巴俄苷的含量測定項目，對于中藥制劑的質量控制尚不全面。方中玄參具有清熱涼血，滋陰降火，解毒散結的功效，玄參中主要的活性化學成分為環烯醚萜類和苯丙苷素類，其中哈巴苷和哈巴俄苷為主要的環烯醚萜苷類成分，且采用雙波長HPLC同時測定玄麥甘桔顆中哈巴苷、哈巴俄苷的含量的方法未見報道。研究根據相近產品檢測方法的文獻報道[1-2]，采用雙波長高效液相色譜同時檢測哈巴苷和哈巴俄苷的含量，可更有效的控制產品質量。

1儀器與材料

1.1儀器Ultimate 3000高效液相色譜儀(DAD檢測器)；METTLER TOLEDO AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；KQ-500DA型數控超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司)。1.2材料哈巴苷(批號：111729-201204)、哈巴俄苷(批號：111730-201106)對照品由中國藥品生物制品檢定院提供。玄麥甘桔顆粒(批號：ZCA1413，云南白藥股份有限公司)。乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸為流動相B；按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為210nm、278nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min，進樣量：20μl。

時間/minAB0～1859518～255→2995→7125～55297155～56901056～60595

2.2對照品溶液的制備取哈巴苷、哈巴俄苷對照品適量，精密稱定，加30%甲醇制成每1ml含哈巴苷25μg、哈巴俄苷20μg的混合溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備取裝量差異下的本品，混勻，取適量，研細，取約2g，精密稱定，置具塞錐瓶中，精密加入80%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。2.4線性關系考察精密吸取哈巴苷對照品溶液(19.656μg/ml)2、4、7、10、25μl，吸取哈巴俄苷對照品溶液(1.945μg/ml)3、5、10、20、25 μl，依次注入液相色譜儀測定峰面積。計算回歸方程：哈巴苷對照品Y=20.511X+1.0747，r=0.9997；哈巴俄苷對照品Y=122.46X+0.596，r=0.9997，表明哈巴苷、哈巴俄苷分別在39.31～491.4ng、5.835～48.62ng范圍內進樣量與峰面積呈良好的線性關系。2.5精密度試驗取“2.2”項下的哈巴苷、哈巴俄苷對照品溶液，在“2.1”項的色譜條件下連續進樣6次，測定峰面積，計算哈巴苷、哈巴俄苷的RSD分別為1.8%、0.3%。2.6重復性試驗取同一批樣品，按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液，在“2.1”項下進行峰面積測定，得到哈巴苷、哈巴俄苷的RSD均為1.2%，結果表明該方法重復性良好。

2.7穩定性試驗取同一樣品，按“2.3”項下方法制備1份供試品溶液，溶液分別放置2、4、8、12、18h后各進樣20μl，測定哈巴苷、哈巴俄苷的峰面積，其RSD分別為1.8%、1.0%。

2.8加樣回收率試驗取已測定含量的玄麥甘桔顆粒1g，精密稱定，置于三角燒瓶中，精密加入哈巴苷、哈巴俄苷對照品混合溶液(7.416ng/ml、0.5580ng/ml)25ml，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，計算回收率，結果哈巴苷平均回收率為96.0%，RSD為1.3%；哈巴俄苷平均回收率為102.2%，RSD為1.2%。結果見表1。

2.9樣品含量測定分別取玄麥甘桔顆粒樣品6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，以外標法計算樣品中哈巴苷和哈巴俄苷的含量。結果哈巴苷、哈巴俄苷的含量分別為0.1256mg/g、0.0472mg/g。對照品、供試品色譜見圖1。

表1　加樣回收率試驗結果

3討論

在供試品溶液制備中，分別對超聲提取和回流提取進行了比較，結果顯示回流提取和超聲提取沒有顯著性差異，故選用超聲提取。對超聲提取時間15～60min進行了比較，結果顯示提取30min后，樣品中哈巴苷、哈巴俄苷基本提取完全，故采用超聲提取30min。流動相選擇上曾選用不同比例的乙腈-甲酸水溶液、乙腈-醋酸水溶液為流動相，但基線不穩定，哈巴苷、哈巴俄苷與相鄰色譜峰不能完全分離且峰形不對稱。參照中國藥典[3]及文獻[4]的方法，采用乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，方得滿意結果。

試驗中，將哈巴苷、哈巴俄苷對照品混合溶液，在DAD進行全波長紫外掃描。結果，哈巴苷在210nm處，哈巴俄苷在278nm處吸收值最大，并在此處無干擾，故選擇雙波長，在210nm測定哈巴苷，在278nm測定哈巴俄苷。

中藥復方制劑成分復雜，有效成分往往難以明確，其質量控制是一項系統復雜的工程。提高中藥質量控制的水平，增加質量標準對于保證產品的質量，保證制劑的穩定性、安全性和有效性，有著重要意義。控制中藥復方制劑最有效的手段是采用多種成分同時進行定量測定。玄麥甘桔顆粒相關的研究文獻多限于選擇單獨測定哈巴苷或者哈巴俄苷含量，本研究采用的雙波長高效液相色譜法，同時測定玄麥甘桔顆粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量，該方法靈敏度、精密度均能達到檢測要求，進一步為企業提供了質量控制，同時作為一種質控手段從操作簡便性上具有一定的意義。

參考文獻

[1] 李振東，徐位良，羅嬌艷. HPLC法測定玄麥甘桔顆粒中哈巴俄苷與肉桂酸含量[J]. 廣東藥學院學報，2008,24(2):130-132.

[2] 蔣華科，陳純，符孝軍.高效液相色譜法測定玄麥甘桔顆粒中甘草酸的含量[J].中南藥學,2012,10(2):103-105.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫藥科技出版社,2010:102.

[4] 楊輝.雙波長UPLC法同時測定艾滋病口腔含簌液中梓醇、哈巴苷和哈巴俄苷的含量[J].天中國藥房,2015,26(24):3414-3415.

作者簡介：舒柯(1984-)，女，貴州惠水人，主要從事藥品檢驗和質量標準的研究。E-mail：shuke1210@163.com

【中圖分類號】R286.0

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)10-0031-03

(收稿日期：2016.03.24)

Simultaneous Determination of harpagide and harpagoside two components inXuanmai Ganjie grains by Dual-wavelength HPLC

SHU Ke

Guizhou Institute for Food and Drug Control，Guiyang 550004,China

Abstract:Objective To establish a method for Simultaneous Determination of the content of harpagide and harpagoside in Xuanmai Ganjie grains. Method The analysis was carried on a column of C18(Dikmaonsil C18,250mm×4.6mm,5μm)at 30℃;acetonitrile(A)-0.1%Phosphoric Acid(B) by gradient elution (0～18min,5%A;18～25min,5%～29%A;25～55min,29%A;55～56min,90%A;56～60min,5%A) as mobile phase;the flow rate was 1.0ml/min;The detection wavelength was set at 210 nm for harpagide，and at 278 nm for harpagoside . Results The linear ranges of harpagide and harpagoside were 0.03931μg～0.4914μg(r=0.9997)、0.005835μg～0.04862μg(r=0.9997)，the regression equation as Y=20.511X+1.0747, r=0.9997、Y=122.46X+0.596，r=0.9997. Average recoveries of them were 96.0%,102.2%,RSD were 1.3%,1.2%,respectively(n=6).Concluslon Dual wavelength HPLC method can be used for simultaneous determination of ingredients of traditional Chinese medicine，and can satisfy the requirements of quality control.

Key words:Xuanmai Ganjie grains; harpagide; harpagoside; Dual-wavelength HPLC; Content determination; Quality control