灰樹花的培養特性與液體菌種栽培技術思考

肖建華

（福建省三明市清流縣嵩口林業站）

灰樹花的培養特性與液體菌種栽培技術思考

肖建華

（福建省三明市清流縣嵩口林業站）

隨著經濟的發展和人們生活水平的提高，人們對生活質量和生活環境也有了更高的要求，為了滿足社會發展和人們生活的需求，對生物植被的研究逐漸深入。灰樹花作為代表性的生物菌種不僅起著生態研究的作用，還可以滿足食用和醫用的需要，為了保證灰樹花的可持續生長繁殖和人們生活的需求，需要對其進行良好的培養和栽培。本文通過多種實驗的方法簡單的介紹了灰樹花的培養特性，對灰樹花液體菌種栽培技術進行分析，以供參考。

灰樹花；培養特性；液體菌種栽培技術

灰樹花也是貝葉多孔菌、蓮花菇、舞茸等別稱，可以直接食用，也可以形成藥物成分，但是由于其生長環境特殊，在海拔較高的地區生長較好，所以我國很多地方不存在灰樹花這一物種；其次灰樹花主要在中溫型的環境中生長，具有一定的局限性，為了更好的發揮其經濟效益和生態效益，就需要利用先進的科學技術對其進行培養和栽培。目前我國對灰樹花的研究還處于初步發展階段，對液體菌種的栽培還不夠成熟，需要進一步的完善和發展，在自我實驗探索的同時借鑒國外的先進技術和豐富經驗，然后結合我國的環境和灰樹花的培養特性進一步的改進和完善，使其對灰樹花的培養能夠達到預期的效果，促進其繁殖生長。

1 灰樹花的培養特性

1.1 實驗材料

①PDAA培養基：選擇去皮的馬鈴薯201g，瓊脂21g、葡萄糖21g，然后加入一定量的水，一般來說需要1000mL的水。②馬鈴薯半組合培養基：馬鈴薯半組和培養基所需的馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖以及水的含量沒有的差異，在選擇上可以采用同樣的量，但是需要增加適當的蛋白胨和磷酸二氫鉀，一般來說需要增加5g的蛋白胨和5g的磷酸二氫鉀即可。③MEA培養基：選取12.6g的麥芽糖、20g瓊脂、然后加入1000mL左右的水。④馬鈴薯綜合培養基：采用綜合的方法時需要的馬鈴薯和瓊脂都相對較多，同時也需要增加適量的硫酸鎂和維生素B1等相應物質[1]。

進行二級液體菌種培養基的選擇：①選取5%左右的玉米粉、2%左右的葡萄糖以及0.2%的蛋白胨，增加適量的磷酸二氫鉀和硫酸鎂，形成一個玉米粉、葡萄糖、蛋白胨培養基，并且保證pH值在6～7之間，保證其酸堿性適中。②將玉米粉調整為馬鈴薯，其他成分含量相同，形成一個馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨培養基。③將玉米粉改為麥麩，增加米糠，其他成分極其相應含量不變，形成的麥麩、葡萄糖、蛋白胨培養基其酸堿性不變，pH值在6～7之間，呈現穩定的狀態。④將葡萄糖換為蔗糖，仍然使用玉米粉，但是玉米粉的含量需要適當減少，調整到1%即可，增加2%的蔗糖和3%的酵母膏，將磷酸二氫鉀和硫酸鎂的成分適當降低[2]。⑤直接采用酵母膏，形成一個酵母膏、葡萄糖、蛋白胨培養基時葡萄糖含量降低，增加酵母膏成分，磷酸二氫鉀和硫酸鎂的成分也隨之降低。

1.2 研究方法

在無菌條件下采用實驗的方法對灰樹花的培養特性進行分析。①用一定直徑大小的打孔器竊取質地相同、數量相等的灰樹花菌塊，然后將這些在PDA培養基上培養好的灰樹花菌塊在上述中的PDA、馬鈴薯半組和以及MEA培養基上進行接種工作，為了保證實驗的準確性，一般會進行三次接種；②將培養箱放置于中溫型的環境中進行培養，定期對灰樹花菌塊的特性進行觀察分析，包括灰樹花的生長速度、菌落的顏色形態以及周圍區域的結構變化等宏觀特性和新生菌絲體、氣生菌絲體的類型和分割情況，擔子和無性孢子的的生長結構和特點等微觀特性，通過宏觀和微觀的結合更好的了解灰樹花的特性，為液體菌種的栽培提供一定的參考[3]。

通常對三方面進行檢測，包括酚氧化酶檢測、不同環境的檢測以及不同pH值對菌絲生長的影響。酚氧化酶檢測研究方法主要是將一定量的愈創木酚的乙醇溶液滴在菌落的邊緣，如果檢測區域出現變化，呈現紅色狀態，就說明菌落中有酚氧化酶的存在，如果檢測區域無明顯變化，酚氧化酶存在的可能性較小；不同溫度的檢測，通過將接種后的灰樹花菌塊放置于不同的溫度下進行培養，觀察菌絲的生長顏色、形態等生長情況，然后觀察不同溫度對菌絲生長的影響；不同pH值對菌絲生長的影響，pH值的研究需要采用馬鈴薯綜合培養基，將pH值進行不同酸堿度的設置，然后將接種后的菌落放置中溫的環境下，用不同的pH值進行調試，對菌落的生長半徑進行觀察分析。

2 灰樹花液體菌種的栽培技術

2.1 一級種培養基的篩選

根據材料PDA、馬鈴薯半組合、馬鈴薯綜合培養基選擇培養試管斜面的一級種，觀察不同培養基對菌落生長速度和生長趨勢的影響；然后將性質相同數量相等的灰樹花菌塊在試管斜面的中心分別進行接種工作，放置中溫型的環境下重復試驗后，在一定的時間內對菌落的生長情況進行觀察分析，從而選擇適合一級種生長的培養基[4～5]。

2.2 二級液體菌落培養基的選擇

上文中提到五種二級液體菌落培養基，將這些培養基注入100mL的三角瓶中，培養基的注入量一般低于三角瓶的容量；然后將PDA培養基上的菌落放入液體培養基中，將其封好后放置在中溫型的環境中對菌絲的生長情況進行檢測，根據菌絲的生長情況選擇合適的液體菌落培養基，從而促進菌落的生長。

2.3 三級種栽培袋的制作與培養

栽培袋為菌落的生長提供了良好的環境和條件，一般分為拌料、裝袋、高壓滅菌、接種和培養這六個步驟。首先要對栽培袋進行高壓滅菌工作，然后將液體菌種導入已經滅菌的栽培袋中，將栽培袋封好，放入避光適溫的環境中，在保證培養箱濕度、溫度適合的前提下進行培養，對菌絲的生長情況進行觀察[6]。

3 實驗結果

3.1 在PDA培養基上的培養特性

分別對菌落和菌絲在PDA培養基上的培養特性進行觀察。菌落特性表現為生長速度沒有達到快速的標準，呈中速平穩的狀態；生長新區均勻，沒有出現散落稀疏的狀況，有些氣體菌絲升高的濃密性較好能夠延伸到生長區的邊緣；菌落的顏色呈現白色狀態，初期為毛絨狀，經過長時間的培養后逐漸轉變呈現氈狀，而且愈創木酚在檢測后呈現紅色，說明菌落中含有酚氧化酶。菌絲的特征表現為菌絲的形態、間隔情況等，通過實驗發現生長新區的菌絲呈現透明狀態，而且大部分為簡單分隔狀；后壁的纖維菌絲與新生區相比，菌絲寬、分支少，氣生菌絲和新生區菌絲狀態差異性很小，這些不同的菌絲和不同的環境呈現的狀態也不相同[7]。

3.2 不同溫度對灰樹花菌絲生長的影響

通過在不同溫度下進行培養實驗，發現在5℃以下菌絲不生長，在中溫環境下生長速度較快，生長半徑較大，如果溫度過高菌絲的生長又會呈現下滑趨勢，詳情見圖1。

圖1 不同溫度對灰樹花菌絲生長情況的影響

3.3 不同pH值對灰樹花菌絲生長的影響

將 pH 分為不同的等級，為 4、5、6、7、8、9 這六個等級，然后進行不同等級菌落的培養，發現pH值在4～5之間時菌絲的生長呈上升趨勢，在5～6之間生長情況最好，菌絲生長半徑最大，超過5后呈現下滑趨勢，詳情見圖2。

圖2

4 結束語

綜上所述，灰樹花的培養特性具有一定的特殊性，傳統的栽培技術已經不能滿足灰樹花成活和生長的需要，為了提高灰樹花的成活率好生長繁殖速度，需要完善栽培技術，液體菌種栽培技術能夠生產大量的菌絲，在栽培過程中能夠不僅能夠縮短生長周期，還在一定程度上保證了灰樹花的生長質量，所以液體菌種栽培技術的應用也就成為了必然選擇。筆者提出，灰樹花的培養在不同的情況下會呈現不同的特性，本文通過多種培養基的實驗體現了灰樹花的宏觀和微觀特性，從而根據這些數據分析出適合灰樹花生長的培養基；液體菌種栽培技術對于灰樹花的培養和栽培起著至關重要的作用。希望通過本文的簡單分析能夠幫助相關工作人員更好的開展研究工作。

[1]王玉，李政，郝利民，等.培養基優化提高灰樹花菌絲體的研究[J].北方園藝，2011，19（4）：190～191.

[2]汪維云，吳梧桐.灰樹花深層培養的生長動力學與計算機模擬[J].生物數學學報，2002，17（4）：494～498.

[3]杜巍，華澤釗.灰樹花的深層培養工藝及其影響因素的研究[J].農業工程學報，2004，20（2）：231～234.

[4]劉偉民，徐立平，郭春梅，等.灰樹花在米糠培養基上固態發酵產多糖研究[J].食品科學，2010，31（23）：238～242.

[5]李磊，王衛國，郭家瑞，等.幾株灰樹花菌株液態發酵產多糖性能的比較[J].河南工業大學學報（自然科學版），2010，31（2）：71～75.

[6]灰樹花的醫療保健作用和人工栽培[J].江蘇農業科學，2009，27（5）：175～177.

[7]律鳳霞.灰樹花一級菌及栽培菌種培養基的篩選優化[J].北方園藝，2010，18（7）：167～168.

S567.3

A

1005-7897（2016）08-0091-02

2016-4-9

肖建華（1964-），男，漢族，江蘇人，助理工程師，中專，從事營林生產林改管理護林防火等工作。