秦皇島女性人乳頭瘤病毒型別分布特征分析

樊靜 于丹軍 李淑英

秦皇島女性人乳頭瘤病毒型別分布特征分析

樊靜 于丹軍 李淑英

目的探討秦皇島地區女性感染人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)的流行和型別分布情況，為預防HPV的感染和宮頸癌的診治提供理論依據。方法應用導流雜交(RDB)方法對2014-10—2015-10在秦皇島市第一醫院、秦皇島市第四醫院婦科門診及住院治療的1 561例患者標本進行HPV分型檢測。結果1 561例女性中HPV感染陽性檢出率為38.57%，其中高危型別的陽性檢出率29.60%(包括多重高危感染)，低危型別的陽性檢出率為9.03%(包括多重低危感染)。在高危HPV亞型中，前三位的依次為HPV16(21.4%)，52(9.47%)，58(7.97%)，低危型別中依次是HPV6(11.6%)，HPV11(6.15%)，HPVcp8304(4.15%)。在不同的年齡段人群中，HPV陽性率有明顯的差異，17～21歲年齡段人群HPV陽性率最高為44.4%，與其他組相比差異有統計學意義(P＜0.05)。HPV高危型單一感染檢出357例，檢出率為77.44%，多重感染104例，檢出率為22.56%；隨著宮頸病變級別的增高，高危型HPV多重感染的檢出率也增高，宮頸炎組32.55%，CINⅠ37.90%，CINⅡ42.06%，CINⅢ54.81%，宮頸癌組69.14%各組之間差異有統計學意義(P＜0.05)。結論HPV16、52、58是秦皇島地區的高危HPV感染的主要型別，HPV6是HPV低危型感染的主要型別。隨著宮頸病變的惡性程度的增加，高危HPV的檢出率也隨之增加，多重感染的檢出率也隨之增加。

人乳頭瘤病毒；反向斑點雜交；宮頸癌

人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是危害人類健康的重要感染因素之一，它是引發生殖器疣和宮頸癌的主要病因[1]。它包含了大概8 000個堿基對，具有種屬特異性，屬于雙鏈閉環的小DNA病毒。包括高危亞型和低危亞型，高危亞型與宮頸癌的發生發展密切相關，而低危亞型則常引起外生殖器濕疣等良性病變[2]。近年來的研究表明HPV有很強的地域性，不同國家和地區的感染率及型別均存在著差異[3]。本文就秦皇島女性的HPV感染情況進行檢測，以了解該地區的HPV型別情況和流行病學特征，為宮頸癌的防治提供理論參考。

1 料與方法

1.1 標本來源收集2014-10—2015-10在秦皇島市第四醫院、秦皇島市第一醫院婦產科門診就診及住院治療的宮頸炎、宮頸癌及疑似患者標本1 561例，年齡17～72歲，平均年齡45歲。

1.2 標本采集TCT檢查和活組織檢查后，選擇正常范圍、非典型鱗狀上皮細胞、低級別上皮內病變、高級別上皮內病變的標本。用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去，將宮頸刷深入宮頸處，輕輕搓動宮頸刷使其順時針旋轉3～5圈，慢慢取出宮頸刷，放入裝有專用細胞保存液的樣本管中，活檢組織標本由婦科醫生取出及放入福爾馬林固定后送檢標本，由病理科醫師進行分級，若送檢樣本不能馬上檢測的置于4℃冰箱保存，并在一周內完成檢測。

1.3 檢測方法HPV分型采用RDB反向斑點雜交方法進行分型檢測。

1.3.1 DNA提取將取樣后的標本轉移至微量離心管中，1 400 r/min離心1 min。棄上清，利用凱普生物化學科技共色生產的基因組提取試劑盒進行HPV-DNA提取。

1.3.2 PCR擴增取1 μL提取好的DNA樣本作為模本進行PCR擴增，20℃10 min，95℃9 min，95℃20 min，55℃30 min，72℃30 min，40個循環，72℃延伸5 min。

1.3.3 導流雜交利用Hybrmax核酸分子快速雜交儀進行導流雜交，95℃把25 μL的PCR產物加熱5 min，然后立即冰水浴至少2 min，進行變性；將已變性的DNA樣本加入0.5 mL預熱至45℃的雜交液，在導流雜交儀45℃溫育10 min后進行導流雜交，雜交后再用0.8 mL雜交液沖洗膜3次，再用0.8 mL蒸餾水沖洗膜，取出雜交膜在1 h內分析結果。

1.4 結果判斷RDB檢測結果：藍紫色圓點為清晰可見的陽性點，根據膜條HPV分型分布圖，判斷陽性點為何種HPV病毒類型。病理組織學及細胞學檢測：由病理科醫師閱片，并就宮頸組織病變結果進行病理組織學分級。

1.5 統計學處理采用SPSS 14.0軟件進行統計學處理，應用χ2檢驗，把P＜0.05作為差異有統計學有意義的標準。

2 結果

2.1 HPV亞型分布1 561例女性就診患者中共檢測到的HPV陽性者602例，HPV感染陽性率為38.57%(602/1 561)，其中高危型別的陽性檢出率29.60%(461/1 561包括多重高危感染)，低危型別的陽性檢出率為9.03%(141/1 561包括多重低危感染)。在被檢測的16個高位HPV亞型中，前三位的依次為HPV16(21.4%，129/462),52(9.47%57/462)，58(7.97%48/462)感染，低危型別中依次是HPV6(11.6%70/141)，HPV11(6.15%37/141)，HPVcp8304(4.15%25/141，表1)。

表1 602例HPV陽性結果亞型分布圖(n)

2.2 不同年齡段的HPV感染情況不同的年齡段人群HPV陽性率有明顯的差異，其中感染率前三位的年齡段是17～21歲，22～26歲，42～46歲的HPV高危型陽性檢出率分別是44.4%、36.22%、30.32%，其中17～21這一年齡段人群的HPV陽性率最高，與其他組相比差異有統計學意義(P＜0.05，表2)。

表2 不同年齡段HPV陽性分布(n)

2.3 高危型HPV檢出率HPV高危型單一感染檢出357例，檢出率為77.28%，雙重感染75例，檢出率為16.23%，三重感染22例,檢查率為4.76%(表3)。

表3 高危HPV感染者中多重感染陽性率(n)

2.4 高危型HPV多重感染的檢出率隨著宮頸病變連續的進展，高危型HPV多重感染的檢出率也增加，宮頸炎組8.37%，CINⅠ40.19%，CINⅡ39.78%，CINⅢ46.56%，宮頸癌組65.31%；各組之間差異有統計學意義，(P＜0.05，表4)。

表4 宮頸各級病變中HPV陽性的檢出率[n(%)]

3 討論

HPV是女性中感染較為常見的性傳播病毒，目前發現了100余種HPV亞型，有35種與生殖道疾病有關，但大多數感染是一過性的，可被自身的免疫系統清除，僅有一少部分高危(HR-HPV)持續感染者可發展為宮頸上皮內瘤變(CIN)進而發展為浸潤癌[4]。近年來，越來越多的研究顯示，宮頸癌的主要致病因素之一是HPV病毒，尤其是其高危型[5]的持續感染。由于在30歲以下性活躍的年輕婦女HPV感染較為常見，所以宮頸癌的發病率逐年上升且有年輕化的趨勢，已經成為婦科腫瘤中的第二大腫瘤[5]。本研究采用RDB雜交技術對秦皇島市地區1 561例女性人乳頭瘤病毒的性別分布進行21種HPV分型檢測，研究結果顯示，HPV的感染率為38.57%，高于俞志紅等[6]報道的24.03%，HPV陽性的單一感染357例，檢出率為77.28%，多重感染105，感染率為22.72%，在HPV高危型的感染中以HPV16，、52、58型為主，這一結果有別于歐洲國家，以HPV16和HPV18為主，亞洲地區HPV52、HPV58所占比例要高于HPV45、HPV31、HPV33型[7]，與本文一致。在中國大陸主要以HPV16亞型為主，居第一位，18亞型居第二位，58和52亞型居第三第四位[8]與中國醫學科學院腫瘤研究所研究中表明生殖器疣患者HPV16和18型31型是最主要的感染型別[9]，存在著一定差異，提示不同的地區感染高危的型別可能存在差異。根據國外的大多數學者的研究發現，35歲以下的婦女被稱為年輕婦女宮頸癌[10-12]，在本文中17～21歲這一階段年齡的HPV陽性的感染率最高，具有年輕化的趨勢，與相關資料報道一致[12]。因此，宮頸癌的預防和診治需要做定期有效的的HPV篩查，尤其是年輕的婦女這個特殊的群體，才能真正的減少宮頸癌的發病率。隨著宮頸病變級別的增高，多重感染檢出率也增加。Lee等[13]的研究發現，如果感染單一型別HPV，患宮頸癌的風險會增加19.9倍，但是如果感染HPV多重型別，患宮頸癌的風險將會增加至31.80倍。因此，制定本地區的HPV型別分布特點，為該地區的疫苗防治提供了有力的理論依據，也為宮頸癌的防治和篩查提供有效的檢測方法。

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ObjectiveTo investigate the status of infection as well as distribution of human papillomavirus(HPV)types among females in Qinhuangdao and provide theoretical basis for HPV prevention and treatment of cervical cancer.MethodsReverse dot blot(RDB)method was adopted to conduct the HPV typing test in 1 561 sufferer specimens who were collected from gynecological outpatients and inpatients between October 2014 and October 2015 at Qinhuangdao No.1 Hospital and Qinhuangdao No.4 Hospital.ResultsThe positive rate of HPV infection was 38.57%(602/1 561)in 1561 women，among which the positive rate of high-risk type was 29.60%(462/1 561，including multiple high-risk infection)，the positive rate of low-risk type was 9.03%(140/1 561，including multiple low-risk infection).Among the detected high-risk HPV subtypes，the top three were HPV16 infection(21.4%，129/462)，HPV52 infection(9.47%，57/462)，and HPV58 infection(7.97%，48/462).The top three of low-risk HPV subtypes were HPV6(11.6%，70/140)，HPV11(6.15%，37/140)，and HPVcp8304(4.15%，25/140).There were obvious differences between the HPV-positive rates in different age groups，among which the age group of 17～21years old had the highest positive rate of 44.4%and the differences with other age groups were of statistical significance(P＜0.05).357 cases had high-risk HPV single infection with a detection rate of 77.44%，and 104 cases had high-risk HPV multiple infection with a detection rate of 22.56%.With the increase of cervical lesions，the detection rate of high-risk HPV multiple infection increased，32.55%in the inflammation group，37.90%in the CINⅠgroup，42.06%in the CINⅡgroup，and 54.81%in the CINⅢgroup，and 69.14%in the cervical cancer group.The differences between the groups were of statistical significance(P＜0.05).ConclusionHPV16，HPV52 and HPV58 are the main types of high-risk HPV infection in Qinhuangdao，and HPV6 is the main type of low-risk HPV infection.With the increase of the malignant degree of cervical lesions，the detection rate of high-risk HPV also increases，and the detection rate of multiple infection increases as well.

Human papillomavirus(HPV)；Reverse dot blot(RDB)；Cervical cancer

2016-03-29)

1005-619X(2016)06-0667-04

10.13517/j.cnki.ccm.2016.06.048

066300華北理工大學基礎醫學院(河北省慢性疾病重點實驗室，唐山市慢性病臨床基礎研究重點實驗室(樊靜，李淑英)；066000秦皇島市第四醫院(樊靜)；066000秦皇島市第一醫院(于丹軍)