高危型人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒-Care HPV用于宮頸癌及癌前病變篩查的臨床價值

方　婧，洪　穎

(南京大學醫學院附屬鼓樓醫院婦產科，江蘇 南京 210008)

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高危型人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒-Care HPV用于宮頸癌及癌前病變篩查的臨床價值

方婧，洪穎

(南京大學醫學院附屬鼓樓醫院婦產科，江蘇 南京 210008)

[摘要]目的評價care HPV用于宮頸癌及癌前病變篩查的臨床價值。方法收集2010年至2012年南京鼓樓醫院婦科就診的年齡在30～59歲之間的婦女宮頸樣本，行care HPV、第二代雜交捕獲技術(HC2)、HPV聚合酶鏈反應(HPV-PCR)及宮頸液基細胞學(TCT)檢查，TCT≥ASC-US者行陰道鏡宮頸活檢及必要時宮頸管診刮，以組織病理學為金標準。病理診斷≥CIN2者為高危病變組，炎癥/CIN 1為良性病變組。結果共收集404例有效樣本。高危組42例、良性組50例，正常組312例。care HPV和HC2檢測結果的一致性為Kappa=0.833(P<0.0001)，一致率93.81%；care HPV和HPV-PCR檢測結果的一致性為Kappa=0.707(P<0.0001)，一致率88.12%；care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度為85.71%，特異度為83.15%。結論care HPV與HC2、HPV-PCR試劑具有高度一致性。care HPV在檢出HPV感染上具有很好的靈敏度和特異性，檢測耗時短，有望成為醫療資源相對貧乏地區子宮頸癌及癌前病變篩查的主要方法。

[關鍵詞]人乳頭瘤病毒(HPV)；care HPV檢測；宮頸癌；宮頸癌前病變

宮頸癌是導致女性死亡的常見腫瘤之一，2012年全球宮頸癌發病人數52.8萬，年死亡人數26.6萬。隨著宮頸癌篩查技術的發展和普及，在發達國家，宮頸癌的發病率和死亡率在過去50年里降低了75%，而85%的宮頸癌發生在發展中國家。我國每年宮頸癌新發病例在13萬以上[1]。宮頸癌篩查以細胞學為基礎，而細胞學檢測技術人員需經長期嚴格培訓才能穩定、準確判別結果，在衛生資源較少的國家和地區，實施該方法困難，不適于醫療資源不足地區的大規模人群篩查[2]。如何找到適合發展中國家使用的簡單、快速、有效并且便宜的篩查方法成為子宮頸癌防治中亟待解決的問題[3]。

1資料與方法

1.1研究對象

2010年至2012年于南京大學醫學院附屬鼓樓醫院婦科門診就診的30～59歲女性，有性行為史，宮頸存在，排除妊娠狀態，自愿接受宮頸癌篩查。孕婦在妊娠結束后8周可入組。

1.2標本采集和臨床檢查

收集2份宮頸脫落細胞標本待檢，用于Care HPV、HC2/HPV-PCR檢測。依照病人入組順序依次編號，奇數的研究對象先取care HPV標本，偶數的研究對象先取HC2/HPV-PCR標本。HC2和HPV-PCR檢測共用一管標本。接著再采集一份宮頸脫落細胞標本，進行液基細胞學(LBC)檢測。LBC結果陰性者，進入正常組； LBC≥ASC-US者，接受陰道鏡檢查，若鏡下發現病變，則進行直接活檢。當陰道鏡檢查不滿意時(看不到完整的鱗柱交界，或病變伸入頸管內觀察不到其全貌，或活檢鉗不能觸及病變，或疑有腺體病變時)，則進行宮頸管診刮術(ECC)。陰道鏡下正常或活檢結果正常者進入正常組，陰道鏡下為炎癥或活檢結果為炎癥/CIN 1者進入良性病變組；活檢結果≥CIN 2者進入高危病變組。

1.3標本編盲及檢測

采用隨機盲法編號，care HPV、HC2/HPV-PCR檢測各自獨立進行。

1.4 Care HPV檢測技術原理

Care HPV是一種快速HPV-DNA測定方法。主要原理為抗體結合順磁性磁珠技術。使用裂解液溶解樣本細胞，暴露HPV-DNA并使其解鏈為單鏈DNA；將單鏈DNA與全長的互補RNA雜交，形成HPV-DNA/RNA雜交物；將包被有單克隆抗體的磁珠與HPV-DNA/RNA雜交物混合；加入與單克隆抗體結合的堿性磷酸酶；加入與堿性磷酸酶結合的顯色底物，顯色底物產生的光強度反映樣本中所包含的HPV-DNA數量。診斷結果用相對光單位(RLU)與最小陽性對照的RLU均值的比(RLU/CO)來表示。診斷陽性標準定義為標本中檢出的HPV-DNA 0.5pg/mL。截斷點為RLU/CO 1.0，≥1.0時認為HPV-DNA檢測陽性，<1.0時為陰性。該技術可定量檢測14種高危HPV型別(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)，單次檢測樣本量可達80余份，檢測時間約2.5小時。檢測過程由中國醫學科學院腫瘤醫院實驗員進行質控。

1.5統計學方法

使用SPSS16.0統計軟件分析，計算Kappa值和一致率，比較care HPV檢測試劑和已被SFDA批準的HC2、HPV-PCR檢測試劑的一致性；以陰道鏡活檢的病理診斷為金標準，計算care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值。

2結果

最終獲得404例有效樣本。其中高危組(≥CIN 2)組42例、良性病變組(炎癥/ CIN 1)組50例，正常組有312例。

2.1 Care HPV、HC2和HPV-PCR檢測的陽性率

Care HPV、HC2和HPV-PCR檢測的陽性率分別是24.01%(97/404)、25.25%(102/404)和31.93%(129/404)。

2.2 Care HPV和第二代雜交捕獲技術檢測結果的一致性

Kappa=0.833(P<0.0001)，一致率=379/404=93.81%(95%CI：91.13%～95.87%)，見表1。

表1Care HPV 檢測和HC2檢測的一致性[n(%)]

Table 1 Consistency between care HPV test and HC2 test [n(%)]

2.3 Care HPV和HPV-PCR檢測結果的一致性

Kappa=0.707(P<0.0001)，一致率=356/404=88.12%(95%CI：84.68%～91.01%)，見表2。

2.4 Care HPV檢出≥CIN 2的準確性和有效性

Care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度為85.71%(95%CI：72.64%～94.00%)；特異度為83.15%(95%CI：79.03%～86.74%)；Yonden指數為68.86%(95%CI：64.34%～73.38%)；陽性預測值為37.11%(95%CI：27.94%～47.04%)；陰性預測值為98.05%(95%CI：95.98%～99.20%)，見表3。

表2Care HPV 檢測和HPV-PCR檢測的一致性[n(%)]

Table 2 　　Consistency between careHPV test and HPV-PCR test[n(%)]

表3Care HPV檢出≥CIN 2的準確性和有效性[n(%)]

Table 3 Accuracy and validity of careHPV in detecting lesions ≥CIN 2[n(%)]

2.5 Care HPV檢出≥CIN 2的ROC曲線

Care HPV檢出≥CIN 2的ROC曲線下面積為：Z=0.844(95%CI：0.779～0.909，P<0.0001)。ROC曲線下面積越大，診斷價值越高，見圖1。

圖1Care HPV檢出≥CIN 2的ROC曲線

Fig.1ROC curves of careHPV in detecting lesions ≥CIN 2

3討論

3.1 HPV-DNA檢測作為宮頸癌初篩方法的理論支持

宮頸癌是唯一病因明確的惡性腫瘤，其發病與高危型人乳頭狀瘤病毒(HPV)持續感染有關[4]。2002-2012年世界衛生組織(WHO)發布的宮頸癌流行病學數據表明，宮頸癌的年死亡病例數近十年沒有明顯下降，這說明目前以細胞學為基礎的宮頸癌篩查方案遇到了瓶頸，以HPV為基礎的宮頸癌篩查策略可能帶來新的希望[5]。2013年WHO制定最新《宮頸癌前病變篩查和管理指南》，重點推薦HPV-DNA檢測作為宮頸癌初篩方法[6]，2015年的《美國宮頸癌篩查過渡期指南》也推薦將高危型HPV初篩作為目前宮頸癌篩查的替代方案，該指南中指出高危型HPV初篩與細胞學篩查相比在相同的時間間隔可以確保更低的罹患宮頸癌的風險[7]。2014年5月，在中國召開的HPV和宮頸癌篩查策略研討會上，專家達成共識：對以人群為基礎的篩查，HPV檢測更適用于一線初篩；而對有經濟能力的個體篩查，HPV-細胞學聯合檢測仍是最佳選擇。然而，中國廣大欠發達地區經濟能力有限，細胞學檢查醫師匱乏，用HPV聯合細胞學方法來篩查宮頸癌尚難以推廣[8]。國內外均有學者在其研究中指出，HPV檢測作為宮頸癌初篩的方法，可以在尚未建立細胞學篩查體系的地區應用[9-10]。

3.2 Care HPV檢測的優勢

HC2及HPV-PCR是目前臨床廣泛應用的HPV-DNA檢測方法，但該兩項方法不僅需要先進的檢測設備，而且費用較高，很難在發展中國家的普通人群中推廣。2003年到2007年間，在中國和印度開展了一項由Bill & Melinda Gates基金會資助的國際研究，力求研發適用于發展中國家的全新、快速、經濟的宮頸癌篩查方法，其中一種方法就是本研究中使用的高危型HPV核酸檢測試劑盒-careHPV 檢測[11]。careHPV是特別為醫療資源薄弱地區的30歲以上婦女宮頸癌篩查所設計的，該方法可定量檢測14種高危HPV型別(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)，2.5小時可以檢測80余份標本，提高了檢測速度和效率，篩查者當天即可得到HPV檢測結果，并采取相應的隨訪和治療手段，對于資源貧乏地區成功進行完整的篩查-治療程序十分重要。與HC2/HPV-PCR相比，其優點在于該檢測簡單易行，檢測時間短，取樣人員范圍寬。2009年由比爾及梅林達·蓋茨基金會資助的、適合于發展中國家和地區的HPV快速篩查技術( careHPV) 在中國獲得成功，為發展中國家和地區宮頸癌的早診早治提供了行之有效的手段[3]。張榮等[12]在對山西襄垣地區婦女運用careHPV進行宮頸癌篩查時指出，careHPV是一種簡單、快捷，受檢者易于接受的HPV-DNA檢測方法，可由新培訓的無實驗室經驗、受教育程度較低的技術員取樣，檢測時對實驗室條件要求較HC2低，只需要適宜的溫濕度，充足的光線，一定的空間，對水電設備無特殊要求，價格亦低于HC2。

3.3本次研究結果分析

本研究數據顯示care HPV與HC2試劑、HPV-PCR試劑具有高度一致性，care HPV與HC2檢測的Kappa值為0.833(P<0.0001)，一致率為93.81%(95%CI：91.13%～95.87%)；與HPV-PCR檢測的Kappa為0.707(P<0.0001)，一致率為88.12%(95%CI：84.68%～91.01%)。Care HPV與HC2對HPV感染陽性的檢出率差異無統計學意義(P>0.05)。care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值分別為85.71%(95%CI：72.64%～94.00%)、83.15%(95%CI：79.03%～86.74%)、37.11%(95%CI：27.94%～47.04%)和98.05%(95%CI：95.98%～99.20%)。Care HPV檢出≥CIN 2的靈敏度介于HC2 96.1%與傳統巴氏圖片53%之間，特異度低于兩者。通過繪制ROC曲線和計算ROC曲線下面積來反映care HPV的診斷價值，得出的ROC曲錢下面積為Z=0.844(95%CI：0.779～0.909，P<0.0001)。研究中出現HPV PCR檢測和care HPV陽性率的差異有統計學意義(P<0.05)，HPV-PCR檢測高于care HPV，出現以上結果可能與取樣順序及實驗室誤差有關。因HC2和HPV-PCR共用一個標本，需從HC2管中分出50微升樣品用于HPV-PCR檢測，同時標本檢測過程前后歷時數天，標本的反復凍溶也可能會對檢測結果造成一定影響。

綜上，本研究結果顯示care HPV與HC2試劑、HPV-PCR試劑具有高度一致性，篩查和治療可在一次訪視中同時完成，有良好實際應用價值，有希望代替HC2和HPV-PCR技術用于醫療資源貧乏或薄弱地區婦女的宮頸癌篩查，濃縮高危人群，實現早診早治的二級預防目標。

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[專業責任編輯：安瑞芳]

[收稿時間]2016-01-23

[作者簡介]方婧(1986-)，女，住院醫師，碩士畢業，主要從事婦科腫瘤的研究。

[通訊作者]洪穎，教授。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.014

[中圖分類號]R73.3

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5293(2016)04-0457-03

Clinical value of high-risk HPV nucleic acid detection kit careHPV in screening of cervical cancer and precancerous lesions

FANG Jing, HONG Ying

(Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Drum Tower Hospital Medical College of Nanjing University,Jiangsu Nanjing 210008, China)

[Abstract]Objective To assess the clinical value of careHPV test in screening of cervical cancer and precancerous lesions. Methods From 2010 to 2012 cervical specimens were collected from women aged 30-59 years old visiting department of gynecology of Nanjing Drum Tower Hospital between. They were detected by careHPV test, HC2, HPV-PCR test and TCT. Women with TCT≥ASC-US had colposcopy with directed biopsy and endocervical curettage if necessary. Based on the gold standard of histopathology, patients with CIN2 or higher belonged to high-risk group and those with inflammation/CIN1 belonged to benign group. Results Totally 404 valid samples were collected. There were 42 cases in high-risk group, 50 cases in benign group, and 312 cases in normal group. The value of Kappa was 0.833 in indicating the consistency of detection results between careHPV test and HC2 (P<0.0001) and the concordance rate was 93.81%. The value of Kappa was 0.707 in indicating the consistency of detection results between careHPV test and HPV-PCR (P<0.0001) and the concordance rate was 88.12%. The sensitivity and specificity of careHPV test in detecting lesions ≥CIN 2 were 85.71% and 83.15%, respectively. Conclusion The careHPV test is highly consistent with HC2 and HPV-PCR test. CareHPV has good sensitivity and specificity in the detection of HPV infection with short time consuming, and is expected to be the main method for screening of cervical cancer and precancerous lesions in the areas with relatively insufficient medical resources.

[Key words]human papillomavirus (HPV); careHPV test; cervical cancer; cervical precancerous lesion