聯合檢測血清CT-IgG60及CHSP60在篩查輸卵管不孕中的價值

田紅菊，陳建林，施曉波，周　 妮

(1.湖南省職業病防治院婦科，湖南 長沙 410007；2.中南大學湘雅二醫院生殖中心，湖南 長沙 410007)

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聯合檢測血清CT-IgG60及CHSP60在篩查輸卵管不孕中的價值

田紅菊1，陳建林2，施曉波2，周 妮1

(1.湖南省職業病防治院婦科，湖南 長沙 410007；2.中南大學湘雅二醫院生殖中心，湖南 長沙 410007)

[摘要]目的探討聯合檢測血清沙眼衣原體免疫球蛋白(CTIgG)及衣原體熱休克蛋白60，(CHSP60)在初步篩查輸卵管不孕中的臨床價值。方法收集2011年10至2012年5月在中南大學湘雅二醫院和湖南省職業病防治院婦科經腹腔鏡診斷的33例輸卵管不孕患者(研究組)和15例正常盆腔非輸卵管因素不孕患者(對照組)的血清，用酶聯免疫法檢測CTIgG及CHSP60，分析單個CTIgG、CHSP60指標及聯合指標篩查輸卵管不孕的靈敏度、特異度、陽性似然比、陰性似然比及約登指數。結果研究組和對照組中CTIgG、CHSP60的陽性率分別為57.58%(19/33)、6.67%(1/15)和54.55%(18/33)、6.67%(1/15)，研究組CTIgG和CHSP60陽性率均高于對照組，經比較差異均有統計學意義(χ2值分別為10.996、9.885，均P<0.05)。研究組中CTIgG、CHSP60的靈敏度和特異度分別為57.58%、93.3%和54.55%、93.3%；兩者聯合后檢測的靈敏度為80.72%，特異度為87.04%，陽性似然比為6.23，陰性似然比為0.07，約登指數為0.68。結論聯合檢測血清CTIgG及CHSP60在初步篩查輸卵管不孕中是一個較好的無創血清學指標，特別是排除非輸卵管不孕是一個較好地選擇。

[關鍵詞]沙眼衣原體免疫球蛋白；衣原體熱休克蛋白60；輸卵管不孕；腹腔鏡

在不孕癥原因中，輸卵管因素約占40%；有文獻報告最高達53.85%，其中繼發性不孕中輸卵管因素高達72.07%[1]。因此在女性不孕患者中判斷輸卵管狀況是一個必要的常規步驟。目前被公認的檢查方法是子宮輸卵管造影術，其對于輸卵管不孕患者而言在顯示子宮形態及輸卵管通暢程度中是較好地選擇，但對于非輸卵管因素不孕患者來說是一個創傷性檢查。本研究通過檢測血清沙眼衣原體免疫球蛋白(Chlamydia trachomatis IgG，CTIgG)和抗衣原體熱休克蛋白60抗體(Chlamydia heat shock protein 60，CHSP60)，在已行腹腔鏡手術證實的輸卵管不孕患者及非輸卵管不孕患者中的表達，探討聯合檢測CTIgG和CHSP60作為初步判斷女性不孕患者輸卵管狀況的無創血清學指標的情況。

1材料和方法

1.1研究對象

收集2011年10至2012年5月在中南大學湘雅二醫院和湖南省職業病防治院婦科經腹腔鏡手術診斷為輸卵管不孕患者(研究組)33例，年齡21～41歲，平均(28.58±6.22)歲，不孕時間為1～8年；輸卵管不孕診斷標準指輸卵管病理受損(包括輸卵管阻塞伴或不伴輸卵管積水、閉鎖或粘連)，術中確診只有輸卵管因素導致的不孕患者，排除輸卵管結扎術、合并子宮內膜異位癥、闌尾炎導致盆腹腔炎癥；術前排除排卵障礙、宮腔粘連及男方不孕。選擇同期經腹腔鏡手術后診斷具有正常盆腔及正常輸卵管的非輸卵管因素不孕患者(對照組)15例的血清標本，年齡21～41歲，平均(27.67±6.56)歲；不孕時間為2～7年，15例患者中因術前子宮輸卵管造影術(hysterosalpingography，HSG)異常行手術者9例，因多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)或不明原因不孕行診斷性腹腔鏡手術6例。

1.2研究方法

1.2.1標本的采集

取每個對象肘靜脈血5mL，室溫血液自然凝固10～20分鐘，離心20分鐘左右(2 000～3 000轉/分)，離心后收集血清置于-80℃待測。

1.2.2檢測方法與試劑

采用酶聯免疫法檢測CTIgG及CHSP60Ab。酶聯免疫分析試劑盒購于上海恒遠生物科技有限公司。檢測嚴格按照說明書操作。

1.2.3檢測評價指標

分析CTIgG及CHSP60分別在研究組和對照組中的陽性率；進一步分析CTIgG和CHSP60單個指標及聯合指標在經腹腔鏡手術證實的48例患者中的靈敏度、特異度、陽性預測值(positive predict value，PV+)、陰性預測值(negative predict value，PV-)及約登指數。

1.3檢測結果分析方法

1.3.1平行聯合診斷試驗

判斷原則為兩種檢測方法中任一陽性即判斷為陽性。

1.3.2診斷檢測評價指標

陽性預測值是試驗診斷為陽性者，確診為患者的概率。陰性預測值是試驗診斷為陰性者，確診為非患者的概率。似然比(likelihood ratios LRs)：比較陽性預測值及陰性預測值，可不受人群中患病率的影響，因此能用于比較不同人群中的同一試驗，或同一疾病的不同試驗的比較。陽性似然比是真陽性率與假陽性率之比；陰性似然率是假陰性率與真陰性率之比。陽性似然比=靈敏度/1-特異度；陰性似然比=1-靈敏度/特異度。似然比分值分類如下：陽性似然比2～5分提示一個較好的臨床試驗，5～10分提示為好的試驗，>10分提示為極好的試驗；陰性似然比0.5～0.2分提示為較好的試驗，0.2～0.1提示好的試驗，<0.1提示為極好的試驗。約登指數(YI)=靈敏度+特異度-1。約登指數在-1～1之間，其值越大，說明診斷試驗的真實性越好，當約登指數≤0時，該診斷試驗無任何臨床應用價值。

1.4統計學方法

采用SPSS 18.0軟件，計數資料用率表示，兩組間率的比較采用卡方檢驗和秩和檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組的沙眼衣原體免疫球蛋白和衣原體熱休克蛋白60陽性率檢出情況

研究組的CTIgG和CHSP60陽性率均高于對照組，經比較差異均有統計學意義(均P<0.05)，見表1。

表1兩組的CTIgG與CHSP60陽性率比較結果[n(%)]

Table 1 Comparison of positive rate of CTIgG and CHSP60 between two groups[n(%)]

2.2沙眼衣原體免疫球蛋白和衣原體熱休克蛋白60單個及聯合檢測的各評價指標情況

CTIgG和CHSP60聯合檢測的靈敏度、約登指數均分別高于單個檢測結果；CTIgG和CHSP60聯合檢測的特異度、陽性似然比、陰性似然比均分別低于單個檢測結果，見表2。

表2CTIgG和CHSP60單個與聯合檢測后各評價指標的結果

Table 2 Results of evaluation indicators of single or joint detection of CTIgG and CHSP60

3討論

3.1沙眼衣原體免疫球蛋白與輸卵管不孕的關系

自20世紀90年代以來，沙眼衣原體已超過淋球菌成為泌尿生殖道感染性疾病常見的性傳播疾病。沙眼衣原體(chlamydia trachomatis，CT)感染后侵犯宮頸管黏膜、子宮內膜和輸卵管黏膜，可引起宮頸管炎、子宮內膜炎、輸卵管炎、輸卵管積水，由于輸卵管出現瘢痕、阻塞，可導致不孕癥或輸卵管妊娠。無癥狀生殖道沙眼衣原體是造成病原體廣泛傳播和形成慢性感染，并進一步發生不可逆的纖維化而導致嚴重后果的主要原因。目前其致病機制尚不十分清楚，目前普遍認為輸卵管局部組織的持續性及反復沙眼衣原體感染難以清除是沙眼衣原體感染導致輸卵管損傷的主要原因。有研究觀察女性生殖道感染CT后，CTIgG在體內至少持續4～7年不會消失。故CTIgG可作為沙眼衣原體持續性或既往感染的證據。本研究中，研究組CTIgG陽性率顯著高于對照組，且差異有統計學意義，提示CTIgG與輸卵管不孕相關。在有關研究中亦支持衣原體感染與輸卵管不孕明顯相關[2]，并建議對輸卵管不孕進行早期血清學篩查以便及時治療。Lardenoije等[3]研究認為，對于評估輸卵管病理狀況而言，沙眼衣原體抗體試驗被認為是一種便宜而簡單的篩查方法，其研究中顯示CTIgG抗體試驗陽性預測值為58%，陰性預測值為92%，CTIgG抗體試驗被認為是排除輸卵管病理的一個較好的方法。本研究中CTIgG的陽性預測值為95.00%，陰性預測值為50.00%。本研究中陽性預測值較高，與Lardenoije等[3]報道的陰性預測值較高不一致，其可能與本資料中選擇的研究對象為腹腔鏡已診斷的輸卵管不孕患者進行回顧性研究方法有關。

3.2沙眼衣原體熱休克蛋白60與輸卵管性不孕的關系

女性泌尿生殖道感染CT后可誘發機體產生免疫防御反應,在對病原體進行清除的同時，也會給機體造成病理損傷，這是導致輸卵管不孕、異位妊娠等嚴重并發癥的主要可能致病機制。沙眼衣原體導致輸卵管不孕的致病機制與熱休克蛋白的產生及其免疫學效應密切相關。CHSP60可能是導致女性不孕的免疫病理發生的關鍵介質之一。本研究顯示CHSP60在輸卵管不孕患者中陽性率為54.55%，對照組中僅有6.67%，兩組有顯著性差異，提示CHSP60與輸卵管不孕相關，CHSP60可能參與了對輸卵管的損傷。黃健怡[4]報道CHSP60在輸卵管不孕中陽性率占46.43%，本研究中高于其陽性率可能由于診斷輸卵管不孕的方法不完全相同有關。

另外本研究結果顯示：若作為輸卵管不孕篩查試驗，血清CHSP60有54.55%的靈敏度及93.30%的特異度；陽性似然比及陰性似然比分別是8.14和0.49，提示檢測血清CHSP60對篩查輸卵管不孕是一個較好的方法。在Rodgers等[5]的研究中顯示，預測衣原體相關性輸卵管不孕中CHSP60的靈敏度為71%，特異度為82.6%。本研究中CHSP60在篩查輸卵管不孕的靈敏度稍低于其值，但特異度高于其值，這可能與本研究所采用的試驗方法不完全相同有關。

3.3沙眼衣原體免疫球蛋白和衣原體熱休克蛋白60聯合檢測篩查輸卵管不孕的價值

由于CT感染2～3周后血清中才可檢出IgG抗體，而部分患者感染CT后并不產生抗體或僅產生少量抗體，此時也可能顯示檢測陰性結果，且微量免疫熒光法檢測CT重復性差，故Domeika等[6]不建議單獨將IgG抗體用于CT的診斷。

CHSP60是沙眼衣原體引起免疫反應和輸卵管免疫病理損傷的關鍵抗原。CHSP60反應是持續或重復衣原體感染的標志。本研究通過檢測代表持續或重復衣原體感染的血清標志物CHSP60，并聯合CTIgG的檢測來相互補充作為輸卵管不孕的篩查手段。本研究結果顯示，在預測輸卵管不孕診斷效能上，若分別單獨檢測CHSP60及CTIgG，CHSP60的靈敏度為54.55%、特異度為93.30%，陽性似然比為8.14、陰性似然比為0.49；CTIgG的靈敏度為57.58%，特異度為93.30%，陽性似然比為8.59，陰性似然比為0.45。兩者比較具有相同的特異度，在陽性預測方面提示是個較好的方法，但在靈敏度及陰性預測方面均欠佳；但若將兩個指標聯合檢測，其靈敏度可提高到80.72%、特異度為87.04%，陽性似然比為6.23，陰性似然比為0.07。陽性似然比在5～10間，陰性似然比<0.1，在陽性預測及陰性預測方面皆為較好的方法，尤其是在陰性預測值方面是一個極好的診斷試驗結果。結合臨床分析可考慮將CHSP60和CTIgG聯合血清學檢測指標作為非輸卵管因素不孕患者排除輸卵管病變的一個較好的篩查手段。這與蔣敏等[7]報道的兩種聯合檢測可顯著提高靈敏度至87.3%的結果一致。

綜上，本研究結果顯示：通過對CTIgG和CHSP60聯合檢測，對于初診不孕患者可提高篩查輸卵管不孕的敏感度，對非輸卵管因素不孕患者作為排除輸卵管不孕是一個簡單、無創、方便、價廉、可行的血清學指標。本資料由于樣本數較小，且為回顧性分析，其價值還有待更大樣本數及前瞻性研究進一步證實。對于衣原體相關輸卵管不孕患者，許多其他體液免疫、細胞免疫和眾多細胞因子亦參與其中，至于是否能找到更多、更好、更全面、更價廉無創篩查輸卵管不孕的因子還有待進一步探討。對于輸卵管不孕患者，沙眼衣原體感染只是其中因素之一，還有其他感染相關因素也值得探索。

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[2]Surana A, Rastogi V, Nirwan P S.Association of the serum anti-chlamydial antibodies with tubal infertility[J].J Clin Diagn Res,2012,6(10):1692-1694.

[3]Lardenoije C M,Land J A.Chlamydia antibody testing for tubal factor subfertility [J].Ned Tijdschr Geneeskd,2007,151(36):1981-1985.

[4]黃健怡.血清沙眼衣原體及其熱休克蛋白60抗體反應與輸卵管性不孕的相關性[J].中外醫學研究,2013,11(12):39-40.

[5]Rodgers A K, Budrys N M, Gong S,etal.Genome-wide identification of Chlamydia trachomatis antigens associated with tubal factor infertility[J].Fertil Steril,2011,96(3):715-721.

[6]Domeika M, Savicheva A, Sokolovskiy E,etal.Guidelines for the laboratory diagnosis of Chlamydia trachomatis infections in East European countries[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2009,23(12):1353-1363.

[7]蔣敏,孟艷輝,何聚蓮,等.沙眼衣原體相關抗體在篩查輸卵管性不孕中的應用探討[J].熱帶醫學雜志,2014,14(1):64-66.

[專業責任編輯：呂淑蘭]

[收稿日期]2015-08-24

[基金項目]湖南省自然科學基金資助項目(2015JJ4071)

[作者簡介]田紅菊(1975-)，女，副主任醫師，碩士，主要從事生殖內分泌與不孕不育的研究。

[通訊作者]陳建林，副教授。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.009

[中圖分類號]R711.6

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5293(2016)04-0442-03

Clinical value of joint detection of serum CT-IgG60 and CHSP60 in the screening for tubal infertility

TIAN Hong-ju1, CHEN Jian-lin2, SHI Xiao-bo2, ZHOU Ni1

(1.Department of Gynecology, Hunan Prevention and Treatment Center for Occupational Diseases, Hunan Changsha 410007, China;2.Reproductive Center, Second Xiangya Hospital of Central South University, Hunan Changsha 410007, China)

[Abstract]Objective To investigate the clinical value of joint detection of serum Chlamydia trachomatis IgG (CTIgG) and Chlamydia heat shock protein 60 (CHSP60) in the preliminary screening for tubal infertility. Methods Serums were collected from 33 cases of patients with tubal infertility (study group) and 15 cases of infertile patients with normal pelvic cavity and non-tubal factors (control group). All those patients were diagnosed at the Second Xiangya Hospital of Central South University or gynecology department of Hunan Prevention and Treatment Center for Occupational Diseases by laparoscope from October 2011 to May 2012. Enzyme-linked Immunosorbent Assay was used to detect CTIgG and CHSP60. Single or joint detection of CTIgG and CHSP60 were carried out to explore the sensitivity, specificity, positive likelihood ratio, negative likelihood ratio and Youden index of the screening for tubal infertility. Results The positive rate of CTIgG in the study group and control group was 57.58% (19/33) and 6.67% (1/15), respectively. In addition, the positive rate of CHSP60 in the study group and control group was 54.55% (18/33) and 6.67% (1/15), respectively. Thus, the positive rate of CTIgG and CHSP60 in the study group was higher than that of the control group, and the difference was statistically significant (χ2 value was 10.996 and 9.885, respectively, both P<0.05). The sensitivity and specificity of CTIgG in the study group was 57.58% and 93.3%, respectively. Besides, the sensitivity and specificity of CHSP60 in the study group was 54.55% and 93.3%, respectively. The sensitivity, specificity, positive likelihood ratio, negative likelihood ratio and Youden index of joint detection was 80.72%, 87.04%, 6.23, 0.07 and 0.68, respectively. Conclusion Joint detection of serum CTIgG and CHSP60 is a relatively good and non-invasive serological indicator in the preliminary screening for tubal infertility, especially for the exclusion of infertility of non-tubal factors.

[Key words]Chlamydia trachomatis immunoglobulin (CTIgG); Chlamydia heat shock protein 60 (CHSP60); tubal infertility; laparoscope