阿托伐他汀對急性冠脈綜合征患者循環(huán)中fractalkine表達的影響

姚　康， 劉海波， 張書寧， 洪小武， 陸　浩， 錢菊英， 葛均波*

1. 復旦大學附屬中山醫(yī)院心內(nèi)科, 上?！?00032 2. 復旦大學免疫學系，上海　200032

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·論著·

阿托伐他汀對急性冠脈綜合征患者循環(huán)中fractalkine表達的影響

姚康1， 劉海波1， 張書寧1， 洪小武2， 陸浩1， 錢菊英1， 葛均波1*

1. 復旦大學附屬中山醫(yī)院心內(nèi)科, 上海200032 2. 復旦大學免疫學系，上海200032

[摘要]目的： 觀察阿托伐他汀對急性冠脈綜合征患者循環(huán)中可溶性fractalkine表達的影響。方法： 選擇經(jīng)冠脈造影證實的急性冠脈綜合征(ACS)患者40例，其中急性心肌梗死(AMI)20例(AMI組)、不穩(wěn)定心絞痛(UAP)20例(UAP組)。另選擇20例冠脈造影陰性的高脂血癥患者作為對照組。3組均給予阿托伐他汀(20 mg/次，1次/d)治療3個月。用ELISA法檢測治療前后肘靜脈血fractalkine水平；流式細胞技術檢測肘靜脈血CD14+單核細胞(PBMC)中CX3CR1表達。結(jié)果： 入院時，AMI組[(1 047.0±348.9) pg/mL]和UAP組[(777.2±324.4) pg/mL]循環(huán)中 fractalkine水平顯著高于對照組[(485.1±260.9) pg/mL，P<20.001、P=0.004)]；AMI組(38.8±15.4)%和UAP組(29.2±11.9)%循環(huán)中CD14+單核細胞CX3CR1表達率顯著高于對照組[(15.2±7.9)%，P=0.009、P=0.03]。阿托伐他汀治療3個月后，AMI組[(740.1±269.9) pg/mL]和UAP組[(523.8±188.5) pg/mL] fractalkine水平較治療前顯著下降(P=0.005、P=0.01)。結(jié)論： 阿托伐他汀可明顯降低急性冠脈綜合征患者循環(huán)中fractalkine的表達，進而發(fā)揮抗動脈粥樣硬化炎癥免疫效應。

[關鍵詞]急性冠脈綜合征；阿托伐他?。籪ractalkine；炎癥免疫

冠狀動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥免疫性疾病。炎癥和免疫反應是動脈粥樣硬化發(fā)病、尤其是斑塊不穩(wěn)定時發(fā)生破裂的中心環(huán)節(jié)。多種炎癥免疫細胞和趨化因子在動脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[1-2]。我們最近研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，趨化因子fractalkine的高表達可能與動脈粥樣硬化斑塊破裂過程中單核細胞、樹突狀細胞粘附聚集有關。CX3CRl是fractalkine的高親和力受體，兩者結(jié)合后通過黏附和趨化作用促使炎癥免疫細胞向炎癥部位遷移。他汀類藥物除調(diào)脂作用外，還有抗動脈粥樣硬化效應，但具體機制尚不清楚。本研究觀察了急性冠脈綜合征患者循環(huán)中fractalkine水平及阿托伐他汀對fractalkine的干預效應。

1材料與方法

1.1一般資料選擇2011年9月至2012年9月在我院住院的急性冠脈綜合征患者40例，其中急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)、不穩(wěn)定心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)患者各20例，另選擇年齡相匹配的、冠脈造影陰性的高膽固醇血癥患者20例，分別作為AMI組、UAP組、對照組。入院后3組患者均給予阿托伐他汀鈣片(立普妥，20 mg/次，1次/d)，連續(xù)服用3個月。治療1個月及3個月后檢查肝功能，包括丙氨酸轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶、γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)等。本研究通過中山醫(yī)院倫理委員會批準并簽署知情同意書。1.2診斷標準UAP診斷2000年《不穩(wěn)定性心絞痛診斷和治療建議》[5]：靜息心絞痛反復發(fā)作48 h內(nèi)，伴有心電圖ST-T動態(tài)改變，而肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、心肌肌鈣蛋白I(cTnI) 等心肌標志物在正常范圍內(nèi)。AMI診斷依據(jù)2001年中華醫(yī)學會心血管病學分會《急性心肌梗死診斷和治療指南》[6]：患者有缺血性胸痛癥狀和(或)出現(xiàn)心電圖ST段抬高或壓低的動態(tài)改變，CK-MB、cTnT、cTnI明顯升高或下降。高膽固醇血癥診斷標準參照參考文獻[5]。排除標準：合并嚴重感染、慢性肝腎疾病、活動期自身免疫性疾病、惡性腫瘤及嚴重心功能不全者。

1.3冠脈造影3組患者均于冠脈造影前24 h內(nèi)給予阿司匹林(300 mg)和氯吡格雷負荷劑量(300 mg)頓服，術中常規(guī)給予肝素(60 U/kg)。以管腔直徑狹窄程度≥50%作有意義的狹窄病變。

1.4循環(huán)中CX3CR1水平檢測采集肘靜脈血，用淋巴細胞分離液(Ficoll，GE Ficoll-Paque，美國)分離出CD14+單個核細胞，制成細胞懸液，調(diào)整細胞密度為1×109/L。取100 μL細胞懸液，加入30 μL抗體 CX3CR1-PE(美國Sigma公司)，孵育(30 min)，洗滌，用流式細胞儀(FACSCalibur，美國BD公司)檢測單核細胞中CX3CR1 的陽性表達率。

1.5循環(huán)中fractalkine水平測定3組患者分別于入院后24 h內(nèi)及服用阿托伐他汀3個月后經(jīng)肘靜脈采血5 mL，置于含EDTA的試管中，于20℃ 離心(1 200×g、10 min)， 取血漿，-70℃冰箱保存。采用ELISA 法(DY365 , 美國R&D Systems)檢測血清中可溶性fractalkine水平。

2結(jié)果

2.1患者臨床資料3組患者的一般資料差異無統(tǒng)計學意義(表1)。所有患者均連續(xù)服用阿托伐他汀3個月，未出現(xiàn)明顯肝功能損害及肌酶升高情況。

表1　3組患者的一般資料比較　　N=20，n(%)

TC：總膽固醇；LDL：低密度脂蛋白膽固醇；ACEI/ARB: 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑/血管緊張素受體阻滯劑

2.2循環(huán)CD14+單核細胞中CX3CR1的陽性表達情況結(jié)果(圖1)表明：入院時，AMI組和UAP組循環(huán)CD14+單核細胞中CX3CR1的表達率分別為(38.8±15.4)%、(29.2±11.9)%，顯著高于對照組(15.2±7.9)%，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.009、P=0.03)。

圖1　3組循環(huán)CD14+單個核細胞中CX3CR1的表達情況

2.33組循環(huán)中fractalkine水平結(jié)果表明：治療前，AMI組[(1 047.0±348.9)pg/mL]和UAP組[(777.2±324.4)pg/mL]循環(huán)可溶性fractalkine水平顯著高于對照組[(485.1±260.9)pg/mL，P<0.001、P=0.004)；圖2]。阿托伐他汀治療3個月后，AMI組[(740.1±269.9)pg/mL]和UAP組[(523.8±188.5)pg/mL] fractalkine水平較治療前顯著下降(P=0.005、P=0.01；圖3)。

圖2　3組患者循環(huán)fractalkine水平比較

圖3　阿托伐他汀治療3個月后循環(huán)fractalkine水平變化

3討論

炎癥免疫反應在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。炎癥免疫細胞和各種炎癥細胞因子參與動脈粥樣硬化斑塊的形成、破裂及血栓形成。在動脈粥樣硬化斑塊破裂部位，可見單核巨噬細胞、T淋巴細胞、樹突狀細胞明顯聚集。這些炎癥免疫細胞向內(nèi)皮細胞及斑塊部位的聚集主要依賴于各種黏附分子和趨化因子的作用。fractalkine是新近發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子超家族，可被多種炎癥免疫細胞和內(nèi)皮細胞表達。最近發(fā)現(xiàn)，fractalkine及其受體CX3CR1在動脈粥樣化患者體內(nèi)過度表達；CX3CR1是冠心病的遺傳性危險因素，并且與急性冠脈事件的發(fā)生密切相關[7-8]。我們既往研究[9]也發(fā)現(xiàn)，ST段抬高心肌梗死患者循環(huán)中fractalkine于發(fā)病24 h內(nèi)顯著升高，急診PCI血管再通后快速回落。

本研究發(fā)現(xiàn)，在急性冠脈綜合征患者循環(huán)中可溶性fractalkine水平及循環(huán)CD14+單核細胞中CX3CR1表達明顯升高，表明fractalkine及其受體CX3CR1與動脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊破裂密切相關。fractalkine參與斑塊破裂的機制尚不明確，可能與炎癥免疫細胞向斑塊部位遷移有關。研究[10]發(fā)現(xiàn)，CX3CR1基因敲除的小鼠動脈粥樣硬化斑塊趨于穩(wěn)定，斑塊中樹突狀細胞及T淋巴細胞明顯減少。他汀類藥物是目前常用的抗動脈粥樣硬化藥物，除調(diào)脂作用外，還有抗炎、改善內(nèi)皮細胞功能、抗平滑肌細胞增殖等效應，其中以阿托伐他汀的應用最多。本研究通過給予AMI、UAP、高脂血癥患者3個月的阿托伐他汀干預，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀可以明顯減少循環(huán)可溶性fractalkine水平，表明阿托伐他汀具有抑制動脈粥樣硬化炎癥免疫的作用。最近研究[11]發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀可提高急性冠脈綜合征患者T淋巴細胞百分比和抑制能力、降低血清IFN-γ和C反應蛋白(CRP)水平，進而發(fā)揮抗動脈粥樣硬化炎癥免疫、穩(wěn)定斑塊的作用。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀可顯著降低急性冠脈綜合征患者循環(huán)中fractalkine水平，為他汀類藥物抗動脈粥樣硬化機制的研究提供了嶄新的視角，也為不穩(wěn)定斑塊的炎癥免疫機制及干預靶點的研究提供了新思路。

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[本文編輯]姬靜芳

[收稿日期]2016-04-30[接受日期]2016-06-19

[基金項目]國家自然科學基金(81470386, H0203).Supported by the National Natural Science Foundation of China (81470386, H0203).

[作者簡介]姚康, 博士，副主任醫(yī)師. E-mail: yao.kang@zs-hospital.sh.cn *通信作者(Corresponding author). Tel: 021-64041990, E-mail:ge.junbo2@zs-hospital.sh.cn

[中圖分類號]R 541.4

[文獻標志碼]A

Effect of atorvastatin on the expression of fractalkine in the circulation of patients with acute coronary syndrome

YAO Kang1, LIU Hai-bo1, ZHANG Shu-ning1, HONG Xiao-wu2, LU Hao1, QIAN Ju-ying1, GE Jun-bo1*

1. Department of Cardiology, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai200032, China 2. Department of Immunology and Institutes of Biomedical Science, Fudan University, Shanghai200032, China

[Abstract]Objective： To observe the effect of atorvastatin on the expression of soluble fractalkine in the circulation of patients with acute coronary syndrome.Methods： 40 patients with acute coronary syndrome (ACS) confirmed by coronary angiography were selected, including 20 patients with acute myocardial infarction (AMI group) and20 patients with unstable angina pectoris (UAP group). Another 20 hyperlipidemia patients with negative coronary angiography were selected as the control group. All three groups were given atorvastatin 20 mg per time, one time per day for 3 months. Fractalkine levels in elbow vein blood were detected before and after treatment by ELISA method. CX3CR1 expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) was examined by flow cytometry. Results： On admission, fractalkine levels in the circulation of AMI group ([1047±348.9] pg/mL) and UAP Group ([777.2±324.4] pg/mL) were significantly higher than that of the control group ([485.1±26.09] pg / mL, P< 0.001, P=0.004); CX3CR1 expression rates of CD14+ monocytes in the circulation of AMI group ([38.8±15.4]%) and UAP group ([29.2±11.9]%) were significantly higher than that of the control group ([15.2±7.9]%, P= 0.009, P= 0.03). After 3 months of atorvastatin treatment, AMI ([740.1±269.9] pg/mL) and UAP ([523.8±188.5]pg/mL) fractalkine levels were significantly lower than before treatment (P=0.005, P=0.01).Conclusions： Atorvastatin can significantly reduce fractalkine expression in the circulation of acute coronary syndrome patients, and then achievethe immune effect of anti-atherosclerosis inflammation.

[Key Words]acute coronary syndrome; atorvastatin; fractalkine; inflammation immunity