高效液相色譜法測定大鼠血漿中的艾普拉唑濃度

戴 蕓，凃　岱云，柯春霞（1.黃石市中心醫院（湖北理工學院附屬醫院），湖北 黃石 435000；2.腎臟疾病發生與干預湖北省重點實驗室，湖北 黃石 435000）

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高效液相色譜法測定大鼠血漿中的艾普拉唑濃度

戴 蕓1，2，凃岱云1，2，柯春霞1，2
（1.黃石市中心醫院（湖北理工學院附屬醫院），湖北 黃石 435000；2.腎臟疾病發生與干預湖北省重點實驗室，湖北 黃石 435000）

摘要：建立大鼠血漿中艾普拉唑濃度測定的高效液相色譜法（HPLC）法，考察艾普拉唑在大鼠體內的藥代動力學特征。色譜柱為Diamonsil C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫為室溫，流動相為25 mM 磷酸氫二鉀緩沖液（pH 6.86）—甲醇（40：60，v/v），流速為1 mL/min，檢測波長為302 nm，進樣量為25 μL。6只雄性SD大鼠按照5 mg/kg的劑量靜脈滴注艾普拉唑。測定大鼠血漿中艾普拉唑的濃度，藥代動力學參數采用DAS ver2.0計算。建立的大鼠血漿中艾普拉唑濃度測定的HPLC方法準確，快速，簡單，靈敏度高，重復性好，適用于大鼠體內艾普拉唑藥代動力學的研究。

關鍵詞：高效液相色譜法；艾普拉唑；藥代動力學；大鼠

艾普拉唑（Ilaprazole），又名 IY-81149，是由韓國一洋制藥公司研制的新一代強效質子泵抑制劑（proton pump inhibitor，PPI），對胃酸分泌有顯著的抑制作用。在臨床應用中，艾普拉唑無論是單獨用藥還是與抗生素聯合用藥治療消化性胃潰瘍，其效果都要優于對照藥物［1，2］。另外，其抑制幽門螺旋桿菌（HP）的作用比奧美拉唑強，有效治療劑量僅為奧美拉唑的 1/4，不易產生抗藥性。在相同的藥效下，艾普拉唑的毒副作用較不明顯。因而艾普拉唑具有十分廣闊的市場前景，是消化性潰瘍、反流性食管炎等消化道疾病患者的福音［3，4］。

艾普拉唑作為一種新的質子泵抑制劑，有比較好的應用前景。本實驗建立了適于大鼠血漿中艾普拉唑濃度測定的高效液相色譜法（HPLC），方法準﹑﹑確靈敏重復性好，結果可靠。

1　實驗部分

1.1動物

6只普通雄性SD大鼠，體重（200±20）g，購自北京維通利華動物實驗中心，實驗動物合格證號為SCXK（京）2010-0016。

1.2藥品與試劑

艾普拉唑對照品（上海博頓生物化工有限公司）；乙腈、甲醇（色譜純，美國賽默飛世爾公司）；磷酸氫二鉀（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為娃哈哈純凈水。

1.3儀器

UltiMate 3000 型高效液相色譜系統，配有四元泵和自動脫氣機；DAD-3000（RS）檢測器、Chromeleon 7色譜工作站；Sigma 3K15 高速低溫離心機（Sigma公司）；DCY-24S水浴式氮吹儀（青島海科儀器有限公司）；BS110S型電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海青浦滬西儀器廠）；KQ 500DE型數控超聲波清潔器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.4方法

1.4.1標準曲線的配制

精密稱取艾普拉唑對照品適量，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成1.0 mg/mL的儲備液，4 ℃保存。臨用前用甲醇稀釋，配制成艾普拉唑濃度為0.5、1.0、5.0、10、50、100 和200 μg/mL的標準系列溶液。然后采用空白大鼠血漿10倍稀釋上述標準系列溶液，使大鼠血漿中的艾普拉唑濃度分別為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10和20 μg/mL。

1.4.2血漿樣品處理

血漿樣品200 μL，加入600 μL乙腈，充分渦旋振蕩混合1 min，14 000 r/min離心10 min，取上清600 μL置1.5 mL離心管中，氮氣吹干，取200 μL流動相復溶，進樣25 μL進行分析。

1.4.3色譜條件［5］

色譜柱為Diamonsil C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫為室溫，流動相為25 mM 磷酸氫二鉀緩沖液（pH 6.86）—甲醇（40：60，v/v），流速為1 mL/min，檢測波長為302 nm，進樣量為25 μL。

1.4.4大鼠藥動學實驗方法

6只普通 SD大鼠腹腔注射 10%水合氯醛（2 mL/kg），使大鼠進入不完全麻醉狀態［6］，將艾普拉唑用生理鹽水配制成質量濃度為0.2 mg/mL的藥液，按照5 mg/kg的劑量對大鼠進行尾靜脈滴注。分別于給藥前和給藥后 5、10、20、30、40、50、60、120、180、240、360、480和720 min從大鼠眼球靜脈叢取血0.3 mL。3 000 r/min離心15 min，取血漿-30 ℃保存備用［7，8］。

1.4.5數據處理

計數資料以mean ± SD表示，采用DAS ver2.0軟件計算藥代動力學參數，Origin 8.5繪制藥物血漿濃度-時間曲線。

2　結 果

2.1方法學驗證

在上述色譜條件下，艾普拉唑的保留時間為5.57 min。空白血漿、空白血漿中加入艾普拉唑及灌胃給藥后大鼠血漿色譜圖表明在該色譜條件下，空白基質中的雜質不干擾艾普拉唑的測定（圖1）。

以艾普拉唑濃度（X）為橫坐標，艾普拉唑峰面積（Y）為縱坐標，做線性回歸，得相應的回歸方程Y = 271.08X -651.17，r = 0.9988，顯示艾普拉唑血藥濃度在0.05～20 μg/mL的范圍內呈現良好的線性關系。定量下限為0.05 μg/mL。

圖1　大鼠血漿艾普拉唑色譜圖Fig 1 Chromatograms for ilaprazole in rat plasma

采用低（0.05 μg/mL）、中（1.0 μg/mL）、高（20 μg/mL）三個濃度艾普拉唑血漿樣品考察方法的精密度、準確度和回收率（表1），并考察艾普拉唑血漿樣品的穩定性，包括樣品在室溫放置4 h的穩定性、進樣倉放置24 h的穩定性和-30 ℃冷凍保存14 d的穩定性（表2）。方法學驗證結果顯示該方法符合生物樣品分析要求。

2.2大鼠藥動學

大鼠靜脈滴注艾普拉唑（5 mg/kg）后的藥物血漿濃度-時間曲線和主要的藥代動力學參數分別見圖2和表3。

3　結 論

本實驗建立的大鼠血漿中艾普拉唑的 HPLC方法簡便，快速，準確，靈敏度高，重復性好，能夠測定大鼠血漿中艾普拉唑的濃度，適用于大鼠體內艾普拉唑的藥動學以及后續的組織分布和排泄研究。

表1　大鼠血漿中艾普拉唑測定方法的精密度、準確度和回收率（n=5）Table 1　Precision and accuracy of the assay method for ilaprazole in rat plasma （n= 5）

表2　 大鼠血漿中艾普拉唑的穩定性（mean±SD，n=5）Table 2　Stability of ilaprazole in rat plasma （mean±SD，n=5）

圖2　艾普拉唑在大鼠體內的藥時曲線（mean±SD，n=6）Fig.2 The mean concentration-time curves of ilaprazole in rats （mean±SD，n=6）

表3　大鼠靜脈滴注艾普拉唑后的主要藥代動力學參數（mean±SD，n=6）Table 3　Pharmacokinetic parameters of ilaprazole after i.v.gtt.administration in rats　（mean±SD，n=6）

本實驗得出大鼠靜脈滴注艾普拉唑（5 mg/kg）的主要藥動參數為AUC為（655.16±103.63）mg min/L，MRT為（81.11±15.36）min，t1/2z為（52.24 ± 18.85）min，Tmax為（25.00±0.00）min，CLz為（0.008 ± 0.002）L/min/kg，Vz為（0.58±0.07）L/kg，Cmax為（7.24±0.62）mg/L。

參考文獻：

［1］Sachs G.Proton pump inhibitors and acid-related diseases ［J］.Pharmacotherapy，1997，17（1）∶ 22- 37.

［2］Mullin JM，Gabello M，Murray LJ，et al.Proton pump inhibitors∶ actions and reactions ［J］.Drug Discovery Today，2009，14 （13/14）∶ 648- 660.

［3］Sachs G，Shin JM，Howden CW.Review article∶ the clinical pharmacology of proton pump inhibitors ［J］.Aliment Pharmacol Ther，2006，23（Suppl 2）∶ 2- 8.

［4］Shi S，Klotz U.Proton pump inhibitors∶ an update of their clinical use and pharmacokinetics ［J］.Eur J Clin Pharmacol，2008，64 （10）∶ 935-951.

［5］陳堯，歐陽冬生，譚志榮，等．HPLC測定艾普拉唑片劑的含量［J］．中國藥學雜志，2008，43（12）：940-942．

［6］熊山，李敬來，王曉英，等．莫諾苷大鼠腦靶向分布研究［J］．中國實驗方劑學雜志，2015，21（10）：87-90．

［7］周淦．I類新藥艾普拉哩的臨床藥物代謝動力學研究［D］．長沙：中南大學，2009．

［8］周麗君，李敬來，王曉英，等．高效液相色譜-質譜法測定比格犬血漿中的艾普拉唑及其藥代動力學［J］．色譜，2012，30（5）：452-456．

Determination of Ilaprazole in Rat Plasma by HPLC

DAI Yun1，2，TU Dai-yun1，2，KE Chun-xia1，2
（1.Department of Pharmacy，Huangshi Central Hospital，Affiliated Hospital of Hubei Polytechnic University，Hubei Huangshi 435000，China；2.Hubei Key Laboratory of Kidney Disease Pathogenesis and Intervention，Hubei Huangshi 435000，China）

Abstract：An HPLC method for the determination of plasma concentration of ilaprazole was established，and the pharmacokinetics of ilaprazole in rats was studied.The chromatographic conditions were as follows：a Diamonsil C18 chromatographic column （150 mm×4.6 mm，5 μm） was used at the temperature of room temperature.The mobile phase consisted of 25 mM potassium dihydrogen phosphate buffer solution （pH 6.86）-methanol （40：60，v/v） and was pumped at a flow rate of 1 mL/min.The determination wavelength was 302 nm and the injected volume was 25 μL.6 male SD rats were administrated of 5 mg/kg ilaprazole by intravenous drip.The concentration of ilaprazole in rat plasma was determined and the pharmacokinetic parameters were calculated by DAS ver2.0.The HPLC method for determining ilaprazole concentration in rat plasma is accurate，rapid，simple，sensitive and repeatability.It has been successfully applied in quantification of ilaprazole in rat plasma.

Key words：HPLC；Ilaprazole；Pharmacokinetics；Rats

中圖分類號：TQ 460

文獻標識碼：A

文章編號：1671-0460（2016）01-0207-03

收稿日期：2015-10-09

作者簡介：戴蕓（1974-），女，湖北黃石人，主管藥師，1997年畢業于中國藥科大學藥學專業，研究方向：從事臨床藥學技術工作。

通訊作者：柯春霞（1975-），女，主管護師，研究方向。E-mail：kechunxia@hotmail.com。