益腎法對原發性高血壓患者血管內皮細胞NO-NOS系統的影響*

首都醫科大學附屬北京天壇醫院中醫科

賈春蓉　王文娟△(北京 100051)

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益腎法對原發性高血壓患者血管內皮細胞NO-NOS系統的影響*

首都醫科大學附屬北京天壇醫院中醫科

賈春蓉王文娟△(北京 100051)

提要目的：探討益腎中藥對原發性高血壓患者血管內皮細胞一氧化氮—氧化氮合成酶(NO-NOS)系統的影響。方法：觀察30例原發性高血壓患者采用益腎法治療前后血清一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合成酶(NOS)活力及NOS含量的變化。結果：益腎法治療后，患者NO含量、NOS活力及NOS含量明顯提高(P<0.05)。結論：益腎法通過對NO-NOS系統的調控，從而降低高血壓對血管內皮細胞(VEC)的損傷。

關鍵詞益腎法；杞菊地黃丸；右歸丸；原發性高血壓；血管內皮細胞；NO-NOS系統

研究表明，高血壓、高血脂、高血糖等心血管危險因素均可導致血管內皮細胞(VEC)受損。[1]VEC受損后，其內分泌功能失調，導致其分泌的活性物質與其相關的其他物質之間的平衡被打破，從而導致心血管系統功能障礙。[2]因此，如何保護和修復VEC損傷，延緩心腦血管疾病的發展，是臨床急需解決的課題。本課題組前期研究結果顯示，益腎法能明顯促進受損VEC增殖，有效保護其形態和超微結構。為進一步明確益腎法保護VEC的作用機制，本研究從一氧化氮(NO)一氧化氮合成酶(NOS)系統入手，觀察益腎中藥對原發性高血壓患者血管內皮的影響。

1資料與方法

1.1病例選擇

1.1.1診斷標準及辨證標準：⑴西醫診斷，參照1999年WHO/ISH四次高血壓指南中的高血壓診斷標準和臨床分期標準；⑵中醫辨證，參照1995年中華人民共和國衛生部制定發布的《中藥新藥臨床研究指導原則》第二輯中腎陰虛證、腎陽虛證及腎陰陽兩虛證的辨證標準。

1.1.2病例納入標準及排除標準：參照2002年中國醫藥科技出版社《中藥新藥臨床研究指導原則》中“中藥新藥治療高血壓病的臨床研究指導原則”的納入及排除標準。⑴納入標準：符合高血壓病西醫診斷標準及中醫辨證標準；年齡在18～65歲之間；以II期高血壓為主要觀察對象。⑵排除標準：年齡在18歲以下或65歲以上；妊娠或哺乳期婦女；繼發性高血壓；合并有心、腦、肝、腎和造血系統等嚴重原發疾病、精神病患者；過敏體質或對多種藥物過敏者。

符合以上納入標準的患者30例，男17例，女13例，年齡(46.8±11.2)歲。

1.2治療方法采用益腎中藥治療前后自身對照，治療觀察原發性高血壓30例。偏腎陰虛證以杞菊地黃丸(枸杞子、菊花、熟地黃、山茱萸、生山藥、牡丹皮、茯苓、澤瀉)為基礎方，偏腎陽虛證以右歸丸(熟地黃、附子、肉桂、山藥、山茱萸、菟絲子、鹿角膠、枸杞子、當歸、杜仲)為基礎方，偏腎陰陽兩虛證以二者合方為基礎方。頭暈頭痛甚者加天麻、川芎；惡心嘔吐者加清半夏、生赭石；眠差者加珍珠母、夜交藤；便干者加酒大黃、檳榔。隨證加減。每日1劑，水煎，早晚分2次溫服，治療4周為1個療程。要求患者治療期間按時服藥。

1.3觀察指標

1.3.1血壓：于治療前、治療第1、2、3、4周分別檢測血壓。采用臺式水銀柱血壓計測定坐位右上臂血壓，測前休息10 min，SBP(收縮壓)取Korotkoff第1音，DBP(舒張壓)取第5音，共測3次，重復測量時間間隔2 min，取平均值。

1.3.2中醫證候：參照《中藥新藥治療高血壓病的臨床研究指導原則》中的癥狀分級量化標準，對患者治療前后眩暈、頭痛、急躁易怒、腰酸、膝軟、五心煩熱、畏寒肢冷、面赤、目赤、口干、口苦、便秘、溲赤、心悸、失眠、耳鳴、健忘、舌淡、食少、氣短、夜尿頻等中醫證候進行分級量化評分。

1.3.3血樣檢測：治療前后抽取患者靜脈3 mL，室溫靜置2～4 h，2 500 r/min離心20 min分離血清，分別檢測NO含量、NOS活力及NOS含量。⑴NO含量檢測：采用南京建成NO試劑盒(硝酸還原酶法)檢測血清中NO含量。⑵NOS活力檢測：采用南京建成NOS測定試劑盒(分光光度法)檢測血清中NOS活力。⑶NOS含量檢測：采用ELISA法檢測血清中NOS含量。

2結果

2.1血壓治療前后的比較患者血壓治療后降低，與治療前比較，差異有非常顯著性(P<0.001)。詳見表1。

2.2臨床癥狀積分值治療前后的比較患者臨床癥狀積分值(分)治療后降低，與治療前比較，差異有顯著性(P<0.05)。詳見表1。

表1　血壓、臨床癥狀積分值治療前后比較

注：與治療前比較,* P<0.05，**P<0.001

2.3血清NO含量、NOS活力及NOS含量治療前后的比較血清NO含量、NOS活力及NOS含量治療后均有不同程度的升高，與治療前比較，差異有顯著性(P<0.05)。詳見表2。

表2 血清NO含量、NOS活力及NOS含量治療前后濃度比較

時間NO/μmol·L-1NOS/U·mL-1NOS3/U·mL-1治療前53.60±21.80 25.28±6.26 12.35±3.15 治療后65.00±23.90*31.42±4.32*17.98±5.06*

注：與治療前比較，* P<0.05

3討論

高血壓是臨床常見病、多發病，長期的高血壓狀態會引起血管內皮細胞的損傷，最終導致一系列心血管疾病的發生，甚至危及生命，因此減少VEC損傷也是治療高血壓的一項重要任務。中醫學認為高血壓的形成與肝腎陰虛，虛火上擾有關，同時又可因腎陽不足，無以鼓動陽氣，清竅失養而成。杞菊地黃丸是在大補腎陰的六味地黃丸的基礎上加用補養腎陰的枸杞子與清利頭目的菊花而成，整方補腎陰而清虛火，從而達到清降血壓之功。右歸丸則以附子、肉桂、鹿角膠為君藥，溫補腎陽，填精補髓；臣以熟地黃、枸杞子、山茱萸、山藥滋陰益腎，養肝補脾，取自陰中求陽之意；佐以菟絲子補陽益陰，固精縮尿；杜仲補益肝腎，強筋壯骨；當歸補血養肝。諸藥配合，共奏溫補腎陽，填精益髓，充降血壓之力。本課題組前期研究結果顯示，益腎法在降壓的同時，還能明顯促進受損VEC增殖，有效保護其形態和超微結構，從而可延緩心腦血管疾病的發生。為了進一步明確益腎法保護VEC的作用機制，本研究從NO-NOS系統入手，觀察益腎中藥對原發性高血壓病患者血管內皮的影響，從而明確其保護作用機制。

近20年來，西藥在改善VEC功能方面的研究進展迅速。血管緊張素轉化酶抑制劑、血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑、他汀類藥物、抗血小板藥、內皮素受體拮抗藥、血栓素A2( TXA2) 拮抗藥等藥物的作用的發揮是通過不同途徑，如抑制氧化應激減少活性氧類(ROS) 的產生，減緩NO 的滅活失效，改善一氧化氮合成酶mRNA 的穩定性，減少血漿內皮素-1( ET-1) 的合成以及ET-1mRNA 的表達等，來預防、改善、修復血管內皮功能的失調。[3]但相關的諸多藥物都是兼具該作用，并無專門防治VEC損傷、改善內皮功能失調的藥物。

益腎法是中醫臨床常用的一種治法。臨床研究表明，該法在治療心血管疾病方面療效確切，如益腎法治療冠心病，可消除癥狀，明顯改善心電圖，同時不影響患者心率、血壓，無明顯副作用；[4-5]治療動脈粥樣硬化，能提高血管彈性，降低患者頸動脈厚度，縮小其動脈粥樣硬化斑塊的面積和厚度；[6]治療高脂血癥，能明顯降低總膽固醇水平，并可升高高密度脂蛋白水平。[7]實驗研究表明，益腎法治療動脈粥樣硬化，可通過抑制血管細胞黏附分子表達、發揮抗氧化作用、直接促進VEC的增殖調控等方面而對VEC起保護作用；[8-10]治療高脂血癥，可通過調節凝血、纖溶系統的平衡，調節血管收縮與舒張因子的平衡，抗氧化作用等來改善血管內皮功能；[11-13]治療冠心病，可通過調節血管舒縮物質來改善內皮功能障礙；[14-15]治療高血壓，可調節血管活性物質之間的協調平衡，逆轉高血壓心室重塑。本研究結果顯示益腎法可降低血壓，改善癥狀，并提高NO含量、NOS活力及NOS含量，說明益腎法通過對NO-NOS系統的調控，從而降低高血壓對VEC的損傷，可為臨床應用益腎法防治心血管疾病血管內皮損傷提供科學的依據。

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(2015-10-16收稿)

Effect of Kidney-tonifying Therapy on VEC NO-NOS System inPatient with Primary Hypertension

TCM Department in Beijing Tiantan Hospital of Capital Medical University

JIAChun-rongWANGWen-juan(Beijing 100051)

AbstractObjective: to explore the effect of Chinese medicine of kidney-tonifying on VEC (vascular endothelial cell) NO-NOS system in patients with primary hypertension. Methods: Observe the changes of NO level, NOS activity and NOS level in 30 cases with primary hypertension before and after treatment with kidney-tonifying therapy. Results: After treatment, NO level, NOS activity and NOS level increased significantly (P<0.05). Conclusion: Kidney-tonifying therapy can reduce the damage on VEC through regulating NO-NOS system.

Key wordskidney-tonifying therapy； Qi Ju Di Huang Wan (Lycii and Chrysanthemi and Rehmanniae Bolus)； You Gui Wan (youguipill)； primary hypertension； VEC (vascular endothelial cell)； NO-NOS system

通訊作者：王文娟，女，副教授，醫學博士。

中圖分類號：R259.441

文獻標識碼：A

文章編號：1007-5615(2016)02-0009-03

*首都醫科大學基礎-臨床科研合作項目：No.10JL19

△首都醫科大學中醫藥學院