全自動酶標儀檢測嚴重程度不同的急性痛風患者的IL-1β、TNF-α、COX-2動態變化情況與結果分析*

茍 靜張文舉

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全自動酶標儀檢測嚴重程度不同的急性痛風患者的IL-1β、TNF-α、COX-2動態變化情況與結果分析*

茍 靜①張文舉②

茍靜,女,(1983- ),碩士，主治醫師。新疆醫科大學第五附屬醫院內分泌科，從事臨床診療工作。

目的：分析全自動酶標儀檢測經鎮痛藥物治療后嚴重程度不同的急性痛風患者的血清白細胞介素(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF-α)及環氧合酶-2(COX-2)動態變化情況與結果。方法：前瞻性地選取90例急性痛風患者，按照痛風輕重程度的不同將其分為重度組、輕度組和緩解期組，每組30例。另選擇30名體檢健康者為對照組。使用鎮痛藥物秋水仙堿聯合依托考昔對急性痛風患者進行治療，采用ELISA法檢測3組的血清IL-1β、TNF-α及COX-2水平動態變化情況。結果：重度組在急性痛風發作第1 d、3 d、7 d和10 d時的血清IL-1β水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t＝4.89，t＝5.26，t＝8.15，t＝3.74；P＜0.05)；重度組在急性痛風發作第7 d、10 d時的血清IL-1β水平與輕度組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=6.4931，t=3.3192；P＜0.05)；重度組在急性痛風發作的第1 d、3 d、7 d和10 d時的血清TNF-α水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=3.24，t=3.47，t=3.60，t=4.22；P＜0.05)；重度組在急性痛風發作第10 d時的血清TNF-α水平與輕度組比較明顯升高，差異有統計學意義(t=3.46，P＜0.05)；重度組在急性痛風發作的第1 d、3 d及7 d時的血清COX-2水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=3.73，t=3.96，t＝8.27，t=4.22；P＜0.05)；重度組在急性痛風發作第7 d時的血清COX-2水平與輕度組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=6.3587，P＜0.05)；緩解期患者在急性痛風發作的10d血清IL-1β、TNF-α、COX-2的水平動態水平與對照組比較，差異無統計學意義(t=0.84，t=1.18，t=1.45；P＞0.05)。結論：使用鎮痛藥物對急性痛風患者進行治療后，患者的IL-1β、TNF-α及COX-2等炎性細胞因子水平呈現動態變化，該研究為采用鎮痛藥物治療急性痛風患者的療程提供了重要的依據。

急性痛風；白細胞介素；腫瘤壞死因子；環氧合酶-2；動態變化；自動酶標儀

①新疆醫科大學第五附屬醫院內分泌科 新疆 烏魯木齊 830000

②蘭州軍區烏魯木齊總醫院骨三科 新疆 烏魯木齊 830000

[First-author’s address] Department of Endocrinology, The Fifth Xinjiang Medical University Affiliated Hospital, Urumqi 830000, China.

痛風是由于尿酸排泄量減少或嘌呤代謝發生紊亂而導致的晶體性的關節炎，其分為慢性期、間歇期、急性期和無癥狀期，臨床常表現為尿酸鹽沉積和高尿酸血癥所致的痛風石性的慢性關節炎、特征性的急性關節炎，并可能發生尿酸性的尿路結石、尿酸鹽腎病等，甚至有患者發生腎功能不全、關節致殘，嚴重危及患者的生命健康[1]。痛風性關節炎發作有多種細胞因子的參與，其中血清白細胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的參與最為關鍵[2]。痛風性關節炎急性發作時，患者血清中的IL-1β、TNF-α及環氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)含量均明顯升高[3]。目前，雖然治療痛風急性期的鎮痛藥物秋水仙堿、依托考昔等均可降低患者血清中細胞因子IL-1β、TNF-α及COX-2水平，但其使用療程尚不明確，為此，本研究前瞻性地對痛風患者經鎮痛藥物秋水仙堿聯合依托考昔治療后，使用全自動酶標儀檢測其外周血中的IL-1β、TNF-α及COX-2水平，在不同嚴重程度痛風患者體內的動態變化進行分析探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年5月至2014年9月期間在新疆醫科大學第五附屬醫院內分泌科進行急性痛風治療的90例患者，按照痛風輕重程度的不同將其分為重度組、輕度組和緩解期組，每組30例；另選擇30名體檢健康者作為對照組。其中重度組的臨床表現為躁動不安、疼痛劇烈、睡眠較差，必須采用強止痛劑進行疼痛緩解；輕度組的臨床表現為疼痛比較輕微，可以正常的睡眠和生活；緩解期組為痛風緩解期。采用ELISA法檢測4組的血清IL-1β、TNF-α及COX-2水平動態變化情況，重度組、輕度組及緩解期組患者在年齡、性別及病程等一般資料對比無差異，具有可比性(見表1)。本研究經過醫院倫理委員會的通過。

表1 三組患者一般資料相比較(±s)

表1 三組患者一般資料相比較(±s)

緩重輕組解度度別期組組 組 例333 數000 年222 564齡～～～(歲777 463) 平444 565 均...539 年±±± 齡111 100(歲...395) 病00 1..程～55～～(1年111 02) 平566 均...812 病±±± 程111...(年451 )

1.2 納入與排除標準

(1)納入標準：①所有患者均符合痛風關節炎[4]的診斷標準(1997美國風濕病學會制定)；②與患者及其家屬簽署知情同意書；③患者的痛風關節處皮膚有暗紅色；④具有痛風石；⑤X射線片診斷顯示患者的關節呈現非對稱腫脹；⑥患者單側疼痛可累及附骨處疼痛。

(2)排除標準：患有肝病、心臟病、骨病、高血壓、惡性腫瘤、炎癥和腎功能障礙的患者。

1.3 儀器與藥物

全自動酶標儀(美國Thermo FC)以及配套的ELISA試劑盒。碳酸氫鈉片(北京市燕京藥業有限公司)，秋水仙堿(昆明制藥集團股份有限公司)，依托考昔(Merck Sharp and Dohme(Australia)Pty.Ltd)，辣根過氧化酶(CAS 9003-99-0，上海譜振生物科技有限公司)。

1.4 治療方法

所有患者均進行常規治療：①臥床休息，將患肢提高，要注意保暖，避免外部因素的刺激；②禁止飲酒，采取低嘌呤飲食；③每日飲水量為3 000 ml，保證尿量＞2 000 ml/d；④堿化尿液：服用碳酸氫鈉片，1.0 g/次，3次/d，飯后服用。

發病期間的重度組和輕度組采用鎮痛藥物秋水仙堿聯合依托考昔進行治療，秋水仙堿的使用方法：初始藥量為0.5 g，每日服用3次；3 d后藥量為0.5 g，2 次/d；7 d后藥量為0.5 g，每日服用1次，4 d后停藥。依托考昔的使用方法：初始藥量為120 mg，1次/d；3 d后藥量為60 mg，每1次/d，7 d后停藥。

1.5 血清檢測方法

采用雙抗體夾心ELISA法檢測血清IL-1β、TNF-α 及COX-2水平。使用IL-1β、TNF-α及COX-2單抗將微孔板包被，依次加入樣本和標準品中的IL-1β、TNF-α及COX-2，再與通過辣根過氧化酶標記后的IL-1β、TNF-α及COX-2抗體相結合，徹底洗滌抗體復合物，最后加入顯色劑。若反應孔里存在IL-1β、TNF-α及COX-2，在辣根過氧化酶的作用下會出現藍色，并且在終止液硫酸催化下變成黃色。

1.6 評分標準

按照VRS-4評分法評分標準[5]：0分為無主訴性疼痛；1分為輕度疼痛，可以正常的生活和睡眠；2分為疼痛明顯，睡眠不好，主動要求使用止痛劑；3分為躁動不安、疼痛劇烈、睡眠較差，必須采用強止痛劑進行疼痛緩解。

1.7 統計學方法

采用SPSS 18.0軟件進行數據統計分析，計數資料以均數±標準差(±s)表示，計量資料比較采用t檢驗，計數資料比較采用x2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組急性發作不同時間血清IL-1β水平動態變化

重度組在急性痛風發作第1 d、3 d、7 d和10 d時的血清IL-1β水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=4.89，t=5.26，t=8.15，t=3.74；P ＜0.05)。輕度組在急性痛風發作第1 d、3 d、7 d和10 d時的血清IL-1β水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=3.43，t=4.71，t=4.44，t=2.14；P ＜0.05)，見表2。

重度組在急性痛風發作第7 d、10 d時的血清IL-1β水平與輕度組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=6.4931，t=3.3192；P＜0.05)；

2.2 各組急性發作不同時間血清TNF-α水平動態變化

重度組在急性痛風發作的第1 d、3 d、7 d和10 d時的血清TNF-α水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=3.24，t=3.47，t=3.60，t=4.22；P＜0.05)；輕度組在急性痛風發作的第1 d、3 d、7 d和10 d時的血清TNF-α水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=3.12，t=3.54，t=2.73，t=2.12；P＜0.05)，見表3。

表2 各組急性發作不同時間血清IL-1β水平動態變化(pg/ml,±s)

表2 各組急性發作不同時間血清IL-1β水平動態變化(pg/ml,±s)

對重輕組照度度別組組組 例333 數000 133 697...473 1±±± d123 031...786 43 t..值-84 93 00 P..-值00 00 142 659...484 3±±± d121 080...776 54 t..值-27 61 00 P..-值00 00 132 675...446 7±±± d1 93 0...28 7 84 t..值-14 54 00 P..-值00 00 122 640...4 148 ± 0±± d143 0...85 7 32 t..值-71 44 00 P..-值00 00

表3 各組急性發作不同時間血清TNF-α水平動態變化(ng/ml,±s)

表3 各組急性發作不同時間血清TNF-α水平動態變化(ng/ml,±s)

對重輕組照度度別組組組 例333 數000 32 289 337 5± 1 ± ± d27 834 07a a 3 3 t..值-21 42 00 P..-值00 00 54 256 343 5 3±± ± d43 894 074 33 t..值-45 74 00 P..-值00 00 4 22138451 7±± ± d2 846060 32 t..值-67 03 00 P..-值00 00 232 326 1558 0±±± d883 050 42 t..值-21 22 00 P..-值00 00

表4 各組急性發作不同時間血清COX-2水平動態變化(pg/ml,±s)

表4 各組急性發作不同時間血清COX-2水平動態變化(pg/ml,±s)

對重組照度別組組 例33 數00 17 8..35± 1± d11 2..7 8a3 t.值-7 3 0 P.-值0 0 18 8..45 3±± d11 3..7 6a3 t.值-9 6 0 P.-值0 0 1 82..57 7±± d1 2..7 2a8 t.值-2 7 0 P.-值0 0 8 9..5 5 1±± 0 d 11..3 7 4 t.值-2 2 0 P.-值0 0輕度組 30 16.8±12.4a3.63 0.00 11.6±3.5a4.36 0.00 9.4±1.8ab1.99 0.00 9.2±1.6 2.12 0.00

重度組在急性痛風發作第10 d時的血清TNF-α水平與輕度組比較明顯升高，差異有統計學意義(t=3.46，P ＜0.05)；

2.3 各組急性發作不同時間血清COX-2水平動態變化

重度組在急性痛風發作的第1 d、3 d及7 d時的血清COX-2水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=3.73，t=3.96，t=8.27，t=4.22；P＜0.05)；輕度組在急性痛風發作的第1 d、3 d及7 d時的血清COX-2水平與對照組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=3.63，t=4.36，t=1.99，t=2.12；P＜0.05)，見表4。

重度組在急性痛風發作第7 d時的血清COX-2水平與輕度組相比明顯升高，差異有統計學意義(t=6.3587，P＜0.05)。

2.4 緩解期組急性發作血清IL-1β、TNF-α、COX-2的水平動態變化

緩解期組患者在急性痛風發作的第10d血清IL-1β、TNF-α及COX-2的水平與對照組比較，差異不具有統計學意義(t=0.84，t=1.18，t=1.45，P＞0.05)，見表5。

表5 緩解期組患者在急性發作的第10 d血清IL-1β、TNF-α及COX-2 水平動態變化(±s)

表5 緩解期組患者在急性發作的第10 d血清IL-1β、TNF-α及COX-2 水平動態變化(±s)

緩對組 解Pt照 值值別 期組 組例33 數00 116 (8.p I.L400 g3±..-/±84 m 1141 6 β0l.).37 (22 Tn3510 Ng59../±± F 12 m-84 87 αl08 ) 89 ( C..p O5110 g±±../ X 41 m-1156..l 2)75

3 討論

近年來，隨著科學技術的發展對痛風發病機制有了進一步的認識，痛風性關節炎的發病原因與IL-1β、TNF-α及COX-2等細胞因子相關，而酶標檢測儀對IL-1β、TNF-α及COX-2等細胞因子檢測的準確性至關重要。研究結果表明，IL-1β和TNF-α在急性痛風關節炎患者發病和病情進一步發展過程中起到關鍵性的作用，是前炎癥網鏈中的一級細胞因子[6-9]。IL-1的激動劑是L-1β，主要由單核巨噬細胞所產生，是炎癥消減的始動因素，是急性痛風關節炎的炎性介質，其和TNF-α對于痛風性關節炎具有促炎的作用，均能介導骨質和關節軟骨的損害，進而導致關節功能發生障礙[10-12]。此外，PGE2是痛風關節炎的主要介質，而COX-2是合成PGE2的關鍵酶，故COX-2對于急性痛風關節炎患者發病和病情發展有很重要的作用及影響。內皮白細胞的COX-2發生高表達會受到IL-1β 和TNF-α的影響[13-15]。

本研究數據表明，急性痛風患者的血清IL-1β、TNF-α及COX-2含量明顯高于正常的健康人群，表明痛風是炎性細胞因子的反應過程，其發生和發展與炎癥的免疫因素有很大的關系。數據顯示，重度痛風患者給藥1d后IL-1β、TNF-α及COX-2含量遠高于正常人群。患者在采用秋水仙堿聯合依托考昔進行治療的期間，重度痛風患者的炎性細胞因子水平較輕度痛風患者高，不同的炎性細胞因子在機體內的持續時間各不相同，COX-2在7～10 d內可以恢復到正常水平。數據顯示，重度痛風患者10 d后的IL-1β、TNF-α及COX-2含量均已恢復正常水平。此外，IL-1β和TNF-α在機體內的持續時間為10～14 d；重度痛風患者的炎性細胞因子水平下降速度較輕度痛風患者快，同時可知，輕重程度不同的急性痛風患者的炎性細胞因子水平在最初發病時是相似的，但是時間延長時，重度患者血清的炎性細胞因子在機體內維持的時間也越長，對患者造成的傷害也會越大，從而不利于患者的預后和康復[16]。由于炎性細胞因子對于患者的預后有很大的影響，因此早期的抑制和阻斷其激發和介導的炎癥過程，對患者病情和防止關節被破壞具有積極的意義。此外，長期使用藥物進行治療會帶來很大的不良反應，而療程不足會導致病情反復，甚至病情加重，因此，如何選擇合理的藥物和使用療程非常重要[17]。本研究數據顯示，對急性痛風患者在10～14 d內進行鎮痛抗炎治療的效果最佳。

綜上所述，通過酶標檢測儀對急性痛風患者IL-1β、TNF-α及COX-2水平的檢測，在明確嚴重程度不同的動態變化情況下為其治療方案提供重要的思路和依據，值得臨床上推廣使用。

[1]袁艷平,李長貴.痛風性關節炎患者血清白細胞介素-1β腫瘤壞死因子-α環氧化酶-2水平的動態變化研究[J].中華風濕病學雜志,2013,17(12):818-822.

[2]陳勇,干敏芝,痛風的個體化多模式治療[J].現代實用醫學,2013,25(8):847-848,853.

[3]Sullivan PM,William A,Tichy EM.Hyperuricemia and gout in solid-organ transplant:update in pharmacological management[J].Prog Transplant,2015,25(3):263-270.

[4]洪駿,徐江勇.依托考昔與塞來昔布治療急性痛風的臨床療效對比[J].中國藥業,2013,22(12):44-45.

[5]楊君霞,劉琳,王向黨,等.大劑量與小劑量秋水仙堿治療急性痛風的比較[J].中國醫師進修雜志,2011, 34(34):50-51.

[6]黃甘霖.中西醫結合綜合治療痛風急性發作的臨床研究[J].中國醫刊,2014,49(3):92-94.

[7]梁宏達,王吉波,潘琳,等.五味甘露藥浴顆粒治療急性痛風關節炎的臨床觀察[J].中華全科醫學,2011, 9(12):1863-1865.

[8]王紀云,姜玲.自擬止痛湯治療急性痛風148例療效觀察[J].中國保健營養(中旬刊),2014,24(2):735-736.

[9]Xu Z,Zhang R,Zhang D,et al.Peptic ulcer hemorrhage combined with acute gout:analyses of treatment in 136 cases[J].Int J Clin Exp Med, 2015,8(4):6193-6199.

[10]施桂英.急性痛風關節炎的治療選擇[J].臨床藥物治療雜志,2012,10(1):1-4.

[11]蔣春梅,李娟.痛風危險因素、體質類型與中醫證型的相關研究[J].熱帶醫學雜志,2011,11(5):590-592,595.

[12]尚積玉,趙心童,賀圣文,等.中國人群代謝綜合征各組分與易感基因抵抗素關系的meta分析[J].中國醫學裝備,2014,11(9):15-17.

[13]王躍旗,王義軍,王磊,等.急性痛風性關節炎的中醫研究進展[J].環球中醫藥,2012,5(11):873-877.

[14]薛川松,崔小紅,吳宇,等.中西醫結合治療痛風臨床研究[J].中醫學報,2013,28(10):1577-1579.

[15]張偉杰,王志明.中西醫結合治療痛風的臨床研究[J].中國醫藥導報,2007,4(25):91.

[16]劉亞飛,涂勝豪.中醫藥治療痛風的研究進展[J].中西醫結合研究,2012,4(1):44-47,50.

[17]Shiozawa A,Cloutier M,Heroux J,et al.Realworld treatment patterns of gout patients treated with colchicine or other common treatments for gout in acute care settings:a retrospective chart review study[J].Curr Med Res Opin,2015, 31(8):1611-20.

The analysis on dynamic change and severity of IL-1 beta, TNF alpha, cox-2 detected by automatic enzyme immunoassay analyzer on patients with acute gout

GOU Jing, ZHANG Wen-ju// China Medical Equipment,2016,13(2):95-98.

Objective: To analyze dynamic change and severity of IL-1 beta, TNF alpha, COX-2 detected by automatic enzyme immunoassay analyzer on patients with acute gout.Methods: Ninety cases of acute gout patients selected according to the different degrees of severity, and were divided into three observed groups.Thirty health people were treated as the control group.IL-1β, TNF-α, COX-2 levels of dynamic change were recorded and compared within the four groups of patients.Results: The serum IL-1β, TNF-α, COX-2 levels in the 1st, 3rd, 7th, 10th day in the observation group 1 and group 2 in acute gout attacks were significantly higher than the control group; The serum levels of IL-1β, TNF-α, COX-2 levels in the 7th 10th day in observation group 1 in acute gout was significantly higher than observation group 2; The serum IL-1β, TNF-α,COX-2 levels in observation group 3 have not significant difference with control group 2; The serum IL-1β, TNF-α, COX-2 levels in observation group1,2,3 in acute gout attacks in the 14th days have not significant difference with control group.Conclusion: After analgesic drugs for the treatment of acute gout patients from 10 to 14 days, the inflammatory cytokines can be completely back to normal.The results provided important evidence for the introduction of analgesic drugs in patients with acute gout treatment.

Acute gout; IL-1β; TNF-α; COX-2;Dynamic changes; Automatic enzyme immunoassay analyzer

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.02.030

新疆醫科大學科研創新基金(XYDCX2014168)“血清Dickkopf-1水平與痛風性關節炎骨破壞的臨床研究”

1672-8270(2016)02-0095-04

R589

A

2015-11-28