白藜蘆醇對大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織中TNF-α和IL-6水平的影響

王保華

河南太康縣人民醫(yī)院　太康　461400

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白藜蘆醇對大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織中TNF-α和IL-6水平的影響

王保華

河南太康縣人民醫(yī)院太康461400

【摘要】目的探討白藜蘆醇對大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的影響。方法健康Wistar大鼠48只，隨機均分為假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組、白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組，每組12只，采用腹主動脈缺血法制備大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型，然后采用ELISA法檢測各組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平。結(jié)果白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注損傷組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平低于白藜蘆醇25 mg·kg-1組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論白藜蘆醇能夠降低脊髓缺血再灌注損傷組織中TNF-α和IL-6水平，改善機體的免疫功能，進而減輕脊髓組織的缺血再灌注損傷。

【關(guān)鍵詞】白藜蘆醇；脊髓；缺血再灌注損傷；腫瘤壞死因子-α；白介素-6

脊髓由于外傷侵犯、手術(shù)或脊髓壓迫性疾病的影響，可能會出現(xiàn)缺血再灌注損傷[1]。目前，關(guān)于脊髓缺血再灌注損傷的機制及其治療是該領(lǐng)域研究的熱點問題。為尋找更好的脊髓缺血再灌注損傷抑制對抗藥物，本研究利用大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型進行研究，并用白藜蘆醇進行干預，觀察該藥對該模型免疫功能的影響，以期找到減輕脊髓缺血再灌注損傷的藥物應用于臨床。

1材料與方法

1.1實驗對象選擇清潔級健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，體質(zhì)量300～400 g，購自河南省實驗動物中心，動物許可證號SCXK(豫)2014-0001。

1.2試劑與藥品白藜蘆醇(美國Sigma公司)；腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-6(interleukin-6，IL-6)一抗、二抗及相關(guān)試劑盒均(福州邁新生物工程有限公司)。

1.4分組及給藥方法健康Wistar大鼠48只隨機均分為4組：假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組、白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組，每組12只。各組處理方法：白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠于造模前分別給予白藜蘆醇50 mg·kg-1+0.85%的NaCl溶液和25 mg·kg-1+0.85%的NaCl溶液；假手術(shù)組和缺血再灌注損傷組大鼠均給予同體積0.85%的NaCl溶液，各給藥組大鼠均按10 mL·kg-1給藥，連用10 d。

1.5模型制備脊髓缺血再灌注損傷模型制備參考文獻[2]的改良腹主動脈缺血法，其中缺血時間45 min，再灌注時間8 h，假手術(shù)組大鼠僅行腹主動脈分離術(shù)，實驗處理完畢在麻醉條件下處死大鼠并于第3～5腰椎處取出一定量的脊髓組織放置于-80 ℃冰箱待測。

1.6TNF-α和IL-6水平檢測用0.85%的NaCl溶液將所取脊髓組織制成勻漿，低溫(4 ℃)條件下4 000 rmin-1離心10 min，取上清液，采用嘌呤氧化酶法檢測SOD水平，采用硫代戊巴比妥法檢測MDA水平，總蛋白量采用考馬斯亮藍法測定。

2結(jié)果

缺血再灌注損傷組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注損傷組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平低于白藜蘆醇50 mg·kg-1組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　各組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平比較

注：與假手術(shù)組比較，△P<0.05；與缺血再灌注損傷組比較，*P<0.05；與白藜蘆醇50 mg·kg-1組比較，#P<0.05

3討論

缺血再灌注損傷是一種組織或器官因外傷、手術(shù)或疾病導致缺血，經(jīng)過恢復性處理后，其損傷程度進一步加重的現(xiàn)象，其發(fā)生可能受機體自由基水平失衡、免疫狀態(tài)改變、細胞凋亡機制失衡、炎癥反應等生物學行為的影響。脊髓缺血再灌注損傷與機體的自由基的生成與清除失衡、炎癥反應、細胞凋亡、能量代謝障礙等有關(guān)[2]。本研究主要通過探討炎癥反應在脊髓缺血再灌注損傷發(fā)生發(fā)展過程中的作用，并進一步證實白藜蘆醇在脊髓缺血再灌注損傷過程中對損傷的干預和減輕作用。脊髓發(fā)生缺血再灌注損傷后，機體通過TNF-α和IL-6等炎性細胞因子誘發(fā)的級聯(lián)反應促進細胞凋亡的發(fā)生、炎癥反應的加重以及脊髓組織水腫的加重，進而導致脊髓損傷的加重[3]。本研究結(jié)果證實，缺血再灌注損傷組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，進一步印證了該理論。白藜蘆醇是具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗凋亡等作用的多酚類化合物，已被證實在多種組織或器官的缺血再灌注損傷過程中發(fā)揮對抗作用[4]。本文結(jié)果還顯示，白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注損傷組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平低于白藜蘆醇50 mg·kg-1組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示白藜蘆醇在脊髓缺血再灌注損傷過程中能夠減少促炎性細胞因子的分泌合成，減輕炎癥反應的進展，進而減輕脊髓組織缺血再灌注損傷，且這種作用具有一定的劑量依賴性。

4參考文獻

[1]關(guān)鑫,董明巖,于洋,等.缺血再灌注損傷大鼠脊髓神經(jīng)元細胞凋亡、脊髓組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激經(jīng)典標志物的表達變化[J].山東醫(yī)藥,2015,55(31):27-29.

[2]張銓,陳明華,吳俊山,等.缺血后處理對鼠脊髓缺血-再灌注損傷中MDA和SOD的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志,2014,17(22):89-90.

[3]余萍萍,王莉,唐凡人 ,等.白藜蘆醇對大鼠腦缺血/再灌注損傷后星形膠質(zhì)細胞活化的影響[J].中國藥理學通報,2015,31(9):1 228-1 233.

[4]沈佳佳,黃瑛,祁煒罡,等.白藜蘆醇通過促進自噬減輕糖尿病大鼠心肌缺血再灌注損傷的實驗研究[J].中國臨床醫(yī)學,2015,22(2):151-155.

(收稿 2016-01-13)

【中圖分類號】R-332

【文獻標識碼】B

【文章編號】1673-5110(2016)12-0100-02