泥鰍體表粘液中IgM的分離純化與抑菌活性研究

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泥鰍體表粘液中IgM的分離純化與抑菌活性研究

免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)可以殺死細(xì)菌和病毒，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[1]，魚類的體表粘液中存在大量Ig[2]。國(guó)內(nèi)對(duì)魚類體表粘液IgM的研究較多[3,4]，但目前對(duì)泥鰍體表粘液中IgM的研究報(bào)道很少。本文對(duì)泥鰍體表粘液中IgM進(jìn)行分離純化，然后對(duì)其抑菌性進(jìn)行研究。

1　材料與方法

1.1材料與試劑。泥鰍，購(gòu)自衡水市自強(qiáng)街水產(chǎn)市場(chǎng)；枯草芽孢桿菌、大腸桿菌，均由衡水學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供；硫酸銨，北方天醫(yī)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1粘液的澄清與干燥。將采集的泥鰍粘液在冰箱內(nèi)(0℃~ 4℃)靜置2 h，讓其內(nèi)部泥沙等雜質(zhì)沉淀，取上清粘液，用紗布過(guò)濾。然后對(duì)過(guò)濾后的粘液用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥處理，得泥鰍粘液粉末。

1.2.2IgM的分離純化。采用硫酸銨沉淀的方法進(jìn)行分離純化，工藝流程如下：泥鰍粘液粉末→采用磷酸鹽緩沖液溶解→磁力攪拌條件下，加入一定濃度的pH 7.0的飽和硫酸銨，4℃靜置過(guò)夜→離心得到沉淀→冷凍干燥→得到泥鰍粘液IgM。

采用4因素3水平L9(34)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，硫酸銨濃度、離心轉(zhuǎn)速、離心時(shí)間見(jiàn)表1。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒測(cè)定分離純化后的泥鰍粘液IgM純度，以確定最佳的提取條件。

表1　L9(34)正交試驗(yàn)因素水平表

1.2.3IgM的抑菌性研究。分別選取枯草芽孢桿菌(革蘭氏陽(yáng)性菌)和大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)，采用濾紙片法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，檢測(cè)硫酸銨分離純化后的IgM抑菌效果。

2　結(jié)果與分析

2.1正交實(shí)驗(yàn)對(duì)IgM分離純化效果影響的研究。正交實(shí)驗(yàn)對(duì)IgM分離純化效果的影響見(jiàn)表2、表3。

由表2、表3可知，硫酸銨濃度對(duì)IgM提取純度有顯著影響。各影響因素大小順序?yàn)椋毫蛩徜@濃度＞離心時(shí)間＞離心轉(zhuǎn)速。確定試驗(yàn)組合為A2B3C2，即硫酸銨濃度30%，離心轉(zhuǎn)速8 000 r/min，離心時(shí)間10 min。采用此組合進(jìn)行試驗(yàn)，得IgM純度為54%。

表2　L9 (34)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)IgM分離純化效果的影響的分析

表3　L9(34)正交試驗(yàn)對(duì)IgM分離純化效果的影響的顯著性分析

2.2IgM的抑菌性測(cè)定。經(jīng)過(guò)抑菌性測(cè)定得知，提取的泥鰍體表粘液IgM對(duì)大腸桿菌的抑菌效果較好，對(duì)枯草芽孢桿菌幾乎沒(méi)有抑菌效果。

3　小結(jié)

通過(guò)正交試驗(yàn)得知，提取泥鰍體表粘液IgM的最佳條件為：硫酸銨濃度30%，離心轉(zhuǎn)速8 000 r/min，離心時(shí)間10 min，在此條件下，得IgM純度為54%。提取的IgM對(duì)革蘭氏陰性的大腸桿菌抑菌效果很好，但對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑菌效果不理想，其原因還有待于進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)

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[4]陳篧，王石泉，韓曉冬，等.鯽魚血清和皮膚粘液IgM的分離純化及部分性質(zhì)的鑒定[J] .動(dòng)物學(xué)研究，2003，24 (2)：111～115.

053000衡水學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院柴琪琪李志濤次少濤張達(dá)

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