HPLC-MS/MS法檢測中成藥和食品中違法添加的10種降糖類藥物

隋海山王立娟戚 威

（1 山東省濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東 濰坊 261041；2 濰坊市紅十字中心血站，山東 濰坊 261041）

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HPLC-MS/MS法檢測中成藥和食品中違法添加的10種降糖類藥物

隋海山1王立娟2戚 威1

（1 山東省濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東 濰坊 261041；2 濰坊市紅十字中心血站，山東 濰坊 261041）

【摘要】目的 建立快速、準(zhǔn)確HPLC-MS/MS法測定中成藥和食品中添加的10種降糖類藥物。方法 采用Waters Atlantis T3色譜柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）；用含0.01 mol/L的乙酸銨水溶液（A）-甲醇（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.3 mL/min進(jìn)樣量1 μL，選擇ESI離子源、正離子掃描、多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方式檢測，一級質(zhì)譜、二級質(zhì)譜，確定樣品中是否添加了降糖類藥物，并根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算添加藥物的準(zhǔn)確量。結(jié)果 在上述色譜及質(zhì)譜條件下，10種藥物的分離度良好，方法檢測限在0.6～30 ng/g，回收率91%～99%。結(jié)論 該方法簡便準(zhǔn)確，靈敏度高，可作為保健品及中成藥非法添加降糖類藥物的測定方法。

【關(guān)鍵詞】MRM；液相色譜；質(zhì)譜；非法添加；降糖藥

在日常工作中，食品和中成藥中檢出降糖類藥物的現(xiàn)象日益突出，有的含量較高，有的含量較低，造假者利用患者充分信任食品和中成藥的心理，肆意添加降糖類西藥，給廣大患者的健康帶來嚴(yán)重威脅。本文用HPLC-MS/MS法檢出了鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、馬來酸羅格列酮，從保留時(shí)間、一級質(zhì)譜、二級質(zhì)譜三個(gè)方面判斷食品和中成藥中是否添加降糖類藥物，檢出違法添加西藥的種類同文獻(xiàn)［1］報(bào)道的一致。

1 研究方法與結(jié)果

1.1 儀器、試劑試藥：LC-20AD液相色譜儀-API4000+質(zhì)譜儀，Thermo冷凍離心機(jī)，型號：ST-16R，Synthesis A10超純水系統(tǒng)，XS-205DU電子天平（德國梅特勒公司），KQ-200KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲波儀器有限公司）。

甲醇（色譜純，默克公司）乙酸鈉（色譜純），實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

對照品鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、鹽酸二甲雙胍、格列喹酮、格列吡嗪、鹽酸吡格列酮、格列齊特、格列美脲、瑞格列奈、馬來酸羅格列酮（中國食品藥品檢定院）。

1.2 溶液制備

1.2.1 對照品儲備液：準(zhǔn)確稱取含鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、鹽酸二甲雙胍、格列喹酮、格列吡嗪、鹽酸吡格列酮、格列齊特、格列美脲、瑞格列奈、馬來酸羅格列酮各10.0 mg，分別用甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，配成1 mg/mL儲備液，于4 ℃下保存，使用前用甲醇稀釋至所需濃度。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)混合使用液1：分別準(zhǔn)確吸取1.0 mL各對照品儲備液于100 mL容量瓶中用甲醇定容。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)混合使用液2：準(zhǔn)確吸取1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)混合使用液1于100 mL容量瓶中用甲醇定容至刻度。

1.2.4 供試品溶液：取本品10粒，傾出內(nèi)容物，研碎，混勻，精密稱取一次口服劑量的內(nèi)容物，加甲醇25 mL超聲處理20 min，靜置，放冷，以8000 r/min離心15 min取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后，取0.1 mL置100 mL容量瓶，用甲醇稀釋至刻度，作為供試液。

1.3 色譜條件：參考相關(guān)文獻(xiàn)［2］：采用Waters Atlantis T3色譜柱（2.1 mm× 100 mm，5 μm）；用含0.01 mol/L的乙酸銨水溶液（A）-甲醇（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0～30 min，30%～40% B，30～40min，40%→60% B，40～60 min，60%～70% B，60～70 min，70% B，70～72 min，70%～30%B，72～77 min，30%B；流速為0.3 mL/min進(jìn)樣量1 μL。

1.4 質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧電離源，采用正離子模式檢測，CAD（噴撞氣）：4 psi；CUR（氣簾氣）25 psi；GS1（噴霧氣）65 psi；GS2（輔助加熱氣）65 psi；IS（離子化電壓）5500 V；TEM（溫度）600 ℃；采用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

1.5 方法與結(jié)果

1.5.1 線性關(guān)系及檢出限：取各對照儲備液，準(zhǔn)確配制一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進(jìn)樣測定3次，以各物質(zhì)特征碎片離子峰面積平均值（Y）對被測組分的的質(zhì)量濃度（X，μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍及定量限。分別以信噪比（S/N）等于3和10為標(biāo)準(zhǔn)，測得10個(gè)待測組分的檢出限及定量限，見表1。

表1　10化合物的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍檢出限及定量限（n=3）

1.5.2 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批次樣品6份，按“1.2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下測定，測定峰面積，結(jié)果顯示各組分特征碎片離子峰面積的RSD為0.7%～3.0%，表明該方法有較好的精密度。

取同一批次樣品按“1.2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)條件下分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)行測定，測定峰面積，結(jié)果顯示各物質(zhì)特征碎片離子峰面積的RSD為0.6%～3.0%，表明供試品溶液在10 h穩(wěn)定。

1.5.3 樣品含量測定：分別精密稱取不同批號的樣品，按“1.2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行含量測定，把各組分峰面積帶入回歸方程計(jì)算計(jì)算樣品的含量結(jié)果見表2。

表2　樣品測定結(jié)果（mg/一次口服劑量）

表3 加樣回收率試驗(yàn)

1.5.4 加樣回收率試驗(yàn)：各取未含降糖類藥物的空白基質(zhì)丸劑、膠囊劑、片劑一次劑量，照表3添加對照品量。

2 討 論

2.1 本文參照國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2009029的方法進(jìn)行了HPLC的檢驗(yàn)，原標(biāo)準(zhǔn)將鹽酸二甲雙胍和鹽酸苯乙雙胍和其余8種物質(zhì)分開，用不同的液相色譜方法檢驗(yàn)，本文用一種液相色譜方法同時(shí)檢測10種成分，提高了效率。

2.2 本文梯度洗脫程序較原標(biāo)準(zhǔn)延長了30 min，在75 min洗脫出了較多雜質(zhì)，10種成分也得到了較好分離。

2.3 HPLC-MS/MS法采用Waters色譜柱，柱壓較低，在樣品處理上較HPLC-DAD法多稀釋了1000倍，各物質(zhì)特征碎片離子峰面積卻達(dá)到了104，檢測出樣品含有鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、羅格列酮3種違禁成分，與對照品的一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜高度匹配。

2.4 HPLC-MS/MS法采用正離子掃描，得到的是M+1質(zhì)譜離子，鹽酸苯乙雙胍、鹽酸二甲雙胍、馬來酸羅格列酮溶解于甲醇后得到的是脫鹽的離子。參照文獻(xiàn)選用甲醇為溶劑。

參考文獻(xiàn)

［1］ 肖樹雄，李楊杰.由降糖中成藥和保健食品檢驗(yàn)情況探索非法添加化學(xué)成分的系統(tǒng)快篩思路［J］.藥物分析雜志，2011，31（2）:418.

［2］ 張喆，高青，余倩.中藥制劑及保健品中違禁添加9種化學(xué)降糖藥的HPLC-MS/MS定性檢測［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（1）:39.

中圖分類號：R9

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）01-0036-02