面神經夾閉建立大鼠面癱模型

李 瑤, 高小莉, 陳健康, 王四旺, 謝艷華(. 陜西中醫藥大學藥學院, 咸陽 7046;. 第四軍醫大學藥學系天然藥物學教研室, 西安 700;. 第四軍醫大學教學實驗中心, 西安 700)

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面神經夾閉建立大鼠面癱模型

李 瑤1, 高小莉2, 陳健康3, 王四旺2, 謝艷華2
(1. 陜西中醫藥大學藥學院, 咸陽 712046;
2. 第四軍醫大學藥學系天然藥物學教研室, 西安 710032;
3. 第四軍醫大學教學實驗中心, 西安 710032)

[摘要]目的 建立操作簡便、發病率高、死亡率低的大鼠面癱模型制作方法。方法 SD大鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，分別用蚊式鉗閉合三齒夾閉大鼠右側耳后面神經主干6 min、8 min、10 min、12 min、14 min，記錄各組大鼠面神經復合動作電位(CMAP)波幅變化情況，觀察大鼠的一般行為學指標。結果 造模6 min、8 min與造模之前比較，面神經CMAP波幅無差異，造模10 min、12 min、14 min與造模之前相比較，大鼠面神經CMAP波幅明顯減小并趨于0; 行為學評分結果表明，造模6 min、8 min大鼠為不完全面癱，造模10 min、12 min、14 min大鼠完全面癱，造模12 min、14 min大鼠與造模10 min相比無顯著差異。結論 用蚊式鉗閉合三齒夾閉面神經主干10 min，面神經CMAP下降波幅和行為學評分均表明大鼠完全面癱，故該方法可作為大鼠面癱模型建立的優選方法。

[關鍵詞]大鼠; 面癱模型; 面神經; 復合動作電位

面癱是指以面部表情肌群運動功能障礙為主要特征的一種常見疾病，臨床上主要表現為不自主流淚，眼睛閉合不全，口眼歪斜等[1]。面部表情肌的運動受面神經的支配，面神經一旦受損造成面癱，會對患者的生理和心理造成重大影響。面癱發生的原因目前尚不清楚，建立完善的面癱動物模型有助于更清晰了解面神經纖維的損傷情況，為臨床治療面癱提供依據。

目前面癱模型的造模方法國內外報道很多，根據模型制作方法不同，面癱動物模型主要包括外傷性、病毒性、冷空氣及缺血性四種[2,3]，且這四種面癱動物模型均具有各自的優缺點。為建立更符合臨床實際情況的模型，本實驗通過對劉悅等[4]造模方法的改進，建立了一種操作簡便、死亡率低、模型成功率高的面癱動物模型制作方法。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與材料

清潔級SD大鼠50只, 體質量190～250 g, 雌雄各半, 由第四軍醫大學實驗動物中心提供[SCXK(軍) 2012-0007]。適應性飼養1周后, 隨機分為5組，每組10只。每籠5只分別飼養于IVC內，室內溫度21～25 ℃，相對濕度40%～60%，人工控制光照晝夜各12 h[SYXK(陜)2012-001]。顆粒飼料(第四軍醫大學實驗動物中心提供)喂養, 自由飲水, 每周更換墊料2次。BL-420S生物機能實驗系統(成都泰盟科技有限公司)、質量分數10%水合氯醛(上海山浦化工有限公司)、蚊式鉗(12.5 cm直頭，上海金鐘醫療器械公司)。

1.2 造模方法

所有SD大鼠采用質量分數10%水合氯醛(3 mL/

kg)腹腔注射麻醉后, 右側面部去毛, 消毒, 耳后縱切口，于腮腺后上緣暴露并分離面神經主干，在面神經主干近端一側插入電極給予刺激，在其遠側端口插入電極，誘發面神經復合動作電位(CMAP)，測定各組大鼠面神經損傷之前的面神經CMAP波幅后, 用蚊式鉗閉合三齒分別夾閉面神經主干6 min、8 min、10 min、12 min、14 min, 測定夾閉后面神經CMAP波幅, 測定結束后縫合皮膚, 即制成面癱動物模型。術后隔日觀察大鼠一般行為學狀況。

1.3 觀察指標

1.3.1 大鼠面部一般行為學表現 于術后麻醉恢復后隔日, 觀察大鼠面部運動情況。大鼠面部一般行為學指標主要包括瞬目反射、觸須運動和鼻尖位置。瞬目反射的誘發方法[5]: 用5 mL注射器18號針頭距離鼠眼2 cm處, 向眼部吹入空氣, 觀察大鼠眼瞼活動及閉合情況, 雙側無明顯差異記0分, 右側較對側閉合延遲記1分, 右側眼瞼不能閉合記2分;計數30 s內大鼠雙側的觸須運動[6]: 雙側胡須運動無明顯差異記0分，右側胡須運動較對側減弱記1分, 右側胡須運動消失記2分; 觀察大鼠鼻尖位置: 0分為居中, 1分鼻尖偏向對側。將3項指標的評分相加進行面癱的鑒定和評價: 0～1分為無面癱, 2～3分為不完全面癱，4～5分為完全性面癱[7]。 1.3.2 大鼠面神經生物電 分離出大鼠右側面神經主干后，在面神經主干近端一側插入電極給予刺激，在其遠側端口插入電極，誘發面神經CMAP，用BL-420S生物機能實驗系統測定各組面神經損傷之前的CMAP波幅，測定結束后，分別用蚊式鉗閉合三齒夾閉面神經主干6 min、8 min、10 min、12 min、14 min，并測定夾閉損傷不同時間之后的CMAP波幅。

1.4 統計學方法

數據以x-± s表示，采用SPSS19.0進行統計，行為學評分組間比較和動作電位波幅組間比較均采用方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠面部一般行為學指標

經過觀察, 大鼠面神經損傷之前, 各組大鼠面部一般行為學評分為0，且各組間評分均無明顯差異(P>0.05)。造模6 min、8 min的模型組, 行為學評分均未達到完全面癱的評分標準, 而造模10 min、12 min、14 min大鼠行為學評分均達到完全面癱評分標準, 且與造模8 min比較差異顯著(P<0.05); 造模12 min、14 min與造模10 min比較行為學評分無明顯差異(P>0.05)(表1)。

表1 大鼠面神經處理不同時間后一般行為學評分Table 1 The ethology score of rats after facial nerve trunk clipped for different times

造模6 min, 大鼠鼻尖無變化，胡須運動較對側減弱; 造模8 min，大鼠鼻尖稍偏向對側，胡須運動和眼瞼閉合較對側緩慢; 造模10 min、12 min、14 min，大鼠鼻尖偏向對側，右側眼瞼不能閉合、胡須運動基本消失，判定為完全面癱，經比較，造模10 min、12 min、14 min組間動物行為學狀況無明顯差異(圖1)。

2.2 大鼠面神經CMAP波幅

造模6 min、8 min前與造模后相比，大鼠面神經CMAP波幅無明顯差異(P>0.05), 造模10 min、12 min、14 min與造模前相比，大鼠面神經CMAP波幅有明顯差異(P<0.05)(表2, 圖2)。

表2 大鼠面神經處理不同時間CMAP波幅Table 2 The CMAP amplitude of rats after facial nerve trunk clipped for different times

圖1 造模不同時間大鼠面部表現Figure 1 The facial expression of rats after facial nerve trunk clipped for different times

圖2 造模10 min前后CMAP波幅Figure 2 The CMAP amplitude of rats after facial nerve trunk clipped for ten minutes

3 討論

面癱是臨床常見病之一，現代醫學稱之為面神經麻痹、面神經炎。關于面癱的發病原因眾說紛紜，中醫通常認為風、寒、熱、外傷是引起面癱的主要原因。臨床調查發現，90%的面癱患者有恐懼和緊張感，對日常生活有較大影響。目前臨床主要用針灸法治療面癱，面癱動物模型的建立對面癱研究有著重要的推動作用[8]。

面神經是以運動神經為主的混合神經，主要支配面部表情肌和傳導舌前2/3的味覺及支配舌下腺、下頜下腺和淚腺的分泌。面神經核位于腦橋，分為上下兩部分，上半部分受雙側大腦皮質運動區的支配，并發出運動纖維支配同側顏面上半部的肌肉，下半部分僅受對側大腦皮質的支配，并發出運動纖維支配同側顏面下半部分的肌肉。面神經出莖乳孔后迂回向上向前約105°而達腮腺。面神經受到擠壓、牽拉、斷裂、溫度刺激及其他形式的損傷時，其傳導功能發生異常，進而引起面肌癱瘓，即中醫所說的面癱[9]。由于面神經獨特的生理結構和功能，常被認為是進行神經系統損傷和再生體內實驗研究的理想工具。

面神經CMAP波幅歷來被作為判斷神經損傷的重要指標，研究表明[10]，面神經CMAP波幅的下降程度和面神經的損傷程度有關，損傷越嚴重，CMAP波幅的下降比例越大，所以可以將面神經CMAP波幅下降比值作為判斷面癱模型是否制作成功的電生理指標。

目前面癱造模的動物種類繁多，造模方法各具特色，主要通過神經牽拉、重創、接種病毒等造成面神經損傷而引起面癱，但很少有符合中醫臨床發病規律的面癱病癥的動物模型，用于造模動物的年齡、面神經卡壓時間、神經切斷長度等大都沒有統一標準[11]，且現有的面癱模型中，采用切斷面神經法建立的模型死亡率較高，部分切斷的神經纖維近端會膨大形成神經膠質瘤; 病毒性面癱動物模型的制備，需要接種單純皰疹病毒，在實驗中病毒的攻擊途徑與自然感染途徑差別較大，且病毒與人之間的感染也有危險性，不易于推廣; 冷空氣刺激法建立的面癱模型，雖然與臨床面癱的發病機理比較貼近，但是此模型的造模成功率低，且受個體因素影響較大。

本實驗采用蚊式鉗閉合三齒夾閉大鼠面神經主干6 min、8 min、10 min、12 min、14 min, 檢測大鼠面神經CMAP波幅，確定用蚊式鉗閉合三齒夾閉面神經主干10 min為大鼠面癱模型的優選制備方法。該方法簡便易行，成功率高，對面癱的研究和治療有重要應用價值。

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Establishing Facial Paralysis Model in Rats by Clipped Facial Nerve

LI Yao1, GAO Xiao-li2, CHEN Jian-kang3, WANG Si-wang2, XIE Yan-hua2
(1. Institution of Pharmacy, Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine, Xian yang 712046, China; 2. Department of Nature Medicine, School of Pharmacy, the Fourth Military Medical University, Xi’an 710032, China; 3. Experimental Teaching Centre, the Fourth Military Medical University, Xi’an 710032, China)

[Abstract]Objective To establish a high morbidity and low mortality of animal model for facial paralysis in rats, which is easy to operate. Methods Fifty SD rats with half male and female were randomly divided into five groups, each group with 10. The facial nerve trunk of rats were clipped with mosquito forceps closing three tooth for 6 min, 8 min, 10 min, 12 min and 14 min. The compound muscle action potential (CMAP) amplitude of facial nerve trunk was measured by biological function experiment system, and the general behavior indices of all the rats were observed next day after injury. Results The CMAP amplitude of rats after facial nerve trunk clipped for 6 min and 8 min respectively were the same as none clipped rats, but it decreased obviously and tended to zero after clipped for 10 min, 12 min and 14 min. In addition, ethology score results showed that the models of 6 min, 8 min rats performed incomplete paralysis symptoms, the models of 10 min,12 min,14 min rats were facial paralysis completely and the models of 14 min and 12 min rats had no obvious difference compared with the model of 10 min. Conclusion The decreased CMAP amplitude of facial nerve trunk and ethology score results showed that clipping the facial nerve trunk with the mosquito forceps closing three tooth for 10 min was the best way to establish rats model of facial paralysis.

[Key words]Rat; Facial paralysis model; Facial nerve; Compound muscle action potential (CMAP)

[中圖分類號]Q95-33

[文獻標識碼]A

[文章編號]1674-5817(2016)03-0190-05

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.006

[收稿日期]2016-02-02

[作者簡介]李 瑤(1991-), 女, 碩士研究生, 研究方向: 中藥飲片炮制原理及標準化研究。E-mail: 879220847@qq.com

[通訊作者]謝艷華, 女, 博士, 副教授, 碩士研究生導師, 研究方向: 生藥活性成分作用機制研究。E-mail: xieyanh@fmmu.edu.cn