葡萄雜交后代抗炭疽病篩選鑒定

高曉銘，樊秀彩，張國海，張　穎，姜建福，孫海生，劉崇懷

(1. 河南科技大學(xué) 林學(xué)院,河南洛陽　471000 ；2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 鄭州果樹研究所,鄭州　450009)

葡萄雜交后代抗炭疽病篩選鑒定

高曉銘1，樊秀彩2，張國海1，張穎2，姜建福2，孫海生2，劉崇懷2

(1. 河南科技大學(xué) 林學(xué)院,河南洛陽471000 ；2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 鄭州果樹研究所,鄭州450009)

摘要探討葡萄炭疽病的抗性鑒定方法，對雜交后代的抗性單株進(jìn)行有效選擇，可以服務(wù)于葡萄炭疽病抗性育種。選用對葡萄炭疽病具有較高抗性的中國野生刺葡萄‘黑珍珠’和對葡萄炭疽病敏感的歐亞種葡萄‘里扎馬特’為親本進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交，獲得雜交群體，分別用離體葉片、果實、果實浸提液3種材料，采用不同接種方法，對親本材料和雜交后代單株的炭疽病抗性進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，菌液接種法更適用于葡萄葉片和果實的抗性鑒定；φ=70%乙醇或丙酮均可作為浸提劑用于果實浸提液的抗性鑒定。后代群體中對葡萄炭疽病的高抗、抗、中抗、敏感以及高感單株的比例分別30.77%、35.90%、12.82%、15.38%、5.12%。

關(guān)鍵詞葡萄；葡萄炭疽病；抗性；鑒定方法

葡萄是世界上種植面積最廣的果樹之一，也是中國栽培最廣泛的果樹之一[1]。2012年中國葡萄栽培面積已達(dá)55.2萬hm2，葡萄產(chǎn)量843萬t[2]。葡萄炭疽病是危害葡萄生產(chǎn)的四大病害之一，嚴(yán)重影響葡萄的質(zhì)量及產(chǎn)量[3-4]，一般造成葡萄減產(chǎn)10%～20%[5]。葡萄炭疽病在夏季危害嚴(yán)重，主要在著色期或成熟期的果實上發(fā)生，葡萄進(jìn)入著色期開始盛發(fā)，高溫多雨的年份和地區(qū)發(fā)病嚴(yán)重，病穗率高達(dá)50%～70%[6]，高濕環(huán)境持續(xù)時間越長病情越嚴(yán)重[7]。炭疽病是一種真菌性病害，引起葡萄炭疽病的是膠胞炭疽菌[C.gloeosporioides( Penz.) Sacc.]，其菌落多變，主要以分生孢子侵染[8]。目前，對葡萄炭疽病防治多用化學(xué)藥劑防治。葡萄資源中不乏抗炭疽病的種質(zhì)資源，因此，選育抗性品種是根本的解決途徑，也是防治該病最經(jīng)濟(jì)、有效、安全的方法。

品質(zhì)優(yōu)良的歐亞種和歐美雜交種葡萄是中國主要的栽培種類，但其對葡萄炭疽病的抗性較弱[9]。而中國野生葡萄資源相當(dāng)豐富，前人的研究表明，這些野生種蘊含大量寶貴的抗性資源[10]。中國原產(chǎn)的野生葡萄中刺葡萄、毛葡萄、山葡萄、華東葡萄、蘡薁葡萄對炭疽病有很強(qiáng)的抗性[11]，但這些抗病的野生葡萄品質(zhì)低劣，不宜直接利用。本研究選用野生刺葡萄‘黑珍珠’與品質(zhì)優(yōu)異的歐亞種‘里扎馬特’進(jìn)行種間雜交，以期得到炭疽病抗性強(qiáng)的優(yōu)質(zhì)雜交新品種或新材料，同時摸索出一套適合葡萄炭疽病抗性鑒定的方法。

1材料與方法

1.1材 料

1.1.1試驗材料材料均采自鄭州果樹研究所國家果樹種質(zhì)葡萄資源圃，親本‘黑珍珠’‘里扎馬特’及其雜交后代，對照品種‘巨峰’‘美人指’‘洪江刺09’及‘刺葡萄雄株’。

葉片抗性鑒定材料：選取試驗品種健康枝條中上部的成熟葉片。

果實抗性鑒定材料：果實成熟期，選擇大小一致的健康果實，進(jìn)行離體果實抗性鑒定。

果實浸提液抗性鑒定材料：成熟果實，去皮去籽，果肉保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2病菌培養(yǎng)葡萄炭疽病病原菌(膠胞炭疽菌)由北京市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)環(huán)境保護(hù)研究所李興紅研究員惠贈，膠胞炭疽菌菌種編號為GZAASS.08601。菌種在4 ℃保存?zhèn)溆茫?80 ℃長期保存。將病菌接種于PDA固體培養(yǎng)基上，28 ℃下黑暗培養(yǎng)，待菌絲布滿后，用接種針劃傷菌絲促進(jìn)產(chǎn)生孢子。

1.1.3菌液制備在產(chǎn)生孢子的培養(yǎng)皿中加入適量無菌水，淹沒菌絲體靜置10 min，再用滅菌的接種環(huán)在菌絲表面輕輕來回刮動，使游動孢子充分釋放到水中，將孢子懸浮液吸到三角瓶中，用血球計數(shù)板測定每毫升孢子懸浮液中的孢子數(shù)。將制備的孢子懸浮液稀釋至孢子數(shù)為104～105mL-1后用于葉片和果實接種鑒定，稀釋至孢子數(shù)為103～104mL-1后用于果實浸提液接種鑒定。

1.2葉片抗性鑒定

1.2.1菌餅接種法參考張穎等[9]的方法并進(jìn)行改良。選取健康葉片，每個處理3個葉片，正面刺傷(避開葉片主脈)，菌餅分別接種刺傷處，每個葉片接種4～6處，分布于葉片的不同位置。在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)，24 h調(diào)查1次。以接種120 h后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)。

1.2.2菌液接種法參考沈會芳等[12]的方法并進(jìn)行改良。選取健康葉片，清水沖洗后用φ=70%酒精擦拭一遍，自然晾干后用于接種，每個處理3個葉片。對葉片進(jìn)行正面一針刺傷，刺傷時避開葉片主脈。在刺傷處滴30 μL孢子菌懸液，每個葉片接種4～6處，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)，每隔24 h調(diào)查1次，以接種120 h后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)。

1.2.3病斑純化鑒定切取葉片上的病斑組織，用w=0.5%次氯酸鈉溶液短時浸泡，然后在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)。純化培養(yǎng)至產(chǎn)生孢子，觀察孢子形態(tài)，確認(rèn)是否膠胞炭疽菌引起炭疽病所致的病斑。

1.3果實抗性鑒定

1.3.1菌液接種法參考趙遠(yuǎn)征等[13]的方法并進(jìn)行改良。用清水沖洗果實，再放入φ=70%乙醇溶液中浸泡1 min進(jìn)行表面快速消毒，在超凈工作臺晾干。每個單株的果實30粒左右，在果實表面噴灑孢子懸浮液。置于28 ℃黑暗培養(yǎng)，48 h調(diào)查1次，以接種144 h后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)。

1.3.2涂抹接種法對果實進(jìn)行表面快速消毒，用接種環(huán)刮取病菌涂抹于果實表面，用濾紙進(jìn)行保濕，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)，每隔48 h調(diào)查1次，以接種144 h后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)。

對果實抗性進(jìn)行鑒定，在保濕條件下，部分葡萄果實易裂果，因此2種接種方法均每12 h對濾紙噴1次水，保持沾濕但不滴水狀態(tài)，以保證在滿足濕度要求的條件下不發(fā)生裂果。

1.4果實浸提液抗性鑒定

1.4.1果實浸提液的提取稱取5 g超低溫保存的果肉，加入等量浸提劑，浸提劑分別為φ=70%乙醇、丙酮，室溫下浸提24 h，離心棄去殘渣，取上清液。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液濃縮，制成濃縮原液，即1 mL提取液中含有1 g試驗材料的提取物，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2處理方法用濾紙片擴(kuò)散法進(jìn)行鑒定。用打孔器將濾紙片制成直徑6 mm的圓形濾紙片，121 ℃高溫滅菌，用于濾紙片擴(kuò)散鑒定。在無菌培養(yǎng)皿中加入融化的PDA培養(yǎng)基15 mL，凝固待用。移液槍吸取孢子數(shù)為103～104mL-1的孢子懸浮液200 μL，加入平板培養(yǎng)基，涂布均勻待用。

將已滅菌的圓形濾紙片在果實浸提液中完全浸透，再將濾紙片放置到接種菌液的培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)基放置3個，使其均勻分布。每個品種設(shè)置3個重復(fù)。以只接種菌液的培養(yǎng)基為對照，28 ℃黑暗培養(yǎng)。接種48 h后，觀測并記錄抑菌圈直徑，取平均值，作為浸提液抗性鑒定數(shù)據(jù)。

1.5抗性分級標(biāo)準(zhǔn)的制定

根據(jù)鑒定結(jié)果分別根據(jù)葉片、果實、果實浸提液發(fā)病情況劃分抗性等級。

2結(jié)果與分析

2.1不同接種方法比較分析

2.1.1葉片上不同接種方法比較炭疽病是葡萄果實的主要病害，在葉片上也有發(fā)生。采用菌液接種法和菌餅法接種法對‘里扎馬特’和雜交單株‘7-1-4’的葉片進(jìn)行接種鑒定，從感染的病斑可明顯看出，在同一品種葉片上，菌液接種法發(fā)病病斑大小較為均勻一致，而菌餅法接種的同一品種的同一葉片上病斑大小不夠均勻(圖1)。因此，利用葡萄葉片作為材料進(jìn)行抗炭疽病鑒定，采用葉片菌液接種法較為適宜。

利用菌餅法在歐亞種品種‘里扎馬特’和刺葡萄品種‘黑珍珠’的葉片上接種炭疽病病原菌，2個品種葉片產(chǎn)生的病斑大小的組內(nèi)方差值遠(yuǎn)大于菌液法，表明菌餅法接種，一組重復(fù)內(nèi)的病斑大小差異顯著，影響對抗性等級的劃分和抗性程度的判斷。菌液法接種引起的病斑在一組重復(fù)內(nèi)差異不顯著，更適宜于葉片炭疽病抗性鑒定(表1)。

圖1　菌餅接種法(A1、B1)與菌液接種法(A2、B2)葉片發(fā)病情況

重復(fù)Repetition里扎馬特Rizamat菌餅法Bacterialcakeinoculation菌液法Bacterialiquidinoculation黑珍珠Heizhenzhu菌餅法Bacterialcakeinoculation菌液法BacterialiquidinoculationA3.970.401.370.27B3.040.000.670.30C3.640.271.600.17

注：每重復(fù)內(nèi)病斑大小的方差值越大，則重復(fù)內(nèi)差異越大，反之差異越小。

Note:The greater the variance values of disease spot size within each repetition,the greater the difference,on the contrary,the smaller the difference.

2.1.2果實上不同接種方法比較在果實上采用菌液接種法和涂抹接種法進(jìn)行接種，接種48 h后果實均沒有表現(xiàn)明顯發(fā)病癥狀；接種96 h后和接種144 h后，一部分不發(fā)病的果實，2種接種方法均不發(fā)病；另一部分果實顯現(xiàn)出發(fā)病癥狀，且用2種方法接種的同一單株的果實發(fā)病病斑均勻一致。利用葡萄果實為炭疽病抗性鑒定材料，這2個接種方法均能誘發(fā)葡萄果實發(fā)病，致病力相同。但菌液法操作更為簡便，且在接種以后培養(yǎng)階段更易控制濕度。因此，利用葡萄果實作為材料進(jìn)行抗炭疽病鑒定，采用果實菌液接種法較為適宜。

2.1.3不同浸提劑提取的果實浸提液抗性鑒定結(jié)果比較使用φ=70%乙醇、丙酮作為浸提劑分別提取‘里扎馬特’‘黑珍珠’‘7-1-1’‘7-1-6’‘7-1-9’‘7-1-2’‘7-3-2’‘7-3-3’果實獲得浸提液，進(jìn)行抑菌試驗，其浸提液的抑菌圈直徑差異不顯著，同一品種的不同浸提液表現(xiàn)出相同的抑菌效果。不同抗性品種之間，表現(xiàn)出不同抑菌效果，‘里扎馬特’‘7-1-6’‘7-3-2’沒有產(chǎn)生抑菌圈，對葡萄炭疽病病原菌沒有抗性；‘黑珍珠’‘7-1-1’‘7-1-9’‘7-1-2’‘7-3-3’均產(chǎn)生大小不同的抑菌圈，表現(xiàn)出對葡萄炭疽病病原菌不同程度的抗性(圖2)。用φ=70%乙醇或丙酮作為浸提劑提取果實均可對其浸提液進(jìn)行炭疽病抗性的鑒定。

2.2抗性鑒定結(jié)果

對親本、對照品種和雜交后代群體，分別采用葉片菌液接種法、果實菌液接種法和果實浸提液抑菌圈試驗法進(jìn)行炭疽病抗性鑒定。根據(jù)鑒定結(jié)果制定抗性鑒定標(biāo)準(zhǔn)，并對后代群體進(jìn)行葡萄炭疽病抗性分級。

Ri.里扎馬特　Rizamat；HZ. 黑珍珠　Heizhenzhu

2.2.1抗性分級標(biāo)準(zhǔn)以接種120 h后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)，根據(jù)親本、對照品種、后代群體的葉片鑒定結(jié)果劃分其抗性等級。葉片葡萄炭疽病抗性分級標(biāo)準(zhǔn)見表2。

以接種144 h后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)，根據(jù)親本、對照品種、后代群體的果實鑒定結(jié)果劃分果實葡萄炭疽病抗性等級。果實葡萄炭疽病抗性分級標(biāo)準(zhǔn)見表3。

以接種48 h后的抑菌圈直徑為鑒定數(shù)據(jù)，根據(jù)親本、對照品種、后代群體的果實浸提液鑒定結(jié)果劃分其抗性等級，抗性分級標(biāo)準(zhǔn)見表4。

表2　葉片葡萄炭疽病抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

表3　果實葡萄炭疽病抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

表4　果實浸提液葡萄炭疽病抗性分級標(biāo)準(zhǔn)

2.2.2鑒定結(jié)果及分析根據(jù)葉片、果實、果實浸提液對葡萄炭疽病的抗性分級標(biāo)準(zhǔn)，對后代群體的抗性等級進(jìn)行劃分。鑒定結(jié)果顯示葉片炭疽病抗性鑒定結(jié)果與果實炭疽病抗性鑒定結(jié)果一致性達(dá)到95.45%(表5)。這一結(jié)果表明，葉片的炭疽病抗性鑒定結(jié)果與果實炭疽病的抗性鑒定結(jié)果較為一致。葉片抗性鑒定與果實浸提液的抗性鑒定結(jié)果基本一致，僅在‘7-1-1’‘7-3-3’和‘7-1-9’單株上的抗性等級有所不同(表6)。

對‘里扎馬特’和‘黑珍珠’的雜交后代進(jìn)行葉片炭疽病抗性鑒定，后代群體中對葡萄炭疽病的高抗(HR)單株、抗性(R)單株、中抗(MR)單株、敏感(S)單株以及炭疽病高感(HS)單株分別占參試群體的30.77%、35.90%、12.82%、15.38%、5.12%，后代群體對葡萄炭疽病的不同抗性等級表現(xiàn)為連續(xù)分布。

表5　葉片和果實對葡萄炭疽病的抗性鑒定結(jié)果

表6　浸提液對葡萄炭疽病的抗性鑒定結(jié)果

3討 論

在篩選葡萄抗炭疽病單株的過程中，合適的鑒定材料和有效的抗性鑒定方法是抗性育種的關(guān)鍵。葡萄炭疽病抗性的研究多采用離體果實進(jìn)行鑒定[12-13]，有研究發(fā)現(xiàn)葡萄炭疽病菌不僅侵染漿果，也可以侵染葡萄的當(dāng)年生綠色組織[14]。因此，本研究用葉片、果實、果實浸提液分別進(jìn)行葡萄炭疽病抗性鑒定，結(jié)果顯示，葉片的抗性鑒定結(jié)果與果實、果實浸提液炭疽病的抗性鑒定結(jié)果較為一致，葉片鑒定結(jié)果具有一定代表性。并且采用離體接種葉片的鑒定方法快速、易操作，因此，可用葉片作為葡萄炭疽病抗性鑒定的材料。

葉片作為抗病性鑒定材料時，常用的鑒定方法有菌餅接種法[9,15]和菌液接種法[12,16]。本研究對2種方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在同一品種葉片上，用菌液法接種比用菌餅法接種的葉片發(fā)病病斑均勻。雖然接種葉片所用菌餅來自同一菌種培養(yǎng)皿，但無法保證各菌餅的帶菌量完全一致，進(jìn)而導(dǎo)致不同菌餅塊的致病力不同，這可能是造成同一葉片上的病斑大小不均勻的原因之一。因此，菌液法更適用于葡萄葉片和果實的抗性鑒定。

對‘里扎馬特’和‘黑珍珠’及其雜交后代進(jìn)行葉片炭疽病抗性鑒定，雜交后代抗性不同等級的連續(xù)分布表現(xiàn)出數(shù)量性狀遺傳的特征，因此，推測葡萄炭疽病抗性是由多基因控制的，雜交后代群體的炭疽病抗性主要取決于炭疽病抗性強(qiáng)的野生刺葡萄‘黑珍珠’，同時也受炭疽病敏感的歐亞種‘里扎馬特’的影響。這一研究結(jié)果與田莉莉等[17]認(rèn)為葡萄炭疽病抗性是由多基因控制的，且在野生種中存在抗炭疽病的主效基因，在歐亞種中存在抗性的微效基因的觀點一致。

張軍科等[18]在研究葡萄白粉病抗性中發(fā)現(xiàn)，感病品種表皮組織排列較疏松,抗性品種表皮柵欄組織和海綿組織排列緊密，因此，推測不同品種葉片表面的蠟質(zhì)層，以及葉片解剖結(jié)構(gòu)的不同可能在不同程度上影響葉片的抗病性。姜建福等[19]研究表明，中國野生葡萄的許多種在葉片組織緊密度等方面均高于北美種群的河岸葡萄和沙地葡萄，具有更高的抗性基礎(chǔ)。然而Waqar等[20]在用葡萄葉片提取液抑制某些致病菌株的試驗中發(fā)現(xiàn)，葉片提取液中含有抗菌物質(zhì)。本試驗中葉片經(jīng)過一針輕刺傷處理，刺傷可能會破壞表皮組織結(jié)構(gòu)削弱其對炭疽病菌的免疫力。而研究結(jié)果表明葉片抗性鑒定結(jié)果與果實、果實浸提液抗性鑒定結(jié)果無顯著差異，因此推測，參試種質(zhì)葉片的炭疽病抗性不僅與其表皮結(jié)構(gòu)有關(guān)，也可能與其內(nèi)部免疫物質(zhì)有關(guān)。

王躍進(jìn)等[21]研究表明，刺葡萄果實的表皮細(xì)胞層和角質(zhì)層明顯厚于歐洲葡萄品種‘佳利釀’，而且野生種葡萄表皮細(xì)胞排列緊密，有利于保護(hù)其免受病菌侵染。余旦華等[22]在研究葡萄果皮微結(jié)構(gòu)和抗炭疽病之間的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn)，果皮的小孔密度與感染炭疽病的程度呈顯著直線正相關(guān)關(guān)系。在本研究果實鑒定中發(fā)現(xiàn)，有果粉且果皮較厚的后代株系對炭疽病抗性較強(qiáng)，而果皮較薄、易裂果的后代株系抗性較弱。由此推測，特殊的果皮結(jié)構(gòu)可能會提高果實對葡萄炭疽病病菌的免疫能力。

參考文獻(xiàn)Reference：

[1]SUNG K H,WAN G K,HAE K Y,etal.Morphological variations,genetic diversity and pathogenicity ofColletotrichumspecies causing grape ripe rot in Korea[J].ThePlantPathologyJournal,2008,24(3):269-278.

[2]孫兆軍.中國葡萄栽培面積已達(dá)55.2萬公頃[J].中國果業(yè)信息,2012,29(1):53.

SUN ZH J.Grape cultivation in China has reached 552 000 hectares[J].ChinaFruitNews,2012,29(1):53(in Chinese).

[3]尚晶晶.中國葡萄炭疽病病原菌的鑒定及種群分化的研究[D].內(nèi)蒙古:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

SHANG J J.Indentification and pulation differentiation of pathogen caused grape anthracnose in China[D].Inner Mongolia:Inner Mongolia Agricultural University,2010(in Chinese).

[4]ALLEWELDR G,POSSINGHAM J V.Progress in grapevine breeding[J].TheoreticalandAppliedGeneties,1988,75(5):669-673.

[5]WHARTON P S,SCHILDER A C.Novel infection strategies ofColletotrichumacutatumon ripe blueberry fruit[J].PlantPathology,2008,57(1): 122-134.

[6]趙奎華.葡萄病蟲害原色圖鑒[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2012:9-13.

ZHAO K H.A Color Atlas of Grape Diseases and Pests[M].Beijing:China Agriculture Press,2012:9-13(in Chinese).

[7]毛愛軍,胡洽,耿三省.辣椒炭疽病抗病性鑒定技術(shù)及利用[J].華北農(nóng)學(xué)報,2004,19(2):87-91.

MAO A J,HU Q,GENG S SH.Studies on the inoculation technique for resistant varieties of pepper to anthraenose and the application[J].ActaAgriculturaeBorea-sinica,2004,19(2):87-91(in Chinese with English abstract).

[8]SUTTON B C.Colletotrichum:Biology,Pathology,and Control[M].UK:CAB International,Wallingford,1992:1-26.

[9]張穎,孫海生,樊秀彩,等.中國野生葡萄資源抗白腐病鑒定及抗性種質(zhì)篩選[J].果樹學(xué)報,2013(2):191-196.

ZHANG Y,SUN H SH,FAN X C,etal.Identification and evaluation of resistance ofVitisto grape white rot [J].JournalofFruitScience,2013(2):191-196(in Chinese with English abstract).

[10]賀普超,王躍進(jìn),王國英,等.中國葡萄屬野生種抗病性的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),1991,24(3):50-56.

HE P CH,WANG Y J,WANG G Y,etal.The studies on the disease-resistance of wildVitisspecies originated in China[J].ScientiaAgriculturaSinica,1991,24(3):50-56(in Chinese with English abstract).

[11]賀普超,任治邦.我國葡萄屬野生種對炭疽病抗性的研究[J].果樹科學(xué),1990(1):7-12.

HE P CH,REN ZH B.Studies of resistance to anthracnose for Chinese wildVitis[J].JournalofFruitScience,1990(1):7-12(in Chinese with English abstract).

[12]沈會芳,林壁潤,蒲小明,等.應(yīng)用離體葉片法鑒定菠蘿資源心腐病抗性[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,41(7):80-82,87.

SHEN H F,LIN B R,PU X M,etal.Identification of resistance toPhytophthoranicotianaein some pineapple materials by in vitro leaf method[J].GuangdongAgriculturalSciences,2014,41(7):80-82,87(in Chinese with English abstract).

[13]趙遠(yuǎn)征,劉志恒,李俞濤,等.大櫻桃黑斑病病原鑒定及其致病性研究[J].園藝學(xué)報,2013,40(8):1560-1566.

ZHAO Y ZH,LIU ZH H,LI Y T,etal.Studies on identification and pathogenicity of cherry black spot caused byAlternariaalternata[J].ActaHorticulturaeSinica,2013,40(8):1560-1566(in Chinese with English abstract).

[14]陳子文,余旦華,王保良,等.葡萄炭疽病的潛伏侵染與葡萄雜種實生苗抗炭疽病性狀的早期鑒定[J].中國果樹,1985(1):46-49.

CHEN Z W,YU D H,WANG B L,etal.Grape anthracnose of latent infection and early identification for anthracnose resistance traits of grape hybrid seeding[J].ChinaFruit,1985(1):46-49(in Chinese with English abstract).

[15]韋潔玲,黃麗麗,郜佐鵬,等.蘋果樹腐爛病室內(nèi)快速評價方法的研究[J].植物病理學(xué)報,2010,40(1):14-20.

WEI J L,HUANG L L,GAO Z P,etal.Laboratory evaluation methods of appleValsacanker disease caused byValsacerato sperma sensu Kobayash[J].ActaPhytopathologicaSinica,2010,40(1):14-20(in Chinese with English abstract).

[16]羅睿雄,黃建峰,張欣,等.229份杧果種質(zhì)對炭疽病抗性初步評價[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,33(3):36-40,49.

LUO R X,HUANG J F,ZHANG X,etal.Preliminary assessment on 229 accessions of mango germplasm for resistance to anthracnose[J].ChineseJournalofTropicalAgriculture,2013,33(3):36-40,49(in Chinese with English abstract).

[17]田莉莉,賀普超.葡萄屬種間雜交一代果實炭疽病抗性遺傳的研究[J].西北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1999,27(6):69-73.

TIAN L L,HE P CH.Studies on fruit resistance to anthracnose ofVitisinterspecific hybrid generation[J].JournalofNorthwestSci-TechUniversityAgricultureandForestry,1999,27(6):69-73(in Chinese with English abstract).

[18]張軍科,羅世杏,李小偉,等.白粉菌在不同抗病性葡萄葉片上的侵染過程比較[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2008,36(3):161-165,170.

ZHANG J K,LUO SH X,LI X W,etal.Comparisons on theUncinulanecatorinvasion procedure of resistant and susceptible grapes[J].JournalofNorthwestA&FUniversity(NaturalScienceEdition),2008,36(3):161-165,170(in Chinese with English abstract).

[19]姜建福,張穎,田智碩,等.葡萄屬植物葉片顯微和超微結(jié)構(gòu)觀察[J].西北植物學(xué)報,2012,32(7):1365-1371.

JIANG J F,ZHANG Y,TIAN ZH SH,etal.Observation on microtructure and ultrastructure of leaves inVitisL.[J].ActaBotanicaBoreali-occidentaliaSinica,2012,32(7):1365-1371(in Chinese with English abstract).

[20]WAQAR AHMAD,MUHAMMAD ILYAS KHAN,MUHAMMAD WAQAR,etal.In vitro antibacterial activity ofVitisviniferaleaf extracts against some pathogenic bacterial strains[J].AdvancesinBiologicalResearch,2014,8(2):62-67.

[21]王躍進(jìn),賀普超.中國葡萄屬野生種抗白腐病機(jī)制研究[J].北方園藝,1988(1):5-8.

WANG Y J,HE P CH.Study on the mechanism of wild species of genus Chinese grape white rot resistant [J].NorthernHorticulture,1988(1):1-5(in Chinese with English abstract).

[22]余旦華,王保良,葉永剛,等.葡萄果皮的微結(jié)構(gòu)與抗葡萄炭疽病的關(guān)系[J].葡萄栽培與釀酒,1984(2):1-5,57.

YU D H,WANG B L,YE Y G,etal.The relationship between grape peel microstructure and grape anthracnose resistance[J].ViticultureandEnology,1984(2):1-5,57(in Chinese with English abstract).

Received 2015-04-02Returned2015-06-25

First authorGAO Xiaoming,female,master.Research area:germplasm resources of fruit. E-mail:15137189298@163.com

(責(zé)任編輯：成敏Responsible editor:CHENG Min)

Identification and Screening of Hybrid Progenies with Resistance to Grape Anthracnose

GAO Xiaoming1, FAN Xiucai2, ZHANG Guohai1, ZHANG Ying2,JIANG Jianfu2，SUN Haisheng1and LIU Chonghuai2

(1.College of Forestry, Henan University of Science and Technology, Luoyang Henan 471000, China;2.Zhengzhou Fruit Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450009, China)

AbstractInvestigate the methods of identification for grape anthracnose resistance, to effectively select resistant individual plant of hybrid offspring, which can serve grape anthracnose resistance breeding. In this study, wild Vitis davidii var.davidii ‘Heizhenzhu’ which with high resistance to grape anthracnose was hybridized with V.vinifera L. cv. ‘Rizamat’ which was susceptible to grape anthracnose. Using extracts of in vitro leaf, fruit and fruit separately, and different inoculation methods, grape anthracnose resistance of parent materials and hybrids were identified. The results showed that bacteria liquid method was more suitable for the resistance identification of grape leaves and fruit to grape anthracnos, either 70% ethyl alcohol or acetone could be used as leach liquor to identify the resistance of fruit extracts. The hybrid progenies of HR, R, MR, S, HS to grape anthracnose resistance accounted for 30.77%, 35.90%, 12.82%, 15.38% and 5.12%, respectively.

Key wordsGrape; Grape anthracnose; Disease resistance; Identification

收稿日期：2015-04-02修回日期：2015-06-25

基金項目：“十二五”國家科技支撐計劃(2013BAD01B04-20)。

通信作者：劉崇懷，男，博士，研究員，主要從事果樹種質(zhì)資源研究。 E-mail：liuchonghuai@caas.net.cn

中圖分類號S663.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號1004-1389(2016)06-882-07

Foundation itemThe “12th Five-year Plan” National Science and Technology Support Program(No. 2013BAD01B04-20). LIU Chonghuai,male,Ph.D,researcher.Research area:germplasm resources of fruit. E-mail:liuchonghuai@caas.net.cn

網(wǎng)絡(luò)出版日期：2016-06-01

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20160601.0919.028.html

第一作者：高曉銘，女，碩士研究生，從事果樹種質(zhì)資源研究。E-mail：15137189298@163.com