兩種致病菌對抗菌素類藥物的感受性試驗

2016-07-01 07:12:14張娟張鳳翔許冬梅畢靖紅

水產養殖 2016年5期

張娟，張鳳翔，許冬梅，畢靖紅

（興化市漁業技術指導站，江蘇　興化　225700）

兩種致病菌對抗菌素類藥物的感受性試驗

張娟，張鳳翔，許冬梅，畢靖紅

（興化市漁業技術指導站，江蘇興化225700）

資助項目：2015年泰州市高層次人才科研項目；江蘇省水生動物疫病監控項目

抗菌素目前已經被廣泛應用于水生動物細菌性疾病的治療，然而由于長期使用和使用方法不當等原因，致病菌對抗菌素逐漸產生了耐藥性。為了幫助養殖戶科學地選擇和使用水產用抗菌素類藥物，避免漁用藥物濫用或者誤用，2015年4—10月，項目組從江蘇省興化市人工養殖的魚體內分離了致病菌，測定其對常見水產用抗菌素類藥物的敏感性。

1　材料與方法

1.1供試藥物

供試藥物為目前比較常用的抗菌素：恩諾沙星、土霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、阿莫西林、多西環素、痢菌凈、磺胺二甲嘧啶和復方新諾明。

1.2供試菌株

草魚、鯽魚和鳊魚為興化市常規養殖品種，養殖面積一般為15×667 m2～40×667 m2，2015年4—10月在發病的成魚養殖池塘中隨機采樣，草魚規格為1～2 kg/尾，鯽魚為0.15～0.3 kg/尾，鳊魚為0.3～0.4 kg/尾，病魚一般表現為赤皮、爛鰓、腸炎等癥狀。采用無菌操作的方法，從魚體內（肝臟、脾臟、腎臟）分離致病菌（菌株分離的時間、地點和水生動物種類等詳細情況見表1和表2），菌株保存于興化市漁業技術指導站，主要為嗜水氣單胞菌株和溫和氣單孢菌株。

1.3供試菌株最小抑菌濃度的測定將供試藥物采用適宜的溶媒溶解后，在無菌條件下用營養瓊脂培養基將藥物稀釋，制作成藥物濃度分別為64、32、16、8……0.25 mg/L的2倍稀釋藥物系列培養基，將系列培養基制成藥敏板。最后，定量吸取0.5麥氏單位的細菌混懸液0.1 mL加入藥敏板中，搖勻。置于35℃條件下培養24 h，經肉眼觀察，無細菌生長試管中的最低藥物濃度，即為藥物的最小抑菌濃度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）。

2　結果

2.1嗜水氣單胞菌對抗菌藥物的感受性

試驗共分離了16株嗜水氣單胞菌，通過檢測供試藥物對菌株的最小抑菌濃度，得出16株嗜水氣單胞菌對各種抗菌藥物感受性，如表3所示。

2.2溫和氣單孢菌對抗菌藥物的感受性

試驗共分離了5株溫和氣單孢菌，通過檢測供試藥物對菌株的最小抑菌濃度，得出5株溫和氣單孢菌對各種抗菌藥物感受性，如表4所示。

3　分析與建議

3.1致病菌藥物感受性分析

不同抗菌素藥敏試驗的敏感性結果判定標準有所不同，參照臨床和實驗室標準協會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）標準，對藥物的敏感性及耐藥性判定范圍劃分，如表5。依據這一劃分范圍，將所有抗菌藥物對菌株的MIC值測定結果進行判定，得出了嗜水氣單胞菌對抗菌素類藥物的感受性測定結果（表6）和溫和氣單胞菌對抗菌素類藥物的感受性測定結果（表7）。

表1　嗜水氣單胞菌菌株的來源

表2　溫和氣單胞菌菌株的來源

3.2藥物使用建議

同種病原菌對不同抗菌素的感受性不同，不同的病原菌對同種抗菌素的感受性也不同［1］。該研究中，嗜水氣單胞菌對氟苯尼考、恩諾沙星和痢菌凈等敏感；對土霉素、硫酸新霉素、甲砜霉素、多西環素和復方新諾明等具有一定的耐藥性；對阿莫西林和磺胺二甲嘧啶全部具有耐藥性。溫和氣單胞菌對氟苯尼考、恩諾沙星、甲砜霉素和痢菌凈等敏感；對土霉素、硫酸新霉素、多西環素和復方新諾明等具有一定的耐藥性；對阿莫西林和磺胺二甲嘧啶全部具有耐藥性。嗜水氣單胞菌和溫和氣單孢菌均屬于弧菌科氣單胞菌屬，從檢測結果可以看出，這兩種菌對同一種抗菌素藥物的感受性類似。

21株菌株對阿莫西林和磺胺二甲嘧啶均具有耐藥性，說明該藥對氣單孢菌已無明顯效果，治療魚病時盡量避免使用。氟苯尼考的MIC值小于0.25 μg/mL，恩諾沙星的MIC值小于2 μg/mL，痢菌凈的MIC值集中于2～4 μg/mL，說明氣單胞菌對氟苯尼考最敏感。因此，若發生由氣單孢菌引起的水生動物疾病時，建議選用氟苯尼考、恩諾沙星和痢菌凈等藥物，其中優先選用氟苯尼考。