踝蛋白在大腸癌中的表達(dá)及臨床意義

郭宏華　高　申　王　海　何成彥　李玲霞

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林　長春　130033)

踝蛋白在大腸癌中的表達(dá)及臨床意義

郭宏華高申王海何成彥李玲霞

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長春130033)

〔摘要〕目的探討踝蛋白(Talin)在大腸癌組織及癌旁組織中的表達(dá)及意義。方法采用二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定大腸癌組織及癌旁組織的差異蛋白，并用免疫印跡驗(yàn)證其表達(dá)情況。結(jié)果試驗(yàn)篩選出大腸癌組織與癌旁組織的差異蛋白44個，其中23個下調(diào)蛋白。結(jié)論Talin在大腸癌組織中表達(dá)下調(diào)，可作為研究大腸癌發(fā)生機(jī)制指標(biāo)之一。

〔關(guān)鍵詞〕大腸癌；Talin；二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

大多數(shù)大腸癌(CRC)患者在就診時已經(jīng)出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者治療失敗和死亡的主要原因之一是侵襲和轉(zhuǎn)移〔1〕。因此，早發(fā)現(xiàn)、早診斷及早治療對改善患者預(yù)后具有非常重要的意義。本研究通過檢測踝蛋白(Talin)表達(dá)水平，探討該蛋白在診斷CRC中的準(zhǔn)確性，為臨床中CRC篩查提供新的檢驗(yàn)指標(biāo)。

1材料與方法

1.1對象收集佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院接受手術(shù)治療的CRC患者65例的腫瘤組織標(biāo)本及距離腫瘤組織邊緣10 cm以上的上端癌旁正常組織標(biāo)本。患者術(shù)前未接受任何治療，病理檢查證實(shí)為Duck C期腺癌。手術(shù)即時取材，沖洗，液氮速凍，-80℃保存。

1.2方法從采用二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分離并鑒定出的CRC組織及癌旁組織的44個有顯著差異的蛋白質(zhì)中選擇Talin做免疫印跡，進(jìn)一步驗(yàn)證準(zhǔn)確性。

1.3主要試劑N,N,N′,N′-四甲基乙二胺(TMED)、十二烷基磺酸鈉(SDS)、溴酚藍(lán)、考馬斯亮藍(lán)、苯甲基磺酰氟(PMSF)購于Sigma公司。碘代乙酰胺(IAM)、IPG預(yù)制膠條、礦物油、蛋白質(zhì)定量試劑盒(RCDC Protein Assay Kit)購于Bio-Rad公司。二硫代蘇糖醇(DTT)、TPCK修飾的測序級胰酶購自Promeg公司。Agilent 1200高效液相色譜儀購自美國Agilent公司，LTQXL離子肼質(zhì)譜儀購自美國Thermo Fisher公司。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用圖譜依據(jù)SEQUEST算法，采用SPSS11.0軟件分析。

2結(jié)果

2.1CRC組織與癌旁組織差異蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析采用譜圖數(shù)評價每個蛋白的豐度。參照以下標(biāo)準(zhǔn)界定蛋白豐度的變化：①兩個不同樣品中的蛋白譜圖數(shù)差值≥72；②兩個不同樣品中的蛋白譜圖數(shù)比值≥1。將CRC組織與癌旁組織的蛋白分析數(shù)據(jù)依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對，得到顯著差異蛋白44個，其中23個下調(diào)蛋白。見圖1。

2.2Talin在CRC組織與癌旁組織表達(dá)水平的比較44個有顯著差異的蛋白質(zhì)通過上述實(shí)驗(yàn)鑒定出來，其中選擇Talin做蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，Talin蛋白在癌組織中表達(dá)明顯低于癌旁組織。此結(jié)果通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證了CRC腫瘤組織與癌旁組織蛋白質(zhì)表達(dá)有差異。

圖1　Talin中VMLVNSMNTVK序列肽段的串聯(lián)質(zhì)譜圖

圖1　Talin在CRC及癌旁組織中的表達(dá)

3討論

到目前為止，Talin表達(dá)水平與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)的研究不多。Talin在某些腫瘤中低表達(dá)，如：肝癌〔2〕、胃癌〔3〕、卵巢癌〔4〕、大腸癌〔5〕等。研究表明，Talin在人前列腺癌細(xì)胞的侵襲及抗凋亡中發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用。腫瘤轉(zhuǎn)移能力的下降和體內(nèi)Talin的缺失關(guān)系顯著〔6〕。本研究通過差異蛋白質(zhì)組學(xué)篩選出的CRC相關(guān)蛋白Talin(～270 kD)，包含C端約220 kD的桿狀區(qū)域及N端約50 kD的球形頭部，它連接整合素和肌動蛋白，是一種重要的細(xì)胞骨架蛋白，在細(xì)胞遷移、黏附、生存和增殖等過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用〔7〕。Talin通過與整合素、FAK及其他細(xì)胞骨架蛋白的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的移動及播散等功能，進(jìn)而促進(jìn)CRC的發(fā)生發(fā)展過程。本文結(jié)果提示Talin可能在CRC的發(fā)生、發(fā)展中扮演著某種抑癌基因的重要角色。

4參考文獻(xiàn)

1Siegel R,Naishadham D,Jemal A,etal.Cancer statistics〔J〕.CA Cancer J Clin,2012;62(1):10-29.

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3Indo HP,Matsui H,Chen J,etal.Manganese superoxide dismutase promotes interaction of actin,S100A4 and Talin,and enhances rat gastric tumor cell invasion〔J〕.J Clin Biochem Nutr,2015;57(1):13-20.

4Tang H,Yao L,Tao X,etal.miR-9 functions as a tumor suppressor in ovarian serous carcinoma by targetting TLN1〔J〕.Intern J Mol Med,2013;32(2):381-8.

5Izard T,EvansG,Borgon RA,etal.Vinculin activation by talin through helical bundle conversion〔J〕.Nature,2004;427(6970):171-5.

6Sakamoto S,McCann RO,Dhir R,etal.Talin 1 promotes tumor invation and metastasis via focal adhesion signaling and anoikis resistance〔J〕.Cancer Res,2010;70(5):1885-95.

7Roberts GC,Critchley DR.Structural and biophysical properties of the integrin-associated cytoskeletal proteintalin〔J〕.Biophys Rev,2009;1(2):61-9.

〔2015-12-17修回〕

(編輯徐杰)

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目(81572082，31100930)；吉林省科技廳資助項目(20140311092YY，2011713,20090461,2010739，20140414005GH)；長春市科技項目資助(12Z931)

通訊作者：李玲霞(1991-)，女，碩士，主要從事腫瘤的發(fā)病機(jī)制和診斷研究。

〔中圖分類號〕R73

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2576-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.004

第一作者：郭宏華(1964-)，女，主任醫(yī)師，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事消化系腫瘤的發(fā)病機(jī)制及治療研究。