IgG抗-E引起新生兒溶血病1例

覃　濤,黃美容

(1．貴州航天醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州遵義 563000;2．貴州遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科，貴州遵義 563000)

·個(gè)案與短篇·

IgG抗-E引起新生兒溶血病1例

覃濤1,黃美容2

(1．貴州航天醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州遵義 563000;2．貴州遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科，貴州遵義 563000)

本院近期在工作中發(fā)現(xiàn)1例由IgG抗-E引起的新生兒溶血病(HDN)，現(xiàn)將其報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料新生患兒，男，G1P1，足月，出生后因“出現(xiàn)皮膚黃染半天”于2013年5月29日急診收入本院新生兒科；外院剖宮產(chǎn)分娩，無輸血史；其母年齡 21歲，既往無妊娠史， 但在6年前，因手術(shù)治療曾輸過血，血型為A型，RhD(+)。入院檢查：總膽紅素464.7 μmol/L，直接膽紅素13.4 μmol/L；紅細(xì)胞(RBC)2.48×1012/L，血紅蛋白(Hb)108g/L，血細(xì)胞比容(HCT)為0.33。臨床醫(yī)生征求家屬同意，擬行換血治療，申請O型洗滌紅細(xì)胞3 U，AB型血漿200 mL行換血治療。本科接申請單后，立即定血型：玻片法，B型RhD(+)，然后聯(lián)系血站，洗滌O型RhD(+)洗滌紅細(xì)胞3 U。當(dāng)收到血站送來的洗滌紅細(xì)胞后，值班人員進(jìn)行交叉配血。鹽水法：主側(cè)無溶血，無凝集，次側(cè)凝集；凝聚胺配血：主側(cè)凝集，次側(cè)凝集。復(fù)查雙方血型無誤后，通知臨床從外院抽取患兒母親的血液送至本科，進(jìn)行下述試驗(yàn)，最終篩選了Rh血型(CcDee或CCDee)的B型懸浮少白細(xì)胞紅細(xì)胞及AB型新鮮冰凍血漿進(jìn)行換血，未出現(xiàn)任何輸血不良反應(yīng)，癥狀得到明顯改善。

1.2試劑抗-D(IgM)、抗-A、抗-B、抗IgG、C3d(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號：20130130、20121225、20110819)；凝聚胺試劑盒(珠海貝索生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號：113031)；不規(guī)則抗體篩查卡、新生兒ABO/RhD血型鑒定卡、抗球蛋白卡、RH血型抗原檢測卡(單克隆抗體)、篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞(長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號：20130202、20121101、20121205、20121201、20135608、20135701)。

1.3方法ABO、Rh血型抗原、IgG檢測(微柱凝膠法)，將被檢者紅細(xì)胞用生理鹽水稀釋為0.5%～0.8%的濃度，取50 μL加在相應(yīng)微柱凝膠卡中，離心觀察結(jié)果。

直抗試驗(yàn)：取患兒紅細(xì)胞用生理鹽水充分洗滌6次后，配成2%～5%的懸液，各取1滴懸液分別加入到含2滴抗IgG、C3d多抗、抗C3d單抗、抗IgG單抗、生理鹽水(對照)中，混勻、離心觀察結(jié)果。

不規(guī)則抗體篩選：將濃度為0.5%～0.8%的篩選細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號分別加入到不規(guī)則抗體篩查卡中，在相應(yīng)孔中再分別加入待測標(biāo)本：等量的母親的血漿、患兒的血漿、患兒紅細(xì)胞放散液，37 ℃孵育15 min，離心觀察結(jié)果。

抗體鑒定：將濃度為0.5%～0.8%的譜細(xì)胞1～10號分別加入到抗人球蛋白卡中，在相應(yīng)孔中再分別加入待測標(biāo)本：等量的母親的血漿、患兒的血漿、患兒紅細(xì)胞放散液，37 ℃孵育15 min，離心觀察結(jié)果。

效價(jià)測定：取等量2 mL與母親血清混勻，37 ℃孵育1 h，用生理鹽水對倍稀釋，分別加入到等量的含有相應(yīng)抗原的HDN母體效價(jià)檢測卡中，37 ℃孵育15 min，離心觀察結(jié)果。其中抗-E測定細(xì)胞抗原：篩選4份Rh(E)陽性的O型獻(xiàn)血員洗滌紅細(xì)胞作為抗原，濃度為0.5%～0.8%。抗-B測定細(xì)胞抗原：篩選4份Rh(E)陰性的B型獻(xiàn)血員洗滌紅細(xì)胞作為抗原，濃度為0.5%～0.8%。

排除試驗(yàn)：在抗人球蛋白卡中，分別加入A型、B型、O型紅細(xì)胞抗原，在對應(yīng)孔中再分別加入待測標(biāo)本，等量患兒的血漿、放散液，37 ℃孵育15 min，離心觀察結(jié)果。其中，A型、B型、O型為Rh(E)陰性的4人份獻(xiàn)血員洗滌紅細(xì)胞。

放散液的制備：將新生兒紅細(xì)胞用生理鹽水充分洗滌后，加入等量生理鹽水56 ℃，熱放散8 min，離心取放散液備用。

2結(jié)果

2.1血型結(jié)果新生兒血型為B型，CcDEe；母親血型為A型，CcDee。

2.2不規(guī)則抗體篩查結(jié)果新生兒血漿：Ⅰ號、Ⅲ號陽性；新生兒放散液：Ⅰ號、Ⅲ號陽性；母親血漿：Ⅰ號、Ⅲ號陽性。見表1。

2.3直抗結(jié)果新生兒IgG，++++；抗IgG、C3d(強(qiáng)陽性)、抗C3d(陰性)；母親IgG，陰性；抗IgG、C3d(陰性)；抗C3d(陰性)。

2.4譜細(xì)胞抗體鑒定結(jié)果新生兒血漿2、3、4、5、8、10號細(xì)胞陽性；新生兒放散液：2、3、4、5、8、10號細(xì)胞陽性；母親血漿：2、3、4、5、8、10號細(xì)胞陽性。按照譜細(xì)胞反應(yīng)格局，判斷該不規(guī)則抗體為抗-E。見表2。

2.5效價(jià)檢測母親血漿中抗-E效價(jià)為1∶256，抗-B效價(jià)小于1∶2。

2.6排除試驗(yàn)游離試驗(yàn)無抗A、抗B抗體，放散試驗(yàn)無抗A、抗B抗體。

2.7配血結(jié)果明確抗-E導(dǎo)致HDN而引起配血不合，排除ABO系統(tǒng)導(dǎo)致HDN后，篩選Rh(E)陰性的B型紅細(xì)胞(CcDee或CCDee)，進(jìn)行交叉配血。結(jié)果：鹽水法，主次側(cè)無溶血，無凝集；采用凝聚胺法及抗人球蛋白法，主側(cè)，無溶血無凝集，次側(cè)凝集(由于直抗強(qiáng)陽性)。輸血后，未出現(xiàn)任何輸血不良反應(yīng)。

表1　　患兒血漿、紅細(xì)胞放散液及母親血漿抗體與篩選細(xì)胞反應(yīng)格局

表2　　患兒血漿、紅細(xì)胞放散液及母體血漿抗體與譜細(xì)胞反應(yīng)格局

3討論

HDN是指母胎血型不合所致的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病，胎兒從父方遺傳所獲血型抗原為母方所缺乏，分娩過程中該胎兒血型抗原進(jìn)入母體，使母體產(chǎn)生抗該血型抗原的抗體(IgG類)[1]。當(dāng)母體再次妊娠時(shí)，抗該血型抗原的抗體(IgG類)可通過胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，使胎兒在宮內(nèi)或出生后發(fā)生大量紅細(xì)胞破壞，出現(xiàn)一系列溶血性征象的疾病。在本病例中，母親為G1P1，血型為A型(非O型)，RhD陽性，在產(chǎn)前檢查時(shí)，很容易就排除了由于母子血型不合導(dǎo)致的HDN。但是產(chǎn)婦曾有輸血史，需要引起重視，若在產(chǎn)前檢查時(shí)，進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選，就會發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，并鑒定，然后進(jìn)行夫妻雙方Rh 5個(gè)抗原檢測，定期監(jiān)測抗-E的效價(jià)。母嬰血型不合的免疫性溶血病可以進(jìn)行早期檢查，早期發(fā)現(xiàn)，并采用相應(yīng)的干預(yù)治療，必要時(shí)行宮內(nèi)輸血、及時(shí)剖宮產(chǎn)、產(chǎn)后新生兒換血等多項(xiàng)措施協(xié)同作用才能有效防治新生兒溶血病[2]。所幸，通過實(shí)驗(yàn)及時(shí)篩選出配合的血液給予換血，無輸血不良反應(yīng)，經(jīng)臨床進(jìn)一步治療，患兒病情好轉(zhuǎn)。

在排除試驗(yàn)中，分別篩選Rh(E)陰性的A、B、O型細(xì)胞抗原，做了新生兒血樣的游離和放散試驗(yàn)，均未檢出抗A抗體和抗B抗體。同時(shí)，用Rh(E)陰性的B細(xì)胞抗原，檢測母親血清抗B效價(jià)，抗B效價(jià)小于1∶2。所以最終選用Rh(E)陰性的B型少白細(xì)胞的紅細(xì)胞配血。次側(cè)交叉配血中，由于患兒紅細(xì)胞已經(jīng)被母體的抗-E致敏，直抗試驗(yàn)為++++，所以在檢測IgG類抗體的聚凝胺方法及抗人球蛋白方法中，次側(cè)凝集是由致敏在胎兒紅細(xì)胞上的抗-E與胎兒本身的E抗原造成，并非是與獻(xiàn)血員不相合造成的。因此，直抗陽性的患兒紅細(xì)胞次側(cè)配血常出現(xiàn)凝集，不作配血禁忌考慮，只要主側(cè)配血相合即可進(jìn)行輸血[3]。

由于Rh血型抗原表位是多肽，在胎兒出生時(shí)已發(fā)育成熟，與相應(yīng)的IgG抗體親和力較強(qiáng)，嚴(yán)重的HDN病例多由Rh血型抗體引起，在HDN的發(fā)病方面，Rh血型抗體較ABO血型抗體更為重要[4]。Rh血型系統(tǒng)主要抗原有D、C、c、E和e抗原，以D抗原的抗原性最強(qiáng)。近年來，我國實(shí)行Rh(D)相容性輸血，絕大多數(shù)患者都能接受同型血液輸注，因輸血所致同種免疫性抗-D越來越少，然而抗-E已逐漸成為最多見的經(jīng)輸血產(chǎn)生的Rh血型抗體[5]。因此，為了減少Rh引起的同種免疫，有必要在輸血前、獻(xiàn)血員獻(xiàn)血時(shí)進(jìn)行Rh 5個(gè)抗原的檢測，并同型輸注；產(chǎn)前檢測時(shí)，對有輸血史、妊娠史、流產(chǎn)史的孕婦，有必要進(jìn)行孕婦不規(guī)則抗體篩選、夫妻雙方ABO、Rh 5個(gè)抗原的鑒定，并定期監(jiān)測其效價(jià)。

參考文獻(xiàn)

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[4]Marion ER,Ragnhid O,Marsh WL.The clinical significance of alloantibodies of blood group system[J].Semin Hematol,2000,37(2):197-203.

[5]吳遠(yuǎn)軍，吳勇，陳寶嬋，等．Rh血型抗體的檢測及結(jié)果分析[J]．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2008，24(6)：604-606．

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.070

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C

文章編號：1673-4130(2016)10-1446-02

(收稿日期：2016-02-15)