氮酮對黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A體外皮膚滲透性的影響

曾明輝，譚正懷，邱建平，黃 娟

(1.四川省邛崍市醫療中心醫院藥學部，四川 成都 611530；2 四川省中醫藥科學院，四川 成都 610041)

氮酮對黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A體外皮膚滲透性的影響

曾明輝1，譚正懷2，邱建平1，黃 娟1

(1.四川省邛崍市醫療中心醫院藥學部，四川 成都 611530；2 四川省中醫藥科學院，四川 成都 610041)

目的 研究不同濃度氮酮對黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A體外皮膚滲透性的影響。方法 采用改良的Franze擴散池，選用不同濃度氮酮(0%、1%、2%及5%)作黃硝巴布劑的透皮促滲劑，以HPLC法測定制劑中羥基紅花黃色素A的累積釋放量(Q)，計算穩態流量(J)。結果 黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A的體外釋放符合Higuchi方程；當氮酮濃度為0%、1%、2%和5%時，羥基紅花黃色素A12 h內的累積釋放量(Q)分別是0.533、0.913、1.313及0.953 μg/ml、穩態流量分別為0.4829、0.7657、1.0857及0.8114μg/ (cm2·h)。結論 氮酮可促進羥基紅花黃色素A的透皮吸收，在實驗濃度內，以2%氮酮的促滲效果最佳，可為黃硝巴布劑的制備提供參考。

氮酮；巴布劑；羥基紅花黃色素A；裸鼠；透皮吸收

巴布劑系指藥材提取物、藥物與適宜的親水性基質混勻后，涂布于裱背材料上制得的外用貼劑，具載藥量大、藥物釋放性能好、劑量準確、使用方便等優點[1]。黃硝巴布劑處方來源于四川省醫學科學院·四川省人民醫院中醫科臨床驗方，由紅花、大黃等中藥組成，具有活血化瘀、消腫止痛等功效[2，3]，筆者擬將其制成巴布劑，以便于患者用藥。該制劑中紅花為君藥，其主要有效成分為羥基紅花黃色素A[4](HSYA)，因此本文選擇以HSYA為指標，采用裸鼠離體皮膚進行透皮吸收實驗，考察該制劑中透皮促進劑氮酮(Azone)的含量對HSYA透皮性能的影響，為黃硝巴布劑的制備提供依據。

1 材料與方法

1.1 試藥 黃硝巴布劑浸膏(四川省醫學科學院四川省人民醫院藥學部提供)，HSYA對照品(購于中國食品藥品檢定研究院，批號：111637-200905)，Azone、丙二醇(成都科龍化化工試劑廠)為AR級，卡波姆981NF、聚丙烯酸鈉7S(美國諾譽化工公司)，聚乙烯吡咯烷酮K30、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯醇(上海化學試劑公司)等均為藥用規格。甲醇、乙腈為色譜級，水為純凈水，其它試劑為分析純。

1.2 儀器 美國Waters 2690高效液相色譜系統，包括自動進樣器，996二極管陣列檢測器，Empower3色譜工作站(美國Waters公司)；沙多利斯BP211型電子天平；Genius3漩渦混合器(德國)；78-1型磁力攪拌器(杭州儀表廠)、CS501型超級恒溫器(重慶試驗設備廠)，320R型低溫離心機(德國)。

1.3 供試品的制備 按配方量稱取卡波姆981NF加適量的水分散過夜，另取配方量的聚乙烯吡咯烷酮K30、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯醇加適量的水浸泡，水浴50 ℃加熱溶脹，混合以上兩部分溶液，攪勻備用；再取配方量的聚丙烯酸鈉7S、丙二醇以及Azone適量，攪勻后加入上述溶脹液中；然后依次配方量的黃硝巴布劑浸膏等成分，緩慢滴加適量三乙醇胺，控制pH6.0～7.0，保溫50 ℃充分攪拌均勻，即可制成含紅花生藥質量為0.5∶1 g，Azone含量分別為 0%、1%、2%及5%的黃硝巴布劑供試品。

1.4 受試動物 Balb/c裸鼠，雌性，十周齡，體重(23±2)g，由成都中醫藥大學動物實驗中心提供(川實動管質7號)。

1.5 方法

1.5.1 HSYA含量測定 ①色譜條件[5]：色譜柱：DiamonsilC18 (200x4.6 mm，5 μl)，柱溫30 ℃；流動相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26：2：72)，流速1.0 ml/min；檢測波長403 nm；進樣量20 μl。②對照品溶液制備：精密稱取HSYA對照品適量，加25%甲醇制成100 μg/ml的溶液，搖勻，即得HSYA儲備液。③標準曲線的繪制：精密吸取HSYA儲備液1.0 ml，加25%甲醇定溶至10 ml，搖勻，分別精密吸取該稀釋液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5及2.0 ml，加25%甲醇定溶至10 ml，搖勻，制成含HSYA 0.1、0.2、0.5、1.0及2.0 μg/ml的系列標準溶液。分別取上述溶液20 μl進樣，記錄色譜圖，以濃度C對其峰面積R進行線性回歸，計算回歸方程。

1.5.2 鼠皮制備 取裸鼠，于實驗前12 h，脫頸處死，取背部皮膚，分離皮下組織及脂肪，選無破損皮膚浸于生理鹽水中，置冰箱中低溫保存，實驗前用生理鹽水洗凈，濾紙吸干備用。

1.5.3 實驗裝置與方法 用改良的Franze擴散池[6，7]，將鼠皮固定在擴散池口，有效擴散面積為7.0 cm2，角質層面向供給室，真皮層面向接受室；稱取供試品1.0 g，置供給室中，在鼠皮上涂勻，使之與皮膚密切接觸，將上下兩室固定，在接受室內注滿生理鹽水，驅除氣泡；開啟電磁攪拌器恒速攪拌，同時用外循環水恒溫[(35±1)℃]，于1、2、4、6、8及12 h，從取樣口用注射器抽取接受液5.0 ml，同時補充等體積生理鹽水。

1.5.4 累積釋放量等參數的計算 取接受液1.0 ml加入甲醇1.0 ml，經超聲脫氣后用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液20 μl進樣，記錄色譜峰面積，并代入標準曲線方程測定接受液中的濃度。精密量取接受室體積，按如下公式計算累積釋放量等參數值[6，7]。累積釋放量：Q=Cn+ (V0/V)ΣCPS；穩態流量：J=V/A·dQ/dt。 N=1 式中，Q為時間t的累積釋放量；Cn為時間t的濃度值；V0為每次取樣體積；CPS為時間t以前的濃度測量值；A為有效皮膚面積； dQ/dt為穩態時的斜率；J為穩態流量：指單位時間通過單位面積皮膚的藥物量。

2 結果

2.1 回歸方程 C=5.449×10-4·R-0.0189，r=0.9992。表明濃度在0.1～2.0 μg/ml，HSYA濃度與其峰面積線性關系良好(n=5)。保留時間t=11.0 min。

2.2 累積釋放量與穩態流量 含不同濃度Azone的黃硝巴布劑，在不同時間HSYA的累積釋放量見表1，穩態流量見表2。分別將HSYA的濃度C對t1/2進行回歸處理，其相關系數均在0.98以上，說明HSYA從黃硝巴布劑基質向皮膚的滲透過程符合Higuchi方程。

表1 HSYA經離體鼠皮的累積釋放量 (μg/ml，n=5)

表2 不同濃度Azone的黃硝巴布劑中HSYA的體外透皮吸收參數

3 討論

外用貼膏劑在我國傳統醫學中被廣泛使用，其不僅限于皮膚局部疾病的治療，而且可以透過皮膚進入血液循環，達到內病外治的目的。內病外治法是是傳統醫學的精髓之一[8]，也是中藥透皮制劑發展的理論基礎。為了提高藥物的透皮速率和透皮量在巴布劑等外敷貼劑的處分組成中常需加入一定量的透皮吸收促進劑[9]。Azone是一種新型經皮滲透促進劑，也是近年來國內外研究得較多的透皮吸收促進劑，其特點是它能使角質中類脂質生產不規則的排列同時能溶解皮膚的類脂來增加藥物透皮吸收，對親水性及親油性藥物均有促進作用[10]，其用量在1%～10%。

在藥物透皮吸收研究中，實驗用皮膚的性質及狀態對藥物的滲透影響較大。有文獻報道[11，12]，藥物透過裸鼠和乳豬皮膚的透皮吸收參數與透過人體皮膚的透皮吸收參數較為接近。從實驗的可重復性來考慮，以使用裸鼠皮較好。對實驗中HSYA測定方法，本研究參考中國藥典2010年版一部中紅花藥材的HSYA測定方法制備HSYA含量測定的供試品溶液，并選用403 nm作為檢查波長。實驗表明，該方法準確性、精密性及穩定性均能滿足實驗的要求。

實驗表明，Azone對黃硝巴布劑中HSYA存在明顯的促進透皮擴散作用，但不同濃度的Azone對黃硝巴布劑中HSYA的透皮量存在明顯差異，同時HSYA的累積釋放量及穩態流量并不與Azone濃度成正相關，即濃度在1%～5%，當Azone的濃度達到一定值后其助滲作用不再隨其濃度增加而增強，這與有關文獻報道一致[13]。實驗結果顯示，含2%Azone的制劑于1 h開始顯示助滲作用，穩態流量達1.0857，于12 h累積釋放量較0%Azone增加了146.3%；故黃硝巴布劑中Azone的最佳使用量為2%。

HSYA的分子量為612.53，，為水溶性大分子化合物，不易透過皮膚。本研究結果顯示，在有促進劑(2%氮酮)的條件下，其12 h內的累積透過率僅約1.7%。如何進一步提高其透皮擴散性能有待進一步研究。由于黃硝巴布劑是中藥復方制劑，其療效是多成分、多靶點整體作用的結果，在其處分組分優先過程中，若僅采用某單體處分為優化指標，不能真實的反映制劑的整體效應。筆者擬以其藥理作用與有效成分含量相結合，進行多指標綜合考察，優化黃硝巴布劑的處分組成。

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The effect of azone on percutaneous absorption of hydroxysafflof yellow A in huangxiao cataplasm

ZENG Ming-hui1，TAN Zheng-huai2，QIU Jian-ping1，HUANG Juan1

(1.Department of Pharmacy，Sichuan Qionglai Medical Center Hospital，Chengdu 611350，China；2.Sichuan Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610041，China)

Objective To observe the effect of different concentrations of azone on transcutaneous permeation of hydroxysafflof yellow A in huangxiao cataplasm.Methods The improved Franze diffusion cell was used and different concentrations of azone (0%，1%，2% and 5%)were selected as penetration enhancer of huangxiao cataplasm.The accumulative permeation quantity (Q)was determined by HPLC and the steady percutaneous speed (J)were calculated.Results The release of hydroxysaffl of yellow A in vitro in huangxiao cataplasm was matched to Higuchi equation.When azone concentration was 0%，1%，2% and 5%，the Q values for 12 h was 0.533，0.913，1.313 and 0.953μg·mL/ml，and the J values was 0.4829，0.7657，1.0857 and 0.8114μg/cm2·h，respectively.Conclusion Azone can somewhat promote the percutaneous absorption of hydroxysafflof yellow A.Comparing to 0% azone，the promoting penetration effect of 2% azone is the best in the experimental concentration range.It may provide some information for preparation of huangxiao cataplasm.

Azone；Cataplasm；Hydroxysafflof yellow A；Nude mouse；Percutaneous absorption

四川省中醫藥管理局科研課題(編號：2010-G-093)

R917

A

1672-6170(2016)02-0066-03

2015-12-09；

2015-12-15)