維生素D受體基因多態性與多囊卵巢綜合征的相關性研究

曹華斌，涂　靈

(江西省婦幼保健院生殖健康科，南昌 330006)

維生素D受體基因多態性與多囊卵巢綜合征的相關性研究

曹華斌，涂靈

(江西省婦幼保健院生殖健康科，南昌 330006)

摘要：目的探討維生素D受體(vitamin D receptor，VDR)基因FokI，BsmI，ApaI和TaqI的多態性與多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的相關性。方法選擇符合診斷標準的PCOS患者120例為研究組，對照組為同期的除外子宮內膜異位癥的良性卵巢囊腫患者120例。對其一般指標及生化指標進行分析，同時分析2組患者的VDR基因的分布頻率。結果與對照組相比，PCOS組患者BMI明顯增高；2組總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)及空腹胰島素(FSI)濃度均有明顯的差異，HOMA指數PCOS組患者也要明顯高于對照組(均P<0.05)。PCOS組患者等位基因b,a及基因型bb,aa的頻率均明顯高于對照組，等位基因T及基因型TT的頻率也明顯高于對照組(P<0.05)，但2組患者等位基因F及基因型FF差異則無統計學意義。結論VDR基因BsmI，ApaI和TaqI位點的多態性與PCOS的易感性密切相關，FokI位點的多態性與PCOS的易感性可能無關。

關鍵詞：維生素D受體基因； 聚合酶鏈反應； 多態現象； 多囊卵巢綜合征

polycysticovarysyndrome

多囊卵巢綜合征(PCOS)是最常見的婦科內分泌疾病，具有不同程度的家族聚集及遺傳現象，其主要癥狀是月經稀發或閉經、慢性無排卵、不孕、多毛及痤瘡等。發病原因目前醫學界認為主要與內分泌和代謝功能紊亂有關[1]。因持續無排卵，缺乏孕激素作用，子宮內膜在雌激素的長期作用下導致子宮內膜過度增生，增加子宮內膜癌的風險。最近有研究報道在PCOS患者中，血清25羥維生素D水平較高，與胰島素抵抗呈負相關。以往有研究表明維生素D受體(VDR)基因多態性與胰島素敏感性之間有顯著的相關性[2-4]。在本研究中，筆者查閱相關文獻后選擇以下VDR基因：FokI，BsmI，ApaI和TaqI來研究其多態性，主要目的是探討這些基因多態性與PCOS的相關性。

1對象與方法

1.1研究對象

選擇 2010年10月至2014年10月于江西省婦幼保健院內分泌門診或生殖健康科治療的120 例PCOS患者為研究組。PCOS的診斷標準符合 2003年鹿特丹ESHRE/ASRM的標準[5]。對照組選擇同期因良性卵巢囊腫(除外子宮內膜異位癥)入院的患者120例。對照組患者均為月經正常的育齡期女性，近6個月未用激素及影響血壓、血糖及垂體功能的任何藥物，除外糖尿病，無肝腎功能損害。

1.2觀察指標的測定

對于有月經者，在月經的第3天，而對于閉經者則在任一時間或于黃體酮撤藥性出血的第3天空腹抽取外周靜脈血。以上所有的標本均由一人用化學發光法測定其FSH、LH、PRL、T及E2值。同時測定所有研究組及對照組患者的血脂、血糖、胰島素的濃度。

1.3VDR基因多態性分析

抽取外周靜脈血后用2%EDTA抗凝，用Promega公司全血DNA抽提試劑盒，抽提基因組DNA。設計及合成引物如下：Taq酶位點上游引物5-CAGAGCATGGACAGGGAGCAA-3，下游引物 5-GCAACTCCTCATGGCTGAGGTCTC-3，BsmI酶位點上游引物5-GGGAGACGTAGCAAAAGG-3；下游引物 5-AGAGGTCAAGGGGTCACTG-3，FokI酶位點上游引物5-AGCTGGCCCTGGCACTGACTCTGCTCT-3，下游引物 5-ATGGAAACACCTTGCTTCTTCTCCCTC-3，ApaI酶位點上游引物5-CAACCAAGACTACAAGTACCGCGTCAGTGA-3，下游引物 5-TGGCGGCAGCCGATGTACGTCTGC-3。進行PCR反應： 取基因組DNA2μL，下游、上游引物各20pmol，KCL50mmol·L-1，Tris-HCL10mmol·L-1(pH=9) ，MgCL22.5mmol·L-1，dNTP各200μmol·L-1，TaqDNAPolymerase1.5U，反應總體系50μL。循環條件為94 ℃變性1min，58 ℃退火1min，72 ℃延伸1.5min，31個循環。取PCR擴增產物5μL，直接用5U酶切，37 ℃水浴保溫2h后，產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色，于凝膠圖像分析系統下分析基因型。

1.4統計學方法

用Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗研究組和對照組的基因多態性，并對等位基因的分布和基因型頻率使用χ2檢驗。在不同的VDR基因型之間的參數采用方差分析(ANOVA)。所有的統計分析均采用SPSS15.0軟件進行，以P<0.05作為有統計學意義。

2結果

1)2組病例一般指標及生化指標進行統計學檢驗結果，見表1。

由表1中可知，PCOS患者BMI明顯高于對照組，而PCOS患者的總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)及空腹胰島素(FSI)濃度與對照組比較也均有明顯的差異，PCOS組患者HOMA指數也要明顯高于對照組。

表1　2組患者的臨床特征及生化指標　±s

2)2組患者VDR基因的分布頻率見表2。由表2可知，2組研究對象VDR基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。但VDR基因BsmI、ApaI和TaqI酶切位點各基因型在PCOS組和對照組的分布差異具有統計學意義(均P<0.05),其中PCOS組患者等位基因b,a及基因型bb,aa的頻率均明顯高于對照組，而等位基因T及基因型TT的頻率則PCOS組明顯高于對照組患者，但2組患者等位基因F及基因型FF差異則無統計學意義(P>0.05)。

表2　2組患者VDR基因的分布頻率

3討論

人類維生素D受體(VDR) 基因位于12q13,由9個外顯子和8個內含子組成[6],存在多個限制性內切酶酶切位點，其中常見的是BsmI,ApaI,TaqI和FokI4種,依次位于第8內含子,第9外顯子和轉錄起始位點。一般用b,at,f表示存在這4種內切酶的多態位點,用B,A,T,F表示缺乏這4種內切酶的多態性位點[7]。近年來關于維生素D受體基因與糖尿病[8]、骨質疏松癥[9]等疾病之間關系的研究已經取得一定進展。據查閱國內的相關文獻所知，本研究是首次在國內探討VDR基因多態性與PCOS及其胰島素抵抗相關性的研究。

本研究發現PCOS患者的BMI明顯高于對照組，而且存在有不同程度的脂類代謝紊亂。這可能本身與其發病原因如內分泌和代謝功能紊亂有關，而內分泌和代謝功能紊亂又加重PCOS的臨床表現。 從基因層次上來說可能是VDR基因的翻譯和表達有著微妙的調節，基因轉錄后使mRNA的質量和穩定性受到一定的影響，產生VDR蛋白數目或活力上的輕微差異，最終產生一系列的效應。有研究表明VDR基因多態性影響β細胞的分泌功能，VDR變異可能通過影響β細胞的分化而改變胰島素的應答，從而引起胰島素分泌受損，引起代謝功能紊亂。還有研究報道，VDR受體基因還可以影響脂肪細胞的代謝和分化，加之其影響胰島素分泌的作用可能與肥胖易感性有關[10-11]。

通過本研究發現，某些VDR基因型和單純型等位基因可能與PCOS的發病存在一定的相關性。本研究PCOS組患者等位基因b,a及基因型bb,aa的頻率均明顯高于對照組，等位基因T及基因型TT的頻率明顯高于對照組，但2組患者等位基因F及基因型FF則無顯著性差異。這可能表明BsmI,ApaI,TaqI位點的多態性與PCOS的易感性有關。與2009年MahmoudiT，2013年AmalS等[12-13]的研究不一致，差異存在的原因可能是種族差異的不同。本研究人群均為中國漢族人群，而以上兩位學者研究的人群均為歐洲人種，在不同的種族群體中，等位基因頻率的差別很可能是進化進程和人群遺傳學行為的結果。此外可能存在的解釋還有生活環境的迥異，飲食習慣的不同，體內維生素D水平的不同，日照時間的長短等因素。PCOS作為多基因疾病，由多個微效基因作用，每個微效基因的表型效應很小，表現型是遺傳基因與環境相互作用的結果，需要結合環境因素綜合分析。

總之，VDR基因型調節PCOS發生的具體機制還不太清楚，但是認識到VDR基因多態性與疾病的發生之間存在關系，為在基因水平認識PCOS的發病機制提供了一個很好的線索。VDR基因多態性通過影響胰島素的敏感性而影響代謝紊亂的發生，為從基因水平認識PCOS的發病機制提供了一個新思路。

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(責任編輯：劉大仁)

AssociationbetweenVitaminDReceptorGenePolymorphismandPolycysticOvarySyndrome

CAOHua-bin,TULing

(Department of Reproductive Health,Jiangxi Maternal and Child Health Hospital,Nanchang 330006,China)

ABSTRACT：ObjectiveTo investigate the relationship between vitamin D receptor(VDR) gene BsmI,FokI,ApaI and TaqI polymorphisms and polycystic ovary syndrome(PCOS).MethodsThe general conditions,biochemical indexes and VDR gene distribution frequencies were analyzed in 120 patients with PCOS(study group) and 120 benign ovarian cyst patients without endometriosis(control group).ResultsCompared with control group,body mass index,homeostasis model assessment index,and frequencies of b,a and T alleles and bb,aa and TT genotypes significantly increased in study group(all P<0.05).Furthermore,the differences in total cholesterol,triglyceride,low density lipoprotein,high density lipoprotein and fasting insulin levels were significant between the two groups.There were no significant differences in frequencies of allele F and genotype FF between the two groups.ConclusionThe susceptibility of PCOS is closely related to VDR gene BsmI,ApaI and TaqI polymorphisms,but not associated with FokI polymorphism.

KEY WORDS：vitamin D receptor gene; polymerase chain reaction; polymorphism;

收稿日期：2015-10-20

基金項目：江西省科技廳社會發展科技支撐計劃(2010BSB00404)

作者簡介：曹華斌(1975—)，男，碩士，主任醫師，主要從事婦科的臨床研究。

中圖分類號：R711.75

文獻標志碼：A

文章編號：1009-8194(2016)02-0040-03

DOI:10.13764/j.cnki.lcsy.2016.02.017