滇西地區29種藥用植物抗氧化活性研究

張小東，沈　怡，劉子琦，徐　偉，單　華，姜　北（大理大學藥物研究所，云南大理　671000）

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滇西地區29種藥用植物抗氧化活性研究

張小東，沈怡，劉子琦，徐偉，單華，姜北*
（大理大學藥物研究所，云南大理671000）

［摘要］目的：研究滇西地區29種藥用植物提取物體外抗氧化活性。方法：將植物樣品用75%乙醇和水依次進行提取，采用DPPH法測定各供試樣品清除自由基的能力，以IC50值評價其活性。結果：在29種藥用植物樣品中，臭靈丹、滇白珠、反瓣老鸛草、午香草、昆明山海棠、大紅袍、朝天罐、腫柄菊、滇黃芩等9種植物相關供試樣品具有很好的抗氧化活性，其中反瓣老鸛草地下部分醇提物活性極好，IC50值僅為（4.1±0.1）μg/mL，好于陽性對照物維生素C。結論：反瓣老鸛草等9種植物顯示出較好的抗氧化活性，具有進一步研究開發潛力與抗氧化藥用價值。

［關鍵詞］藥用植物；抗氧化；DPPH；粗提物

［DOI］10.3969/j.issn.1672-2345.2016.02.001

云南地貌復雜、地理位置特殊，既處于泛北極植物區和熱帶植物區的過渡區，又處于中國—喜馬拉雅森林植物亞區和中國—日本森林植物亞區的過渡區〔1〕，使得該地區尤其是云南西部藥用植物資源異常豐富，其中很多植物有著不可忽視的藥用價值，且多未進行過系統的研究或活性測試〔2-3〕。現代研究已證實，自由基清除劑及天然抗氧化劑，對于機體保護、防止老化，以及多種疾病的防治等均有十分重要的作用，因此近年來相關研究備受關注〔4-7〕。為深入了解滇西地區藥用植物的價值，本實驗采用DPPH法，對云南滇西地區29種藥用植物不同極性溶劑的提取物進行抗氧化活性研究，以期為深入研究相關機制提供依據，為合理開發利用該地區藥用植物提供科學依據。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1植物樣品益母草Leonurus japonicus、臭靈丹Laggera pterodonta、土牛膝Achyranthes aspera、滇白珠Gaultheria leucocarpa var. yunnanensis、刺花蓮子草Alternanthera pungens、金蕎麥Fagopyrum dibotrys、鳳仙花Impatiens balsamina、苦參Sophora flavescens、馬尾黃連Thalictrum finetii、秧草Juncus setchuensis、云南繁縷Stellaria vestita、大王馬先蒿Pedicularis rex、匍匐風輪菜Clinopodium repens、茜草Rubia cordifolia、腫柄菊Tithonia diversifolia、拔毒散Sida szechuensis、高河菜Megacarpaea delavayi、竹葉柴胡Bupleurum marginatum、滇黃芩Scutellaria amoena、反瓣老鸛草Geranium refractum、西南蠅子草Silene delavayi、午香草Anaphalis bulleyana、昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum、犁頭尖Typhonium di?varicatum、朝天罐Osbeckia opipara、大紅袍Campylot?ropis hirtella、橢圓葉花錨Halenia elliptica、鐘花韭Al?lium kingdonii、曲苞芋Gonatanthus pumilus等29種藥用植物于2013—2014年間采自云南大理、臨滄、麗江等地區，由大理大學藥學與化學學院姜北教授、張德全博士鑒定；植物標本存放于大理大學藥化學院姜北教授研究組。植物樣品相關信息。見表1。

表1　29種植物樣品抗氧化實驗結果（±s，n=3）

表1　29種植物樣品抗氧化實驗結果（±s，n=3）

植物Vit C益母草(全株)臭靈丹(全株)土牛膝(全株)滇白珠(地上)刺花蓮子草(地上)金蕎麥(全株)鳳仙花(全株)苦參(地上)苦參(地下)馬尾黃連(全株)秧草(全株)云南繁縷(地上)大王馬先蒿(全株)匍匐風輪菜(全株)朝天罐(全株)大紅袍(根莖)科名唇形{ 菊{ 莧{杜鵑花{ 莧{ 蓼{鳳仙花{ 豆{ 豆{毛茛{燈心草{石竹{玄參{唇形{野牡丹豆粗提物―乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水甲醇甲醇IC50/ (μg/mL) 12.3±0.3 74.3±1.0 347.6±9.4 19.7±0.5 71.0±1.4 363.3±23.4 521.1±42.0 12.4±0.4 63.2±1.2 268.1±18.1 2 040.5±40.0 49.2±0.9 277.8±8.4 97.9±6.5 1 819.0±272.0 103.6±1.2 319.0±4.7 334.9±5.0無活性78.0±1.3 ＞2 500.0 57.9±0.4 442.6±7.1 400.7±21.6 1 950.0±40.0 49.9±3.1 86.3±1.5 69.8±4.2 57.4±1.0 11.5±0.2 10.6±0.1植物Vit C茜草(全株)腫柄菊(地上)拔毒散(全株)高河菜(地上)竹葉柴胡(全株)滇黃芩(地上)滇黃芩(地下)反瓣老鸛草(地上)反瓣老鸛草(地下)西南蠅子草(全株)午香草(地上)昆明山海棠(地上)犁頭尖(全株)曲苞芋(全株)橢圓葉花錨(全株)鐘花韭(全株)科名茜草{ 菊{錦葵{十字花{傘形{唇形{唇形{牻牛兒苗{牻牛兒苗{石竹{ 菊{衛矛{天南星{天南星{龍膽百合粗提物―乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水甲醇甲醇IC50/ (μg/mL) 12.3±0.3 69.5±1.5無活性19.3±0.0 65.5±0.3 58.6±1.8 68.9±0.9 98.0±3.7無活性53.3±1.0 408.0±56.3 18.9±0.5 374.2±8.5 21.0±0.2 81.9 10.2±0.3 18.4±0.4 4.1±0.1 11.5±0.3 89.2±3.4 353.3±18.2 12.3±0.6 59.4±0.2 9.1±0.4 18.0±0.1 66.3±1.1無活性80.7無活性75.2±0.4無活性

1.1.2試劑DPPH（1，1-二苯基-2-苦基苯肼；Al?drich Chem. Co，USA，批號：D21，140-0）；維生素C （Vit C）（AR，上海化學試劑分裝廠，批號：84-01-10）；甲醇（AR，重慶川江化學試劑公司）。

1.1.3儀器多功能酶標儀（BIO-RAD公司生產，Synergy HT型）；電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司生產，AL204型）；可調式混勻儀（大龍興創實驗儀器（北京）有限公司生產，MX-S型）；超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司，SB-25-12DT型）。

1.2方法

1.2.1植物粗提物干粉的提取取約50 g干燥的植物樣品，粉碎，用75%乙醇回流提取3次，第1次1 h，后兩次1.5 h，每次溶劑約250 mL。將3次提取的溶液合并后用旋轉蒸發儀在45℃下除去大部分溶劑，之后轉移至冷凍干燥機上充分干燥。經75%乙醇提取過的植物殘渣繼續用水回流提取，共計3次，時間和溶劑劑量與醇提一致，合并提取液后用旋轉蒸發儀在50℃下蒸餾近干，之后轉移至冷凍干燥機上充分干燥。

1.2.2供試品及Vit C溶液的配制精確稱取Vit C及各個植物樣品粗提物5 mg左右，溶解在0.5 mL超純水中，然后用超純水按比例（1∶5）稀釋成終濃度為2 500、500、100、20、4、0.8 μg/mL的樣品溶液系列濃度溶液備用，配制過程中使用超聲儀進行超聲后，每次加樣前都用渦旋器進行混勻，現配現用。

1.2.3DPPH法

1.2.3.1DPPH溶液的配制精密稱量10 mg DPPH，用甲醇溶解后，移入250 mL容量瓶中，定容，搖勻，得質量濃度為40 mg/L的DPPH儲備液，避光置于4℃冰箱備用。

1.2.3.2DPPH自由基清除率的測定在96孔培養板上依次從低到高加入6個濃度的樣品各50 μL，然后向上述每個孔中快速準確地加入150 μL DPPH液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30 min后，在酶標儀517 nm處測定吸光度；同時設置空白對照（50 μL超純水與150 μL DPPH）及陽性對照（50 μL Vit C與150 μL DPPH）。根據下面的公式計算供試品和Vit C對DPPH吸光度的百分抑制率〔8-11〕。

I（%）=［（Ablank－Asample）/ Ablank］×100%

1.2.3.3清除50%自由基時供試品濃度（IC50）的計算實驗數據采用Microsoft Office Excel 2003進行處理，以供試品濃度（μg/mL）為橫坐標，DPPH自由基清除率I（%）為縱坐標，繪制散點圖和清除率曲線，在一定質量濃度范圍內通過線性回歸分析求得線性回歸方程，根據回歸方程計算IC50值。

2　結果

按上述方法對29種植物的粗提物進行了抗氧化活性測試。見表1。

根據DPPH法檢測標準，當IC50≤50 μg/mL時說明樣品具有較強的抗氧化活性。29種藥用植物中，臭靈丹（全株）的乙醇提取物、滇白珠（全株）的乙醇提取物、反瓣老鸛草地上與地下提取物、午香草（全株）的乙醇提取物、昆明山海棠提取物、大紅袍（根莖）甲醇提取物、朝天罐（全株）甲醇提取物、腫柄菊（地上）乙醇提取物、滇黃芩地上與地下乙醇提取物等具有較好的DPPH抗氧化活性，其中反瓣老鸛草地下部分的乙醇提取物活性極好，IC50值達到了（4.1±0.1）μg/mL。用SPSS17.0軟件對反瓣老鸛草（地下）的乙醇提取物的抗氧化活性與陽性對照Vit C進行t檢驗，比較差異具有統計學意義（P＜0.01）。

3　討論

近年來自由基生物學快速發展，廣泛觸及生命科學領域，主要探究自由基的組成、清除和自由基對生物學系統的損害。目前已明確許多自由基造成的疾病機理，如癌癥、神經變性、慢性抑郁癥、動脈粥樣硬化和生理學衰老等。抗氧化劑具有清除人體自由基及疾病防治的作用〔12-15〕，對人體健康十分有益，已廣泛應用于食品、藥品工業中〔16-18〕。體外評價和篩選樣品抗氧化活性的方法很多，其中DPPH法具有穩定性好、靈敏度高、操作簡便等優點，已被廣泛用于自由基清除能力的定量分析。

本文利用DPPH方法對滇西地區29種藥用植物進行了體外抗氧化活性研究，發現了多種藥用植物提取物對DPPH自由基具有很好的清除作用，其中反瓣老鸛草地下部分提取物具有極好的抗氧化能力，是很好的天然抗氧化植物樣品。本研究為進一步探討滇西地區藥用植物抗氧化作用、追蹤活性成分、開發利用天然抗氧化物質提供了依據。

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（責任編輯毛本勇）

Research on Antioxidant Activity of 29 Herbal Medicines from West Yunnan

Zhang Xiaodong, Shen Yi, Liu Ziqi, Xu Wei, Shan Hua, Jiang Bei*
（Institute of Materia Medica, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China）

〔Abstract〕Objective: To evaluate the antioxidant activity of 29 herbal medicines from West Yunnan. Methods: The 29 medicinal plants were extracted with 75% ethanol and water successively. DPPH assay were used to measure the antioxidant activity in vitro, and the results were expressed as IC50values. Results: Nine plants, including Laggera pterodonta, Gaultheria leucocarpa, Geranium refractum, Anaphalis bulleyana, Tripterygium hypoglaucum, Campylotropis hirtella, Osbeckia opipara, Tithonia diversifolia, and Scutellaria amoena, had strong antioxidant activity. Among them, the ethanol extract of the underground part of G. refractum showed significant activity with an IC50value（4.1±0.1）μg/mL which was better than the IC50value of positive control-vitamin C. Conclusion: Nine plants had antioxidant activity and revealed the potential for further study and development with medicinal purpose.

〔Key words〕herbal medicines; antioxidant; DPPH; crude extract

［中圖分類號］R28

［文獻標志碼］A［文章標號］1672-2345（2016）02-0001-04

［基金項目］國家自然科學基金資助項目（81460532）

［收稿日期］2015-04-28［修回日期］2015-05-26

［作者簡介］張小東，碩士研究生，主要從事藥理學研究.

*通信作者：姜北，教授，博士.