HPLC法測定醫院制劑氣血雙補膠囊中阿魏酸的含量

梁　萍　彭建彪

紅河州食品藥品檢驗所，云南　蒙自　661100

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藥物研究

HPLC法測定醫院制劑氣血雙補膠囊中阿魏酸的含量

梁萍彭建彪

紅河州食品藥品檢驗所，云南蒙自661100

【摘要】目的：建立HPLC測定氣血雙補膠囊中阿魏酸含量的方法。方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色普柱(Durashell C18柱，250mm×4.6mm，5μm )；流動相：甲醇-0.085%磷酸溶液(36∶64)；檢測波長：316nm；流速:1.0ml/min;柱溫：30℃。結果：阿魏酸在0.0123～0.2458μg范圍內呈現良好的線性關系(r=0.9999)，平均回收率為99.65%(RSD=0.86%，n=6)。結論：本方法的專屬性強，準確度高，重現性良好，可用于氣血雙補膠囊的質量控制。

【關鍵詞】氣血雙補膠囊；含量測定；阿魏酸；高效液相色譜法

氣血雙補膠囊為云南省個舊市中醫院院內制劑，由當歸、黃芪等八味中藥制備而成，具有補血養肝、益氣安神的功效。當歸有活血補血，調經止痛，潤腸通便的作用。研究表明當歸的主要活性成分為阿魏酸，為含當歸制劑質量控制的主要指標。但現行的醫院制劑氣血雙補膠囊執行標準無阿魏酸的含量測定項目，為保證該制劑質量的穩定性，研究采用高效液相色譜法對處方中當歸主要活性成分阿魏酸進行研究，并對該方法進行了驗證[1]。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1260型高效液相色譜儀；Sartorius BP211D電子天平；奧豪斯AR224CN電子天平。

1.2試藥阿魏酸對照品(批號：110773-200611，中國藥品生物制品檢定所)；氣血雙補膠囊(批號：20140517、20140518、20140622、20140725，云南省個舊市中醫院)。甲醇為色譜純；磷酸為優級純；水為超純水。

2方法與結果

2.1色譜條件[2]色譜柱：Durashell C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.085%磷酸溶液(36∶64)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：316nm。理論板數按阿魏酸峰計算應不低于3000。

2.2對照品溶液的制備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加70%甲醇制成每1ml含阿魏酸12μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備[2]取裝量差異項下的本品內容物，混勻，取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，搖勻，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4陰性樣品溶液的制備按照處方工藝制備不含當歸的樣品溶液，然后按“2.3”項供試品溶液的制備方法進行處理，即得陰性樣品溶液。

2.5專屬性試驗分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，結果供試品色譜圖中呈現與對照品保留時間一致的色譜峰，陰性樣品在與阿魏酸對照品相同的保留時間處未顯色譜峰，可見其他原輔料對主成分無干擾。見圖1-3。

2.6線性關系考察分別精密吸取“2.2”中對照品溶液(每1ml含阿魏酸12.29μg)1、2、4、8、10、12、16、20μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標，對照品進樣量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線，并計算線性回歸及相關系數。結果表明：阿魏酸在0.0123～0.2458μg 范圍內與峰面積線性關系良好，其回歸方程為：Y=39.5398X-0.0478(r=0.9999)。

2.7穩定性試驗取同一氣血雙補膠囊供試品溶液，按上述色譜條件分別在0、1、2、4、8、16、24h時進樣測定，測得阿魏酸峰面積積分值分別為237.03133、235.70355、230.98601、231.42957、233.51109、234.60004、233.93927，RSD為0.93%，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8精密度試驗精密吸取對照品溶液，按上述色譜條件，連續測定6次，測得阿魏酸峰面積積分值分別為：395.38632、394.72717、394.55893、394.55948、395.34073、395.39258，RSD為0.11%，結果表明儀器精密度良好。

2.9重復性試驗取同一批號(批號20140725)樣品，按供試品溶液制備項下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測定，阿魏酸的平均含量為0.4755mg/g，RSD為0.61%，結果表明重復性良好。

2.10回收率試驗精密稱取6份供試品(批號：20140725，阿魏酸含量為0.4755mg/g)，每份約0.15g，按1∶1比例加入阿魏酸對照品，即加入阿魏酸對照品溶液(阿魏酸濃度0.1229mg/ml)0.59ml，揮去溶劑。然后按供試品溶液處理方法同法處理，將處理好的供試品溶液按含量測定方法同法測定，計算回收率，阿魏酸的平均回收率為99.70%，RSD為0.79%。結果見表2。

2.11樣品含量測定取4批氣血雙補膠囊樣品，按供試品溶液的制備方法操作，按“2.1”項下色譜條件測定阿魏酸的含量，結果見表3。

表2　阿魏酸加樣回收率試驗結果　(n=6)

表3　阿魏酸含量測定結果　(n=2)

3討論

阿魏酸是一種廣泛存在于植物中的酚酸，藥理研究發現阿魏酸具有抗血小板聚集，抑制血小板5-羥色胺釋放，

抑制血小板血栓素A2(TXA2)的生成，增強前列腺素活性，鎮痛，緩解血管痙攣等藥理活性，且毒性較低[3]。阿魏酸在阿魏、當歸、川芎、升麻、酸棗仁等中藥材中的含量較高 ，是這些中藥的有效成分之一，已經作為中成藥的質量控制指標之一。研究結果表明，采用HPLC法測定氣血雙補膠囊中阿魏酸的含量，專屬性強，峰形好，且與雜質峰基線分離，效果較為理想。此外，實驗參照2015年版《中國藥典》一部中當歸含量測定項下的提取方法，用70%甲醇加熱回流30min提取，當歸中阿魏酸較為完全。綜上所述，本法專屬性強，操作方便，準確度高，重現性良好，可以用于醫院制劑氣血雙補膠囊的質量控制。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：374-377.

[2] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：133-134.

[3] 胡益勇，徐曉玉.阿魏酸的化學和藥理研究進展[J].中成藥，2006，28(2)：253-255.

Determination of the Content of Ferulic Acid in the Capsule of Qi and Blood

LIING PingPENG Jianbiao

HongHe Prefeture Institute for Food and Drug Control, Mengzi 661100, China

Abstract:Objective To establish a HPLC method for the determination of ferulic acid in Qi and blood capsule. Methods Eighteen using C18 column chromatography (Durashell C18 column:250mm×4.6mm，5μm)；Mobile phase: methanol -0.085% phosphoric acid solution (36: 64)；Detection wavelength: 316nm；Flow rate: :1.0ml/min；Column temperature：30℃. Results Ferulic acid showed a good linear relationship in the range of 0.0123 μg to 0.2458μg(r=0.9999)，The average recovery was 99.65% (RSD=0.86%, n=6). Conclusion The method has strong specificity and high accuracy,good reproducibility, can be used for the quality control of Qi and blood capsule.

Key words:Qi and Blood Double Fill Capsule；Determination；Ferulic Acid；HPLC

【中圖分類號】R284.1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)09-0009-03

(收稿日期：2016.03.19)