B細胞特異性激活蛋白在神經內分泌腫瘤中的表達*

魯永蘭， 楊文秀*

(貴州醫科大學 病理學教研室， 貴州 貴陽　550004)

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B細胞特異性激活蛋白在神經內分泌腫瘤中的表達*

魯永蘭**， 楊文秀***

(貴州醫科大學 病理學教研室， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 觀察B細胞特異性激活蛋白(PAX5)在神經內分泌腫瘤(NEN)中的表達。方法： 經證實為NEN病例標本56例，用免疫組化SP法檢測其石蠟包埋腫瘤組織中PAX5和Ki67表達，比較PAX5在不同腫瘤大小(腫塊直徑≤2 cm或>2 cm)、Ki67表達率(Ki67≤20%或>20%)及TNM分期(早期或晚期)中的表達情況。結果： PAX5在Ki67>20%病例中的陽性表達率(59.52%)高于Ki67≤20%病例(21.43%)，在晚期病例(62.16%)高于早期病例(26.32%)，差異有統計學意義(P<0.05)；在不同腫塊直徑病例中的陽性率比較，差異無統計學意義(P=0.78)。結論： PAX5在NEN中有一定表達，表達與腫瘤增殖活性(Ki67表達率)及TNM分期有關。

[關鍵詞]B細胞特異性激活蛋白； 神經內分泌； 腫瘤； 免疫組織化學； 染色法，SP

神經內分泌腫瘤(neuroendocrine neoplasm，NEN)是一種來源于具有激素分泌功能的神經內分泌細胞的異質性腫瘤。在過去30年間，其發病率呈不斷上升趨勢[1-3]。B細胞特異性激活蛋白(B cell-specific activator protein, BSAP)又名PAX5，是一種B細胞發育和分化的重要轉移因子。目前研究熱點主要集中在與B細胞相關淋巴瘤，如急性B淋巴母細胞性淋巴瘤和慢性淋巴細胞白血病等[4-5]。近來關于PAX5表達對NEN的影響亦有報道。有研究發現，在神經母細胞瘤和小細胞肺癌(small cell lung carcinoma, SCLC)中，PAX5基因敲除會導致腫瘤細胞生存能力嚴重下降[6-7]。PAX5不僅支持癌細胞生存，也有助于癌細胞的轉移。本研究通過檢測不同部位的NEN 中PAX5的表達，分析其與腫瘤臨床分期、腫塊大小及腫瘤增殖活性(Ki67)的關系。

1對象與方法

1.1臨床資料

收集2009年1月～2013年7月經病理證實為NEN的標本56例，男性37例，女性19例；年齡20～86歲，中位年齡52歲。NEN TNM臨床分期為Ⅰ期3例，Ⅱ期16例，Ⅲ期20例及Ⅳ期17例；發生部位為胃10例，腸8例，胰腺1例，肺22例，宮頸3例，卵巢2例，食道2例，鼻咽3例，皮膚4例及膀胱1例。

1.2方法

PAX5和 Ki67蛋白的表達，采用 SP法檢測，取4 μm厚打膠白片，經烘烤、脫蠟、抗原修復、血清封閉后，加入一抗(PAX5稀釋度1∶25，Ki67稀釋度1∶100)，4 ℃孵育過夜， 0.01 mol/L的PBS(pH7.2)清洗3次，加入二抗(通用型)37 ℃孵育30 min，0.01 mol/L的PBS(pH7.2)清洗3次，DAB染色，自來水沖洗、脫水透明、封片。以0.01 mol/L的PBS(pH7.2)代替一抗作為空白對照，以組織中的淋巴細胞作為PAX5內對照。結果判斷：PAX5和Ki67陽性信號定位于細胞核，陽性染色為細胞內具有清晰可見和定位準確的棕黃色顆粒。

1.3觀察指標

以腫塊最大直徑(腫塊直徑≤2 cm與>2 cm)、Ki67陽性表達率(Ki67≤20%與>20%)及TNM分期(早期與晚期)為判斷標準對NEN病例進行分組，比較PAX5蛋白在相應兩組病例中的表達情況。

1.4統計學方法

數據采用SPSS 19.0統計軟件處理，計數資料以百分數(%)表示，數據比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

經SP染色后，PAX5和Ki67陽性信號定位于細胞核，核內可見清晰的棕黃色顆粒(圖1)。Ki67>20%病例的PAX5陽性表達率高于Ki67≤20%病例，差異有統計學意義(χ2=6.09，P=0.01)；晚期(Ⅲ和Ⅳ期)病例的PAX5陽性表達率高于早期(Ⅰ期和Ⅱ期)病例，差異有統計學意義(χ2=6.45，P=0.01)；腫塊直徑≤2 cm病例的PAX5陽性表達率和腫塊直徑>2cm病例比較，差異無統計學意義(χ2=0.08，P=0.78)。見表1。

注：A為 PAX5，B為Ki67≤20%，C為 Ki67>20%圖1　NEN中PAX5與Ki67的表達(SP法，×400)Fig.1　Expression of PAX5 and Ki67 in NENs of stomach

比較參數nPAX5表達(n,%)陽性陰性χ2P腫塊最大徑(cm) ≤22110(47.62)11(52.38)0.080.78 >23518(51.43)17(48.57)Ki67表達 ≤20%143(21.43)11(78.57)6.090.01 >20%4225(59.52)17(40.48)TNM分期 Ⅰ期和Ⅱ期195(26.32)14(73.68)6.450.01 Ⅲ期和Ⅳ期3723(62.16)14(37.84)

3討論

PAX是一類由9個基因組成的高度保守的、對哺乳動物細胞分化及腫瘤形成具有重要調控作用的一組基因控制家族。PAX5主要對B細胞特異性結合蛋白進行編碼，是一種B細胞發育和分化的重要轉移因子[8]。目前研究熱點主要集中在與B細胞相關淋巴瘤，如慢性淋巴細胞白血病和霍奇金淋巴瘤等。近來已有學者關注到PAX5對NEN的影響。Nguyen等[9]檢測了53例來自不同部位的小細胞癌PAX5蛋白，發現其陽性率為79.2%。本研究采用SP法檢測56例NEN中PAX5蛋白表達情況，分析PAX5表達與本組病例部分臨床病理特征的關系;結果發現PAX5表達與腫瘤大小無明顯關系(P>0.05)，而與Ki67指數及腫瘤臨床分期密切相關(P<0.05);PAX5的陽性表達在Ki67>20%的NEN病例高于Ki67≤20%的病例；在晚期NEN病例高于早期病例，這與Panzuto等[10]的研究結果基本一致。在NEN的診斷中，國際公認的最可靠的標記是CgA、Syn和CD56等[11]。本研究結果表明，PAX5在NEN中有一定程度表達，表達與腫瘤增殖活性(Ki67表達率)、TNM分期有關。提示PAX5陽性表達可能是NEN病理診斷的重要補充。關于PAX5表達對NENs臨床病理特征和預后的影響的機制有待于進一步的深入研究。

4參考文獻

[1] Scherubl H, Streller B, Stabenow R, et al. Clinically detected gastroenteropancreatic neuroendocrine tumors are on the rise: epidemiological changes in Germany[J]. World J Gastroenterol, 2013 (47): 9012-9019.

[2] Starzynska T, Deptala A, Krolicki L, et al. Colorectal neuroendocrine neoplasms-management guidelines (recommended by the Polish Network of Neuroendocrine Tumours)[J]. Endokrynol Pol, 2013(6): 494-504.

[3] Fraenkel M, Kim M, Faggiano A, et al. Incidence of gastroenteropancreatic neuroendocrine tumours: a systematic review of the literature[J]. Endocr Relat Cancer, 2014 (3): 153-163.

[4] Santoro A, Bica MG, Dagnino L, et al. Altered mRNA expression of PAX5 is a common event in acute lymphoblastic leukaemia[J]. Br J Haematol, 2009 (6): 686-689.

[5] Janczar K, Janczar S, Pastorczak A, et al. Preserved global histone H4 acetylation linked to ETV6-RUNX1 fusion and PAX5 deletions is associated with favorable outcome in pediatric B-cell progenitor acute lymphoblastic leukemia[J]. Leuk Res, 2015 (12): 1455-1461.

[6] Sica G, Vazquez MF, Altorki N, et al. PAX-5 expression in pulmonary neuroendocrine neoplasms: its usefulness in surgical and fine-needle aspiration biopsy specimens[J]. Am J Clin Pathol, 2008 (4): 556-562.

[7] 王樂民, 張群, 王曉虹. 支氣管類癌的外科治療及預后分析[J]. 中國醫學工程, 2013 (2): 80.

[8] Wang YH, Yang QC, Lin Y, et al. Chromogranin A as a marker for diagnosis, treatment, and survival in patients with gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm[J]. Medicine (Baltimore), 2014 (27): e247.

[9] Nguyen R, Jett K, Harris GJ, et al. Benign whole body tumor volume is a risk factor for malignant peripheral nerve sheath tumors in neurofibromatosis type 1[J]. J Neurooncol, 2014 (2): 307-313.

[10]Panzuto F, Boninsegna L, Fazio N, et al. Metastatic and locally advanced pancreatic endocrine carcinomas: analysis of factors associated with disease progression[J]. J Clin Oncol, 2011 (17): 2372-2377.

[11]Al Omar SY, Marshall E, Middleton D, et al. Increased numbers but functional defects of CD56+CD3+ cells in lunger cancer[J]. Int Immunol, 2012 (7):409-415.

(2016-02-25收稿，2016-04-30修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 劉華

Expression of PAX5 in Neuroendocrine Neoplasms

LU Yonglan, YANG Wenxiu

(DepartmentofPathology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004 ,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To observe the expression of B cell-specific activator protein (PAX5) in neuroendocrine neoplasms(NENs). Methods: 56 confirmed NEN cases specimens were enrolled in this study. Immunohistochemical SP method was adopted to detect the expression of Pax5 and Ki67 in paraffin embedding tumor tissues. The positive expression rates of Pax5 was compared in different tumor size (mass diameter≤2 cm or>2 cm), in different Ki67 expression rates (Ki67≤20% or>20%) and in different TNM stage (early or late stage). Results: The positive expression rate of Pax5 in Ki67>20% cases was 59.52%, significantly higher than 21.43% in Ki67 ≤ 20% cases(P<0.05). The positive expression rate of Pax5 in late stage was 62.16%, significantly higher than 26.32% in early stage(P<0.05).There was no statistically significant difference in positive expression rate of Pax5 between different tumor size (P=0.78). Conclusion: There is a certain degree of expression of Pax5 in NENs, which is related to the proliferation activity of the tumor (Ki67 expression rate) and the TNM stage.

[Key words]B cell-specific activator protein; neuroendocrine; neoplasm; immunohistochemistry; staining method，SP

*[基金項目]國家自然科學基金項目(81100299)

[中圖分類號]R736

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)05-0567-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.05.018

**貴州醫科大學2012級碩士同等學歷研究生，現在安順市人民醫院工作

***通信作者 E-mail:ypq1964@163.com

網絡出版時間：2016-05-13網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160513.2059.028.html